醫(yī)學宮頸液基細胞學制片技術(shù)和鏡下診療專題課件

宮頸液基細胞學制片技術(shù)和鏡下診療主要內(nèi)容液基細胞學常見制片技術(shù)液基細胞學染色方法常見質(zhì)量問題與鏡下形態(tài)宮頸液基細胞學質(zhì)量控制4123（一）液基細胞學常見制片技術(shù)1.膜式技術(shù)2.沉降式技術(shù)3.離心甩片技術(shù)4.手工制片技術(shù)5.其他膜式技術(shù)最早出現(xiàn)的液基細胞學制片技術(shù)原理—膜式負壓過濾代表產(chǎn)品：TCT膜式技術(shù)制片原理宮頸脫落細胞中常見的成分：黏液，血液，炎性細胞，上皮細胞，腫瘤細胞過濾膜孔徑8um,黏液，紅細胞及部分直徑較小的炎性細胞能穿透，而上皮細胞及腫瘤細胞則被“卡”在過濾膜上，從而達到去除雜質(zhì)，收集有效診斷細胞成分的目的。膜孔阻塞會造成細胞成團細胞通透力度大小不一，中間視野細胞偏少，周邊視野細胞量聚集細胞團被外力壓扁，腺細胞團特有的三維立體結(jié)構(gòu)消失膜式技術(shù)對制片的影響北京英碩力新柏科技有限公司廣州鴻琪光學儀器科技有限公司福建泰普生物科學有限公司湖北泰康醫(yī)療設備有限公司自動化程度最高的制片技術(shù)原理—分離提?。蛔匀怀两荡懋a(chǎn)品：LCT,LBP沉降式制片技術(shù)原理一：密度分層去除雜質(zhì)宮頸脫落細胞中常見的成分：黏液，血液，炎性細胞，上皮細胞，腫瘤細胞分離提取液（密度液）比重較保存液大，細胞沉降到達兩者交界處，只有自身比重大，能克服下層分離液阻力的細胞才能繼續(xù)下降，從而被收集。樣本中的粘液，紅細胞比重輕，無法透過分離提取液，被分層在上部，繼而被去除；上皮細胞，腫瘤細胞及部分炎性細胞則被收集用來制片。沉降式技術(shù)制片原理LCTLBP原理二：重力自然沉降，優(yōu)先富集有效診斷細胞沉降式技術(shù)視頻..\企業(yè)宣傳片\LBP舊版.VOB6分56秒→8分50秒細胞自然沉降，與玻片相吸附，沒有外力施壓，某些成團的細胞保持三維立體結(jié)構(gòu)，一方面對判讀來源有幫助，另一方面，鏡下細胞不在同一層面上，需要調(diào)節(jié)微調(diào)才能觀察清楚沉降式技術(shù)對制片的影響廣州安必平醫(yī)藥科技有限公司廣州鴻琪光學儀器科技有限公司福建泰普生物科學有限公司離心甩片技術(shù)耗材離心收集細胞加入樣本，甩片制片離心甩片技術(shù)原理洗衣機“脫水”方法。利用離心機旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生的離心力，將“桶里”的細胞甩到“桶壁”上，制成涂片，再經(jīng)過染色過程完成整個制片。離心甩片技術(shù)對制片的影響1.樣本只經(jīng)過簡單的離心處理收集細胞，對樣本中的雜質(zhì)成分不能有效去除，片子質(zhì)量的好壞取決于標本質(zhì)量的好壞。2.甩片不能很好的讓細胞在玻片上均勻分布，一般來說上面少下面多。3.背景欠清晰，細胞量少，雜質(zhì)多。4.染色效果對比度不好，不鮮艷。（二）液基細胞學染色方法《細胞病理學技術(shù)制作規(guī)范及質(zhì)量控制》：宮頸細胞學制片需采用巴氏染色非宮頸細胞學制片可以采用巴氏，HE染色巴氏染色是國際通用的細胞學染色方法，在宮頸細胞學染色的效果方面，更是明顯優(yōu)于HE染色。1.顯示鱗狀上皮細胞的分化層次2.更清楚的表達核的信息3.體現(xiàn)胞漿的色彩變化4.核漿對比度更加鮮明通過巴氏染色，表層角化細胞胞漿呈現(xiàn)紅色，中層呈藍色，底層呈藍綠色；這一特點可以用來判斷雌激素水平的高低，同時也能對我們的診斷帶來幫助。小的細胞本應該呈現(xiàn)藍綠色，但是當胞漿呈紅色，核有異型時，提示鱗癌的可能性大。/forum/forum_display.asp?keyno=310086

年齡：40歲判讀結(jié)果：HSIL巴氏染色能更加清楚的表達核的信息。細胞學的診斷關(guān)鍵還是在于核的異型性改變，核膜，核染色質(zhì)，核仁等信息的表達清楚與否事關(guān)重要。/forum/forum_display.asp?keyno=311018年齡：34歲判讀意見：HSIL巴氏染色能好的顯示胞漿的色彩變化，常見的有：角化不全嗜橘黃改變，病原微生物感染嗜雙色改變，放療反應呈多彩性改變/forum/forum_display.asp?keyno=213598判讀意見：滴蟲（巴氏染色）/forum/forum_display.asp?keyno=215119

判讀意見：滴蟲（HE染色）/forum/forum_display.asp?keyno=253767判讀意見：放療反應性改變巴氏染色能使細胞，特別是腫瘤細胞有更鮮明的核漿對比效果。HE染色的腫瘤細胞往往染色較深，很難觀察清楚。/forum/forum_display.asp?classcode=108&keyno=300995&pageno=1年齡：35歲活檢結(jié)果：宮頸管腺癌個人體會：巴氏染色對于腫瘤細胞的著色，相比于HE染色，顯得“溫和很多”，一般不會出現(xiàn)細胞核完全染成看不清楚結(jié)構(gòu)的現(xiàn)象。腺細胞，或成團細胞，著色能力更加強，巴氏染色對這些細胞的觀察更加清楚。（三）液基細胞學制片常見問題與鏡下形態(tài)常見問題1.細胞量2.細胞分布3.細胞染色4.細胞清晰度5.污染1.標本滿意度評估，是否屬于不滿意標準？2.出現(xiàn)的問題是屬于個別現(xiàn)象還是整體現(xiàn)象？3.整體現(xiàn)象從哪幾方面檢查？細胞量過少解決思路：TBS報告系統(tǒng)對于樣本質(zhì)量的評判液基制片：至少應有5000個形態(tài)清晰完整的鱗狀上皮細胞。大致判斷標準：400倍鏡下，每個視野大于4個（膜式），大于8個（沉降式）。強調(diào)說明：1.計數(shù)的為鱗狀細胞，鱗化細胞也可以算。2.計數(shù)的為一張制片，而不是幾張制片的總和。3.最低計數(shù)標準適用于宮頸細胞學樣本，對于子宮全切術(shù)后，陰道取樣標本不適合。4.任何存在異常細胞的樣本均屬于合格樣本。傳統(tǒng)涂片最低細胞量在8000-12000個。液基制片最低細胞數(shù)量為5000個。以保存完好，形態(tài)清晰的鱗狀上皮做為計數(shù)依據(jù)。1.計數(shù)的為鱗狀細胞，鱗化細胞也可以算。2.計數(shù)的為一張制片，而不是幾張制片的總和。3.最低計數(shù)標準適用于宮頸細胞學樣本，對于子宮全切術(shù)后，陰道取樣標本不適合。4.任何存在異常細胞的樣本均不再要求細胞量達到最低標準。液基涂片中最低鱗狀上皮細胞數(shù)量（5000個細胞／每張）參考指南目鏡/物鏡抹片直徑N18/10

細胞（個）／視野N20/10

細胞（個）／視野N22/10

細胞（個）／視野N18/40

細胞（個）／視野N20/40

細胞（個）／視野N22/40

細胞（個）／視野13mm沉降式95.2118.3143.26.08.49.017mm55.769843.54.35.220mm膜式40.35060.52.53.13.8一張非常滿意的液基細胞涂片應含有4－7萬細胞滿意的制片效果：鱗狀細胞量(Bethesda2001):40000~70000細胞

鱗狀上皮細胞數(shù)量過少的原因：1.取樣環(huán)節(jié)：取樣刷過軟，取樣醫(yī)生用力過小2.分泌物過多，取樣前沒有擦拭干凈3.制片操作環(huán)節(jié)：抽吸力度過大，轉(zhuǎn)移樣本量過少，玻片吸附力差傳統(tǒng)涂片和液基制片都應具有足夠的移形區(qū)成分，至少需要10個保存完好的宮頸管上皮細胞或者鱗狀化生細胞。單個，成團的頸管細胞都可以做為計數(shù)。1.子宮全切術(shù)后婦女的標本不用計數(shù)。2.如果病例診斷為HSIL或者CA，就不用報告有無宮頸管細胞。3.老年萎縮性樣本，難以區(qū)分基底層，副基底層和鱗狀化生細胞1.細胞量過多的表現(xiàn)有哪些？2.出現(xiàn)的是個別現(xiàn)象還是整體現(xiàn)象？3.出現(xiàn)的為整體現(xiàn)象時要考慮哪些因素？細胞量過多解決思路：

細胞量整體過多時要考慮以下因素：1.吸附力影響2.轉(zhuǎn)移標本量過多3.振蕩不充分1.個別現(xiàn)象還是整體現(xiàn)象？2.個別現(xiàn)象考慮什么原因？整體現(xiàn)象考慮什么原因？細胞分布不均勻解決思路

個別制片細胞分布不均1.標本自身原因：粘液，血液過多2.玻片吸附力不穩(wěn)定整體制片細胞分布不均勻1.玻片吸附力低2.技術(shù)自身缺陷1.個別現(xiàn)象還是整體現(xiàn)象？2.染色深了還是染色淺了？3.細胞核還是細胞漿的染色問題?4.影響染色的因素有哪些？染色問題解決思路

巴氏染色的幾點基本常識：1.染色原理：物理作用，化學作用。2.染料分類：堿性染料，酸性染料。巴氏染色相關(guān)的影響因素1.時間2.溫度3.PH值4.固定是否及時5.脫水是否干凈PH值當染色效果通過調(diào)節(jié)時間長短，考慮了溫度變化后，仍然不能獲得滿意效果。需要考慮染液自身或者次緩沖液的PH值。在堿性環(huán)境下蘇木素容易著色，伊紅，亮綠，橘黃不容易著色；反之亦然。固定不及時核染色質(zhì)信息表達不清晰，胞漿透明效果差。脫水不干凈整片細胞顏色單一，不鮮艷，常可見背景中有小水珠。干燥現(xiàn)象表現(xiàn)：鱗狀上皮細胞胞漿里出現(xiàn)深褐色斑點原因：片子染色完成后，封片以前在空氣中暴露時間過久所致1.制片過程中的交叉污染2.外源性污染污染

如何鑒別制片污染如果不注意制片環(huán)境及操作流程，制片中經(jīng)常會見到污染成分。特別是一些形態(tài)與念珠菌類似的污染菌，往往會影響到我們的判讀結(jié)果，可以從以下幾個方面加以鑒別：1.，看整體：污染菌常漂浮在片子中，或者是單獨出現(xiàn)背景中，多的時候彼此纏繞如雜草一般。念珠菌感染則常常串起在鱗狀上皮團之間。2，看反應性改變：污染菌不引起細胞的增生，也不引起細胞的蟲蛀樣改變及嗜雙色改變。念珠菌感染可以引起鱗狀上皮的普遍性增生，有較明顯的反應性改變。3，看具體形態(tài)：污染菌染色常較淺，多為灰紅色或藍綠色，念珠菌為紅色；污染菌無竹節(jié)狀典型特征，多為面條狀或串珠狀；污染菌的芽孢不如念珠菌典型，或沒有。4，看出現(xiàn)概率（很簡單也很重要）：一批制片中如果出現(xiàn)菌絲的比例過高（個人覺得超過30%），首先要考慮污染。如何解決制片污染1，徹底清洗機器管道2，檢查載玻片，蓋玻片是否清潔3，更換自配的試劑，特別要注意清洗試劑瓶，污染菌往往長在瓶壁與瓶底4，實驗室環(huán)境差的話，建議安裝紫外線燈交流，討論在宮頸液基細胞學制片中，有些少見的東西，見過一次就不會再忘記，問題是當它初次出現(xiàn)的時候，我們認識它嗎？/forum/forum_display.asp?keyno=298540/forum/forum_display.asp?keyno=293946/forum/forum_display.asp?keyno=207890判讀意見：吳策線蟲屬班氏絲蟲型微絲蚴/forum/forum_display.asp?keyno=303175/forum/forum_display.asp?keyno=207888判讀意見：蟯蟲卵/forum/forum_display.asp?classcode=108&keyno=283637&pageno=1判讀意見：鐮刀菌/forum/forum_display.asp?keyno=16654判讀意見：鏈格孢菌屬/forum/forum_display.asp?keyno=19581單細胞藻類病例討論制片存在哪些質(zhì)量問題？1.細胞量過多2.染色過深3.雜質(zhì)（粘液）去除不干凈4.成團細胞觀察不清楚解決制片問題以后病例討論結(jié)果第一次制片判讀意見：HSIL第二次制片判讀意見：HSV病理診斷中最大的陷阱是人為造成的。病理診斷醫(yī)生重視制片質(zhì)量問題，是對自己的保護。（四）液基細胞學制片質(zhì)量控制

好的液基細胞學制片取決于質(zhì)量優(yōu)異的液基細胞學制片產(chǎn)品，取決于責任心強的液基細胞學制片技術(shù)員，取決于懂得制片技術(shù)的細胞病理診斷醫(yī)生對質(zhì)量的控制。網(wǎng)絡上很多爭論激烈的帖子，其實是由于制片效果不好，細胞形態(tài)觀察不清楚所造成的。實際工作中