《從生麥芽中提取亞精胺的方法實證研究》10000字（論文）

從生麥芽中提取亞精胺的方法實證研究目錄TOC\o"1-2"\h\u15487第一章前言 116925一、實驗背景 13523二、實驗?zāi)康呐c意義 74098第二章實驗部分 710652一、五種不同溶劑的提取實驗 719451二、正交設(shè)計優(yōu)化提取條件 1626313第三章實驗結(jié)果與討論 20亞精胺作為一種廣泛存在于生物體中的多胺，在2016年細胞自噬機制獲得諾貝爾生理學(xué)獎與醫(yī)學(xué)獎后得到了更多的關(guān)注。細胞自噬是一種生物體自我清潔的過程，它能將老化或有害的成分分解并重新利用。大量研究表明，亞精胺能夠通過激活細胞自噬產(chǎn)生一系列的治療和保健作用，包括抗衰老、抗癌、保護心腦血管等。生麥芽中具有含量可觀的亞精胺和諸多營養(yǎng)物質(zhì)，但是其在生產(chǎn)精面粉和釀酒中常常被棄用或是作為飼料，麥芽中的營養(yǎng)未被全部利用。其次，關(guān)于麥芽中亞精胺的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)也尚未建立起來。綜上所述，本實驗計劃利用正交設(shè)計的方法，以總生物堿含量：總多糖含量的值作為評價指標(biāo)，優(yōu)化從生麥芽中提取亞精胺的食品級工藝，為建立相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立以及亞精胺的分離純化提供依據(jù)，為后續(xù)高亞精胺含量的生麥芽提取物的成果轉(zhuǎn)化提供參考。關(guān)鍵詞：亞精胺；生麥芽；正交設(shè)計；第一章前言一、實驗背景(一)、亞精胺及其生理功能1.亞精胺性質(zhì)及生物合成途徑：多胺幾乎存在于所有動植物體內(nèi)，在生物體生長發(fā)育的過程中起著不可或缺的作用。亞精胺（Spermidine），又被稱為精脒，化學(xué)式為C7H19N3，分子量為145.25，一個具有代表性的多胺分子，易溶于水、醇和醚類。它的結(jié)晶初次于1674年被荷蘭科學(xué)家列文虎克在精液中發(fā)現(xiàn)，而其全合成在1924年由Rosenheim等人完ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Dudley</Author><Year>1924</Year><RecNum>1</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[1]</style></DisplayText><record><rec-number>1</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="2far2fa0przpd8er5v8xzxp3vx9tds299s92"timestamp="1618820084">1</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Dudley,H.W.</author><author>Rosenheim,M.C.</author><author>Rosenheim,Otto</author></authors></contributors><titles><title>Chemicalconstitutionofspermine.I.Isolationofsperminefromanimaltissues,andthepreparationofitssalts</title><secondary-title>Biochem.J.</secondary-title><alt-title>BiochemicalJournal</alt-title></titles><periodical><full-title>Biochem.J.</full-title><abbr-1>BiochemicalJournal</abbr-1></periodical><alt-periodical><full-title>Biochem.J.</full-title><abbr-1>BiochemicalJournal</abbr-1></alt-periodical><pages>1263-72</pages><volume>18</volume><keywords><keyword>Tissue(animal,sperminefrom)</keyword></keywords><dates><year>1924</year></dates><isbn>0264-6021</isbn><accession-num>1925:8415</accession-num><urls></urls><electronic-resource-num>10.1042/bj0181263</electronic-resource-num><remote-database-name>CAPLUS</remote-database-name><remote-database-provider>AmericanChemicalSociety.AllRightsReserved.</remote-database-provider><language>languageunavailable</language></record></Cite></EndNote>[\o"Dudley,1924#1"1]。亞精胺在生物體內(nèi)各個細胞和組織中均可檢測到，說明其分布廣泛，作用多樣。圖1亞精胺（C7H19N3）結(jié)構(gòu)式機體主要經(jīng)由三種途徑獲取亞精胺：內(nèi)源性合成、腸道微生物代謝以及從食物中攝取ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"Bardocz,1995#27"2]，精氨酸和S-腺苷甲硫氨酸（SAM）能在精氨酸脫羧酶（ADC）鳥氨酸脫氫酶（OCD），S-腺苷甲硫氨酸脫羧酶（S-AdoMetDC），亞精胺合酶、精胺合酶等催化下先反應(yīng)產(chǎn)生腐胺再生成亞精胺，其分解則是乙?；笱趸?。亞精胺的合成過程能夠?qū)AM（參與生物體內(nèi)眾多甲基化反應(yīng)和表觀遺傳學(xué)調(diào)控）和NO（一種重要的信號分子，其能擴張血管，保護心臟不適應(yīng)重構(gòu)，影響線粒體的生物發(fā)生和功能，并具有巨大的免疫調(diào)節(jié)作用）兩個維持正常生理狀態(tài)的化合物產(chǎn)生一定的影響ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Lee</Author><Year>2011</Year><RecNum>28</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[3]</style></DisplayText><record><rec-number>28</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="2far2fa0przpd8er5v8xzxp3vx9tds299s92"timestamp="1618825536">28</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Lee,NicoleK.L.</author><author>MacLean,HelenE.</author></authors></contributors><auth-address>DepartmentofMedicine,AustinHealth,UniversityofMelbourne,Heidelberg,Australia.</auth-address><titles><title>Polyamines,androgens,andskeletalmusclehypertrophy</title><secondary-title>J.Cell.Physiol.</secondary-title><alt-title>JournalofCellularPhysiology</alt-title></titles><periodical><full-title>J.Cell.Physiol.</full-title><abbr-1>JournalofCellularPhysiology</abbr-1></periodical><alt-periodical><full-title>J.Cell.Physiol.</full-title><abbr-1>JournalofCellularPhysiology</abbr-1></alt-periodical><pages>1453-1460</pages><volume>226</volume><number>6</number><keywords><keyword>Cellproliferation</keyword><keyword>Musclehypertrophy(polyamines,androgens,andskeletalmusclehypertrophy)</keyword><keyword>Androgenreceptors</keyword><keyword>Androgens</keyword><keyword>PolyaminesRole:BSU(Biologicalstudy,unclassified),BIOL(Biologicalstudy)(polyamines,androgens,andskeletalmusclehypertrophy)</keyword><keyword>reviewpolyamineandrogenmusclehypertrophy</keyword></keywords><dates><year>2011</year></dates><isbn>0021-9541</isbn><accession-num>2011:325125</accession-num><urls></urls><electronic-resource-num>10.1002/jcp.22569</electronic-resource-num><remote-database-name>CAPLUS</remote-database-name><remote-database-provider>AmericanChemicalSociety.AllRightsReserved.</remote-database-provider><language>English</language></record></Cite></EndNote>[\o"Lee,2011#28"3]。由于亞精胺具有裸露的氨基，其易被質(zhì)子化而帶上正電荷，帶負電荷的生物大分子如核酸等容易與其形成復(fù)合物而使亞精胺處于非游離狀態(tài)：與DNA結(jié)合可在一定程度上影響基因的表達和穩(wěn)定性，用亞精胺合成抑制劑DFMO處理腫瘤細胞，會破壞其染色質(zhì)的正常結(jié)構(gòu)。與RNA結(jié)合則可維持核酸分子的穩(wěn)定構(gòu)象，調(diào)節(jié)翻譯過程ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"Bardocz,1995#27"2,\o"Igarashi,2010#31"4]。圖2亞精胺的體內(nèi)合成和代謝2.亞精胺的生物活性亞精胺在植物和動物的生長發(fā)育和生理過程中都扮演著重要的角色。大量研究表明，外源性的亞精胺通過穩(wěn)定膜結(jié)構(gòu)ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"Walker,1985#29"5]，清除ROSADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"Duan,2008#30"6]等機制提高某些植物的抗逆性；在動物體內(nèi)，亞精胺還有更加廣泛的作用。自噬作用確保細胞的內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定和蛋白質(zhì)平衡，通過將細胞質(zhì)物質(zhì)控制地隔離到雙膜自噬體中，自噬將大分子（包括蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和核酸）或整個細胞器導(dǎo)向溶酶體，使受損的、有潛在毒性的細胞器和對生物體有害蛋白質(zhì)聚集體的降解，從而去除和回收會在衰老過程中積累的“廢物”，提高能量的利用效率，延緩細胞和組織的老化ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Klionsky</Author><Year>2007</Year><RecNum>125</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[7]</style></DisplayText><record><rec-number>125</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="2far2fa0przpd8er5v8xzxp3vx9tds299s92"timestamp="1620459044">125</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Klionsky,DanielJ.</author></authors></contributors><auth-address>LifeSciencesInstitute,UniversityofMichigan,AnnArbor,MI,USA.</auth-address><titles><title>Autophagy:fromphenomenologytomolecularunderstandinginlessthanadecade</title><secondary-title>Nat.Rev.Mol.CellBiol.</secondary-title><alt-title>NatureReviewsMolecularCellBiology</alt-title></titles><periodical><full-title>Nat.Rev.Mol.CellBiol.</full-title><abbr-1>NatureReviewsMolecularCellBiology</abbr-1></periodical><alt-periodical><full-title>Nat.Rev.Mol.CellBiol.</full-title><abbr-1>NatureReviewsMolecularCellBiology</abbr-1></alt-periodical><pages>931-937</pages><volume>8</volume><number>11</number><keywords><keyword>Autophagy(historyofautophagyresearch)</keyword><keyword>History(ofautophagyresearch)</keyword><keyword>reviewautophagyresearchhistory</keyword></keywords><dates><year>2007</year></dates><isbn>1471-0072</isbn><accession-num>2007:1199234</accession-num><urls></urls><electronic-resource-num>10.1038/nrm2245</electronic-resource-num><remote-database-name>CAPLUS</remote-database-name><remote-database-provider>AmericanChemicalSociety.AllRightsReserved.</remote-database-provider><language>English</language></record></Cite></EndNote>[\o"Klionsky,2007#125"7]。最常用的主動引發(fā)保護性自噬的方法是熱量限制，即改變自身的飲食習(xí)慣，如間歇性斷食等ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>deCabo</Author><Year>2014</Year><RecNum>37</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[8]</style></DisplayText><record><rec-number>37</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="2far2fa0przpd8er5v8xzxp3vx9tds299s92"timestamp="1618895564">37</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>deCabo,Rafael</author><author>Carmona-Gutierrez,Didac</author><author>Bernier,Michel</author><author>Hall,MichaelN.</author><author>Madeo,Frank</author></authors></contributors><auth-address>TranslationalGerontologyBranch,NationalInstituteonAging,NationalInstitutesofHealth,Baltimore,MD,USA.</auth-address><titles><title>TheSearchforAntiagingInterventions:FromElixirstoFastingRegimens</title><secondary-title>Cell(Cambridge,MA,U.S.)</secondary-title><alt-title>Cell(Cambridge,MA,UnitedStates)</alt-title></titles><periodical><full-title>Cell(Cambridge,MA,U.S.)</full-title><abbr-1>Cell(Cambridge,MA,UnitedStates)</abbr-1></periodical><alt-periodical><full-title>Cell(Cambridge,MA,U.S.)</full-title><abbr-1>Cell(Cambridge,MA,UnitedStates)</abbr-1></alt-periodical><pages>1515-1526</pages><volume>157</volume><number>7</number><keywords><keyword>Aging(antiagingagents</keyword><keyword>antiaginginterventions)</keyword><keyword>Elixirs</keyword><keyword>Fasting</keyword><keyword>Human(antiaginginterventions)</keyword><keyword>reviewantiagingregimenelixirfastingregimen</keyword></keywords><dates><year>2014</year></dates><isbn>0092-8674</isbn><accession-num>2014:1041092</accession-num><urls></urls><electronic-resource-num>10.1016/j.cell.2014.05.031</electronic-resource-num><remote-database-name>CAPLUS</remote-database-name><remote-database-provider>AmericanChemicalSociety.AllRightsReserved.</remote-database-provider><language>English</language></record></Cite></EndNote>[\o"deCabo,2014#37"8]，但這顯然不是一種接受度高的方式。研究表明，外源性亞精胺的補充可有效地延長實驗動物的壽命，高的血液多胺濃度往往對應(yīng)著死亡率和一些疾病發(fā)病率的降低ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"Eisenberg,2009#33"9,\o"Matsumoto,2011#35"10]，當(dāng)敲除細胞自噬有關(guān)基因時，這個作用隨之消失ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"Gupta,2013#32"11]。許多類似科研表明，亞精胺等多胺可作為一種較高效的熱量限制模擬物（caloricrestrictionmimetic，CRM），通過降低組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶的活性來減少組蛋白的Ac-化，上調(diào)饑餓反應(yīng)基因的表達ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"Eisenberg,2009#33"9]，在藥理學(xué)上模擬飲食限制的效果，通過誘導(dǎo)細胞自噬而發(fā)揮作用。除了延緩衰老，亞精胺的許多有益作用與其誘導(dǎo)細胞保護性自噬的能力密切相關(guān)。在腫瘤形成方面，外源性亞精胺可通過消耗免疫抑制細胞，引起免疫刺激作用來增強腫瘤發(fā)生時的免疫監(jiān)視ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"Pietrocola,2016#42"12]，腫瘤的發(fā)生和生長會在外源性亞精胺補充下減少。Matsumoto等人實驗發(fā)現(xiàn)，口服多胺產(chǎn)生菌(動物雙歧桿菌亞種乳酸乳球菌LKM512)降低衰老Crj:CD-1雌性小鼠可見皮膚腫瘤的發(fā)病率ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"Matsumoto,2011#35"10]，食用亞精胺也可緩解肝纖維化并降低小鼠肝細胞癌的發(fā)生率ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"Yue,2017#36"13]。在心血管疾病方面，LaRocca等人研究發(fā)現(xiàn)亞精胺通過降低老年小鼠內(nèi)皮細胞的氧化損傷逆轉(zhuǎn)了年齡誘導(dǎo)的動脈僵硬ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"LaRoccaThomas,2013#40"14]，并減輕了高脂飲食20周內(nèi)載脂蛋白E的缺乏。高亞精胺膳食能夠有效降低人群中心血管疾病的死亡率和發(fā)病率，亞精胺通過抑制循環(huán)細胞因子，誘導(dǎo)線粒體結(jié)構(gòu)改善，增強自噬和有絲分裂等機制發(fā)揮增強心肌、擴張血管、使血壓降低以及減輕動脈粥樣硬化等作用ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"LaRoccaThomas,2013#40"14,\o"Eisenberg,2016#38"15]；在神經(jīng)調(diào)節(jié)方面，無脊椎動物模型中亞精胺可通過與離子型受體的相互作用以及誘導(dǎo)神經(jīng)元或神經(jīng)膠質(zhì)細胞自噬，抑制脫髓鞘作用來保護神經(jīng)，促進體內(nèi)神經(jīng)的修復(fù)和再生ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"Gupta,2013#32"11]，而其在哺乳動物體內(nèi)的神經(jīng)保護作用則是由亞精胺間接抑制自身免疫反應(yīng)性的T細胞活化而導(dǎo)致的ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"Yang,2016#41"16]。Velloso等人研究發(fā)現(xiàn)，在紋狀體注射精胺改善了亨廷頓氏病嚙齒動物模型的識別記憶缺陷，通過口服精氨酸聯(lián)合雙歧桿菌LKM512益生菌能上調(diào)結(jié)腸多胺，從而提高了老年小鼠的空間學(xué)習(xí)和記憶能力ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"Velloso,2009#126"17]。說明了在神經(jīng)退行性疾病中亞精胺的神經(jīng)保護作用。在改善代謝性疾病的方面，Sadasivan等人研究發(fā)現(xiàn)每天給吃高脂飲食的小鼠服用精胺可以預(yù)防肥胖和改善葡萄糖的耐受ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"Sadasivan,2014#46"18]，亞精胺可緩解因暴飲暴食而導(dǎo)致的的肥胖以及肥胖的并發(fā)癥，其機制與白色脂肪組織中的自噬誘導(dǎo)密切相關(guān)。在抵抗干細胞衰老等相關(guān)方面，Chen等人研究發(fā)現(xiàn)亞精胺能夠在體外使體細胞脫分化為成纖維細胞，即具有誘導(dǎo)多能干細胞的作用，此外還具有促進人類毛囊器官培養(yǎng)物中的毛發(fā)生長和上皮干細胞分裂的作用ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"Chen,2011#43"19]總而言之，外源性的亞精胺補充對人們抵抗衰老和維持人體各個方面正常功能有著重要的作用，Pucciarelli等人在意大利中部進行的一項橫斷面觀察顯示，老年人相比于年輕人，體內(nèi)的多胺含量較低，但在健康的90歲和100歲老人中，其含量仍保持在年輕(中年)個體的水平ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Pucciarelli</Author><Year>2012</Year><RecNum>44</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[20]</style></DisplayText><record><rec-number>44</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="2far2fa0przpd8er5v8xzxp3vx9tds299s92"timestamp="1618921206">44</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Pucciarelli,Stefania</author><author>Moreschini,Benedetta</author><author>Micozzi,Daniela</author><author>DeFronzo,GiusiS.</author><author>Carpi,FrancescoM.</author><author>Polzonetti,Valeria</author><author>Vincenzetti,Silvia</author><author>Mignini,Fiorenzo</author><author>Napolioni,Valerio</author></authors></contributors><auth-address>SchoolofBiosciencesandBiotechnologies,UniversityofCamerino,Camerino,Italy.</auth-address><titles><title>SpermidineandSpermineAreEnrichedinWholeBloodofNona/Centenarians</title><secondary-title>RejuvenationRes.</secondary-title><alt-title>RejuvenationResearch</alt-title></titles><periodical><full-title>RejuvenationRes.</full-title><abbr-1>RejuvenationResearch</abbr-1></periodical><alt-periodical><full-title>RejuvenationRes.</full-title><abbr-1>RejuvenationResearch</abbr-1></alt-periodical><pages>590-595</pages><volume>15</volume><number>6</number><keywords><keyword>Aging</keyword><keyword>Blood</keyword><keyword>Human</keyword><keyword>Longevity(spermidineandspermineareenrichedinwholebloodofnona/centenarians)</keyword><keyword>spermidinesperminebloodnonagenariancentenarian</keyword></keywords><dates><year>2012</year></dates><isbn>1549-1684</isbn><accession-num>2013:124604</accession-num><urls></urls><electronic-resource-num>10.1089/rej.2012.1349</electronic-resource-num><remote-database-name>CAPLUS</remote-database-name><remote-database-provider>AmericanChemicalSociety.AllRightsReserved.</remote-database-provider><language>English</language></record></Cite></EndNote>[\o"Pucciarelli,2012#44"20]，亞精胺的平均每日營養(yǎng)攝入量為7-25mg左右時被認為對健康有益ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"Zoumas-Morse,2007#34"21]。隨著年齡的增長，內(nèi)源性亞精胺來源日趨減少，就更要重視從食物中的攝取。(二)、生麥芽大麥芽是由禾本科植物大麥HordeurnvulgareL.的成熟的果實炮制而成。大麥?zhǔn)菄鴥?nèi)乃至世界上歷史最悠久，分布最普遍的農(nóng)作物之一，在中國大麥種植集中在少數(shù)幾個省份，其中云南是中國大麥產(chǎn)量最高的省份，約占全國的31.9%。根據(jù)中醫(yī)記載，麥芽味甜，歸脾、胃經(jīng)，主要用于益氣消食，健脾開胃，回乳除脹，多用于幫助消化，治療脾虛，乳汁積累或斷乳的等病癥。而如今的研究表明，麥芽還擁有很多重要的功效：麥芽富含食用纖維，能夠幫助消化；麥芽煎劑灌胃小鼠的實驗表明，其還有影響性激素分泌的功效ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>陳蓉</Author><Year>2008</Year><RecNum>49</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[22]</style></DisplayText><record><rec-number>49</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="2far2fa0przpd8er5v8xzxp3vx9tds299s92"timestamp="1619010986">49</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>陳蓉</author></authors></contributors><auth-address>重慶醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院中醫(yī)臨床教研室;</auth-address><titles><title>麥芽對雄性小鼠性激素水平的影響</title><secondary-title>中國藥房</secondary-title></titles><periodical><full-title>中國藥房</full-title></periodical><pages>2087-2088</pages><number>27</number><keywords><keyword>麥芽</keyword><keyword>雄性小鼠</keyword><keyword>性激素</keyword></keywords><dates><year>2008</year></dates><isbn>1001-0408</isbn><call-num>50-1055/R</call-num><urls></urls><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[\o"陳蓉,2008#49"22]；麥芽還能夠保護肝臟，調(diào)理腸道菌群、抗血小板凝聚等。麥芽藥用主要用于回乳與催乳，也有著一定的保健作用。研究表明，麥芽中的多胺含量十分可觀，包括亞精胺、精胺、腐胺ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[\o"劉俊,2004#47"23,\o"Smith,1977#50"24]，具有一定的營養(yǎng)價值。我國大麥資源豐富，大多被用來作為食品添加劑或制作大麥茶，僅有少部分被人們直接食用。在釀酒廠和精淀粉廠，麥芽大多被直接丟棄或是作為飼料供給牲畜，沒有得到充分的利用ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>辛衛(wèi)云</Author><Year>2017</Year><RecNum>48</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[25]</style></DisplayText><record><rec-number>48</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="2far2fa0przpd8er5v8xzxp3vx9tds299s92"timestamp="1619010986">48</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>辛衛(wèi)云</author><author>白明</author><author>苗明三</author></authors></contributors><auth-address>河南中醫(yī)藥大學(xué);</auth-address><titles><title>麥芽的現(xiàn)代研究</title><secondary-title>中醫(yī)學(xué)報</secondary-title></titles><periodical><full-title>中醫(yī)學(xué)報</full-title></periodical><pages>613-615</pages><volume>32</volume><number>04</number><keywords><keyword>麥芽</keyword><keyword>化學(xué)成分</keyword><keyword>藥理作用</keyword><keyword>臨床應(yīng)用</keyword><keyword>中藥</keyword></keywords><dates><year>2017</year></dates><isbn>1674-8999</isbn><call-num>41-1411/R</call-num><urls></urls><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[\o"辛衛(wèi)云,2017#48"25]。雖然麥芽含有如此豐富的營養(yǎng)和良好的保健作用，但如今市面上針對麥芽開發(fā)的食療保健產(chǎn)品卻少之又少，因此這方面存在較大的空缺。(三)、正交試驗正交試驗設(shè)計也稱正交設(shè)計(orthogonaldesign)，一般用來設(shè)計分析多因素試驗，研究每個因素對試驗結(jié)果的影響程度。其根據(jù)統(tǒng)計學(xué)原理設(shè)計出符合實驗要求的正交表(orthogonaltable)設(shè)計試驗，用數(shù)理統(tǒng)計的方法處理得到的數(shù)據(jù)，最終可得到可信度高的結(jié)論ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>王玄靜</Author><Year>2016</Year><RecNum>52</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[26]</style></DisplayText><record><rec-number>52</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="2far2fa0przpd8er5v8xzxp3vx9tds299s92"timestamp="1619158139">52</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>王玄靜</author></authors></contributors><auth-address>西北師范大學(xué)數(shù)學(xué)與統(tǒng)計學(xué)院;</auth-address><titles><title>正交試驗設(shè)計的應(yīng)用及分析</title><secondary-title>蘭州文理學(xué)院學(xué)報(自然科學(xué)版)</secondary-title></titles><periodical><full-title>蘭州文理學(xué)院學(xué)報(自然科學(xué)版)</full-title></periodical><pages>17-22</pages><volume>30</volume><number>01</number><keywords><keyword>正交試驗</keyword><keyword>最優(yōu)方案</keyword><keyword>主次順序</keyword></keywords><dates><year>2016</year></dates><isbn>2095-6991</isbn><call-num>62-1212/N</call-num><urls></urls><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[\o"王玄靜,2016#52"26]。在多因素同時變化的實驗條件下，各個因素之間的相互作用十分復(fù)雜，如果一一按照控制變量法進行分析，則工作量會非常龐大。根據(jù)正交表從多種因素組合中挑選出在統(tǒng)計學(xué)上具有特殊意義的若干個組合開展試驗，不僅降低了工作量，也能很好地觀察各個因素對試驗結(jié)果是否有顯著性影響。正交設(shè)計應(yīng)用廣泛，且結(jié)果具有合理性。在多種領(lǐng)域的方案優(yōu)化中，正交設(shè)計都表現(xiàn)出了不俗的潛力。在工程學(xué)領(lǐng)域，倪恒等人使用正交設(shè)計研究了滑坡的敏感性ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>倪恒</Author><Year>2002</Year><RecNum>51</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[27]</style></DisplayText><record><rec-number>51</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="2far2fa0przpd8er5v8xzxp3vx9tds299s92"timestamp="1619158057">51</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>倪恒</author><author>劉佑榮</author><author>龍治國</author></authors></contributors><auth-address>中國地質(zhì)大學(xué)工程學(xué)院,中國地質(zhì)大學(xué)工程學(xué)院,中國地質(zhì)大學(xué)工程學(xué)院武漢430074,武漢430074,武漢430074</auth-address><titles><title>正交設(shè)計在滑坡敏感性分析中的應(yīng)用</title><secondary-title>巖石力學(xué)與工程學(xué)報</secondary-title></titles><periodical><full-title>巖石力學(xué)與工程學(xué)報</full-title></periodical><pages>989-992</pages><number>07</number><keywords><keyword>滑坡</keyword><keyword>因素</keyword><keyword>敏感性分析</keyword><keyword>正交設(shè)計</keyword><keyword>方差分析</keyword></keywords><dates><year>2002</year></dates><isbn>1000-6915</isbn><call-num>42-1397/O3</call-num><urls></urls><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[\o"倪恒,2002#51"27]，而在生藥領(lǐng)域，很多研究都采用此方法優(yōu)選提取、分離以及分析的實驗方案。正交設(shè)計的主要流程如下，確定評分標(biāo)準(zhǔn)、水平和影響新故事，每個因素的水平數(shù)要盡量保持一致，再根據(jù)因素和水平的個數(shù)選取契合的正交表，根據(jù)正交表完成多組試驗，最后運用極差分析法等分析方法確定每個因素的顯著性和最優(yōu)的條件組合，達到篩選的目的。(四)、含量測定方法概述1.總多糖的測定方法：總多糖的測定方法有很多如堿性酒石酸銅滴定法、蒽酮-硫酸法、苯酚-硫酸法、DNS染色法以及用于測定每種糖具體含量的HPLC法。苯酚硫酸法則是生藥學(xué)領(lǐng)域使用最為廣泛的一種方法，杜洪志等人使用此法測定和分析了不同產(chǎn)地對葉百部的總多糖含量ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>杜洪志</Author><RecNum>55</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[28]</style></DisplayText><record><rec-number>55</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="2far2fa0przpd8er5v8xzxp3vx9tds299s92"timestamp="1619414202">55</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>杜洪志</author><author>陳子愉</author><author>覃春葉</author><author>丘米佳</author><author>陳志琳</author><author>張敏</author><author>李瑋</author></authors></contributors><auth-address>貴州中醫(yī)藥大學(xué);</auth-address><titles><title>不同產(chǎn)地對葉百部總多糖的含量測定</title><secondary-title>微量元素與健康研究</secondary-title></titles><periodical><full-title>微量元素與健康研究</full-title></periodical><pages>1-3</pages><keywords><keyword>對葉百部</keyword><keyword>總多糖</keyword><keyword>含量測定</keyword><keyword>苯酚—硫酸法</keyword></keywords><dates></dates><isbn>1005-5320</isbn><call-num>52-1081/R</call-num><urls></urls><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[\o"杜洪志,#55"28]；商澎等人使用苯酚硫酸法結(jié)合后續(xù)HPLC分析鑒定了當(dāng)歸總多糖以及各部位的含量ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>商澎</Author><Year>2001</Year><RecNum>60</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[29]</style></DisplayText><record><rec-number>60</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="2far2fa0przpd8er5v8xzxp3vx9tds299s92"timestamp="1619414202">60</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>商澎</author><author>楊鐵虹</author><author>賈敏</author><author>梅其炳</author><author>趙文明</author><author>曹之憲</author><author>趙德化</author></authors></contributors><auth-address>西安交通大學(xué)生物工程研究所!陜西西安710049,第四軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)部藥理學(xué)教研室!陜西西安710033,第四軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)部藥理學(xué)教研室!陜西西安710033,第四軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)部藥理學(xué)教研室!陜西西安710033,西安交通大學(xué)生物工程研究所!陜西西安710049,香港大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥理系!香港沙宣道5?</auth-address><titles><title>當(dāng)歸多糖的分離、純化及分析鑒定</title><secondary-title>第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報</secondary-title></titles><periodical><full-title>第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報</full-title></periodical><pages>1311-1314</pages><number>14</number><keywords><keyword>當(dāng)歸/分離和提純</keyword><keyword>當(dāng)歸/分析</keyword><keyword>多糖</keyword></keywords><dates><year>2001</year></dates><isbn>1000-2790</isbn><call-num>81-5046/R</call-num><urls></urls><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[\o"商澎,2001#60"29]；劉培等人同法測定了四君子湯中總多糖的含量ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>劉培</Author><Year>2020</Year><RecNum>56</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[30]</style></DisplayText><record><rec-number>56</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="2far2fa0przpd8er5v8xzxp3vx9tds299s92"timestamp="1619414202">56</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>劉培</author><author>王伊楠</author><author>張莉丹</author><author>王科</author><author>郭宇航</author><author>王鵬飛</author><author>段秀俊</author></authors></contributors><auth-address>山西中醫(yī)藥大學(xué);</auth-address><titles><title>四君子湯中總多糖、總黃酮和總皂苷提取工藝優(yōu)化</title><secondary-title>遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報</secondary-title></titles><periodical><full-title>遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報</full-title></periodical><pages>67-71</pages><volume>22</volume><number>04</number><keywords><keyword>四君子湯</keyword><keyword>總多糖</keyword><keyword>總黃酮</keyword><keyword>總皂苷</keyword><keyword>提取工藝</keyword><keyword>含量測定</keyword></keywords><dates><year>2020</year></dates><isbn>1673-842X</isbn><call-num>21-1543/R</call-num><urls></urls><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[\o"劉培,2020#56"30]足以說明苯酚硫酸法是一種可靠的分析方法。2.總生物堿的測定方法生藥中總生物堿的測定方法主要有HPLC法由于生物堿類化合物結(jié)構(gòu)的多樣性，其測定也有很多方法，酸性染料比色法，是藥典中規(guī)定的，測定總生物堿含量常用的一種方法，其具有專屬性優(yōu)秀，靈敏度高，操作簡便等優(yōu)點。姜華等人用此法測定了白屈菜中總生物堿含量ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>姜華</Author><Year>2017</Year><RecNum>63</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[31]</style></DisplayText><record><rec-number>63</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="2far2fa0przpd8er5v8xzxp3vx9tds299s92"timestamp="1619437252">63</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>姜華</author><author>李軍</author><author>徐強</author><author>馮晴爽</author><author>付興興</author></authors></contributors><auth-address>河南科技大學(xué)化工與制藥學(xué)院;</auth-address><titles><title>白屈菜中總生物堿含量的酸性染料比色法測定</title><secondary-title>時珍國醫(yī)國藥</secondary-title></titles><periodical><full-title>時珍國醫(yī)國藥</full-title></periodical><pages>854-856</pages><volume>28</volume><number>04</number><keywords><keyword>白屈菜</keyword><keyword>總生物堿</keyword><keyword>酸性染料比色法</keyword></keywords><dates><year>2017</year></dates><isbn>1008-0805</isbn><call-num>42-1436/R</call-num><urls></urls><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[\o"姜華,2017#63"31]；何立巍等人用優(yōu)化了板藍根總生物堿的提取方式并研究了其抗病毒的藥理作用ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>何立巍</Author><Year>2014</Year><RecNum>66</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[32]</style></DisplayText><record><rec-number>66</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="2far2fa0przpd8er5v8xzxp3vx9tds299s92"timestamp="1619437252">66</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>何立巍</author><author>吳曉培</author><author>楊婧妍</author><author>李祥</author><author>李偉</author></authors></contributors><auth-address>南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院;</auth-address><titles><title>板藍根總生物堿的提取純化工藝及其抗病毒藥理作用研究</title><secondary-title>中成藥</secondary-title></titles><periodical><full-title>中成藥</full-title></periodical><pages>2611-2614</pages><volume>36</volume><number>12</number><keywords><keyword>中藥化學(xué)</keyword><keyword>總生物堿</keyword><keyword>工藝條件</keyword><keyword>大孔樹脂吸附</keyword><keyword>抗病毒</keyword></keywords><dates><year>2014</year></dates><isbn>1001-1528</isbn><call-num>31-1368/R</call-num><urls></urls><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[\o"何立巍,2014#66"32]。說明作為一種較傳統(tǒng)的方法，酸性染料比色法仍能很好地完成總生物堿含量的測定。3.柱前衍生化-HPLC由于多胺類物質(zhì)沒有共軛結(jié)構(gòu)，紫外吸收吸光系數(shù)很低，所以無法直接用HPLC-UV進行檢測，而其余方法如毛細管電泳-質(zhì)譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法、ELISA法等條件復(fù)雜，價格昂貴，所以就選擇用衍生化法向多胺中引入生色團，不僅可以使其產(chǎn)生紫外吸收，也可以改善其在HPLC中的分離度。常用的衍生化試劑有丹磺酰氯（DNS-Cl）、苯甲酰氯、領(lǐng)苯二甲醛等。張一名等人用苯甲酰氯作為衍生化試劑優(yōu)化了棉花中多胺的測定方法ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>張一名</Author><Year>2016</Year><RecNum>64</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[33]</style></DisplayText><record><rec-number>64</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="2far2fa0przpd8er5v8xzxp3vx9tds299s92"timestamp="1619437252">64</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>張一名</author><author>劉玲玲</author><author>謝韞澤</author><author>孫艷香</author><author>馮雪</author><author>賈永紅</author></authors></contributors><auth-address>廊坊師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院;南京農(nóng)業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境學(xué)院;</auth-address><titles><title>應(yīng)用高效液相色譜-二極管陣列檢測器優(yōu)化棉花體內(nèi)多胺的測定方法</title><secondary-title>江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)</secondary-title></titles><periodical><full-title>江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)</full-title></periodical><pages>328-331</pages><volume>44</volume><number>08</number><keywords><keyword>棉花</keyword><keyword>幼苗組織</keyword><keyword>多胺含量</keyword><keyword>高效液相色譜</keyword><keyword>二極管陣列檢測器</keyword></keywords><dates><year>2016</year></dates><isbn>1002-1302</isbn><call-num>32-1214/S</call-num><urls></urls><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[\o"張一名,2016#64"33]，梁夢潔等人則使用丹磺酰氯柱前衍生化，測定了煙葉中七中多胺的含量ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>梁夢潔</Author><Year>2020</Year><RecNum>20</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[34]</style></DisplayText><record><rec-number>20</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="2far2fa0przpd8er5v8xzxp3vx9tds299s92"timestamp="1618820642">20</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>梁夢潔</author><author>黃麗佳</author><author>宋春滿</author><author>李應(yīng)郡</author><author>劉欣</author><author>李銀科</author><author>楊光宇</author><author>李晶</author></authors></contributors><auth-address>昆明醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院;云南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司技術(shù)中心;天津科技大學(xué)食品工程與生物技術(shù)學(xué)院;</auth-address><titles><title>柱前衍生法測定煙葉中的7種生物胺</title><secondary-title>分析試驗室</secondary-title></titles><periodical><full-title>分析試驗室</full-title></periodical><pages>953-957</pages><volume>39</volume><number>08</number><keywords><keyword>生物胺</keyword><keyword>柱前衍生</keyword><keyword>丹磺酰氯</keyword><keyword>液相色譜</keyword><keyword>煙葉</keyword></keywords><dates><year>2020</year></dates><isbn>1000-0720</isbn><call-num>11-2017/TF</call-num><urls></urls><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[\o"梁夢潔,2020#20"34]。二、實驗?zāi)康呐c意義麥芽因含有亞精胺等豐富的營養(yǎng)物質(zhì)具有很高的藥用和食用價值，而目前對這方面的研究較少，并且關(guān)于生麥芽中多胺的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)尚未完善。綜合以上的背景，本課題先通過預(yù)實驗探索大致的提取條件，再基于預(yù)實驗的結(jié)果，用正交設(shè)計的方法篩選出制備高亞精胺含量的麥芽提取物的食品級提取條件?？梢曰谶@一提取物設(shè)計眾多藥品和保健品，有效降低亞精胺提取物的生產(chǎn)成本；同時也能夠擴大在釀酒和精面粉制造過程中沒有得到充分利用的麥芽的用途，實現(xiàn)“廢物”利用，提高大麥這一農(nóng)作物的價值，為完善麥芽作為食品藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)以及從生麥芽提取物中進一步純化亞精胺提供依據(jù)；也能為后續(xù)亞精胺含量高的生麥芽提取物的成果轉(zhuǎn)化提供參考。第二章實驗部分本實驗總目標(biāo)為利用正交試驗的設(shè)計和分析方法，對從生麥芽中提取生物堿的工藝進行考察，通過一系列分析方法確定檢測指標(biāo)，優(yōu)選從生麥芽中提取生物堿特別是亞精胺的方案，為之后有關(guān)生麥芽中亞精胺的研究提供一定的依據(jù)。一、五種不同溶劑的提取實驗首先我們需要確認大致以何