葛根與枸杞對小鼠脂肪肝的影響

開題報告

論文題目：葛根與枸杞對小鼠脂肪肝的影響對比研究方向：植物生物化學(xué)

研究生姓名：解婧

導(dǎo)師姓名：陳志論文選題的國內(nèi)外研究現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢肝病至今仍是人類沉重的健康負(fù)擔(dān)和主要死因之一。究其原因主要為生活方式的改變導(dǎo)致肥胖、糖尿病、嗜酒及其相關(guān)脂肪性肝病(FLD)增加迅速。FLD疾病譜包括單純性脂肪肝、脂肪性肝炎、肝硬化，甚至肝細(xì)胞癌；臨床上則分為酒精性肝病(ALD)和非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)兩大類型。隨著社會老齡化以及慢性病毒性肝炎等其他肝病被控制，F(xiàn)LD現(xiàn)已成為肝病相關(guān)殘疾和死亡越來越重要的原因。此外，NAFLD還與糖尿病和心血管疾病的發(fā)病密切相關(guān)。FLD的防治不但是臨床醫(yī)學(xué)問題，而且為預(yù)防醫(yī)學(xué)、社會醫(yī)學(xué)和衛(wèi)生行政主管部門共同面臨的重大課題。脂肪肝的研究進(jìn)展脂肪肝的病因諸多，包括飲酒過量、代謝性疾病、藥物和營養(yǎng)不良等。脂肪肝疾患可以主要由一種病因引起，也可以由多種病因同時作用或先后參與。在不同的時期、不同的國家和地區(qū)及不同人群中，脂肪肝的發(fā)病率及病因分布不一。目前在發(fā)達(dá)國家和地區(qū)，酒精中毒、肥胖、糖尿病是脂肪肝的3大病因，營養(yǎng)不良性脂肪肝僅流行于部分經(jīng)濟(jì)落后地區(qū)，單純遺傳因素引起的代謝性脂肪肝非常少見。故以下討論的脂肪肝主要為酒精性脂肪肝和非酒精性脂肪肝，主要包括肥胖、糖尿病和高脂血病所致的脂肪肝。病理病機(jī)食物中的脂肪經(jīng)水解酶消化后,其乳糜微粒(主要成分是甘油三酯)被小腸上皮吸收入血。血的乳糜微粒有3條去路:(1)分解后成為肌肉活動的能源;(2)儲存在脂肪組織作為潛在能源;(3)轉(zhuǎn)運(yùn)至肝臟進(jìn)行代謝。轉(zhuǎn)運(yùn)至肝臟的甘油三酯與載脂蛋白結(jié)合成極低密度脂蛋白(VLDL)顆粒分泌入血液。如果甘油三酯產(chǎn)生量多,或極低密度脂蛋白量少,造成甘油三酯在肝內(nèi)堆積,則形成脂肪肝。

成因：(1)酒是罪魁,長期飲酒,導(dǎo)致酒精中毒,致使肝內(nèi)脂肪氧化減少,慢性嗜酒者近60％發(fā)生脂肪肝,20％～30％最終將發(fā)展為肝硬化。(2)長期攝入高脂飲食或長期大量吃糖、淀粉等碳水化合物,使肝臟脂肪合成過多。(3)肥胖,缺乏運(yùn)動,使肝內(nèi)脂肪輸入過多。(4)糖尿病。(5)肝炎。(6)某些藥物引起的急性或慢性肝損害

脂肪肝模型的研究進(jìn)展酒精性脂肪肝模型

（1）急性酒精性脂肪肝模型（2）慢性酒精性脂肪肝模型非酒精性脂肪肝模型

（1）營養(yǎng)失調(diào)性脂肪肝模型（2）高脂性脂肪肝模型（3）營養(yǎng)不良性脂肪肝模型（4）禁食大鼠脂肪肝模型脂肪肝的危害肝臟具有消化、解毒、合成、免疫、貯存等功能，是動物機(jī)體一類組織器官。脂肪肝是肝細(xì)胞發(fā)生脂肪變性的一種脂類代謝紊亂性疾病，組織學(xué)表現(xiàn)為肝細(xì)胞胞漿內(nèi)充滿脂肪滴（三酰甘油）。脂肪肝是由多種原因引起的脂類代謝障礙,使肝細(xì)胞中脂肪含量異常增加的一種疾病,肝臟在正常情況下總脂肪量不超過肝重的5%,而脂肪肝的患者總脂肪量可高達(dá)肝重的40%～50%,肝病患者治療過程中食物攝入過多,活動減少,極易引起脂肪肝,可導(dǎo)致肝功能反復(fù)異常,不易恢復(fù),甚至形成肝硬化,預(yù)后不良。脂肪肝一般可分為急性和慢性2種。急性脂肪肝比較少見,臨床癥狀表現(xiàn)為疲勞、惡心、嘔吐和不同程度的黃疸,并可短期內(nèi)發(fā)生肝昏迷、腎衰、肝硬化，嚴(yán)重者可在數(shù)小時死于并發(fā)癥。慢性較為常見,起病緩慢、隱匿,病程漫長,早期沒有明顯的臨床癥狀,一般是在做B超時偶然發(fā)現(xiàn),部分病人可出現(xiàn)食欲減退、惡心、乏力、肝區(qū)疼痛、腹脹,以及右上腹脹滿和壓迫感。由于這些癥狀沒有特異性,與一般的慢性胃炎、膽囊炎相似,因而往往容易被誤診誤治。脂肪肝防治的研究進(jìn)展基礎(chǔ)治療

(1)飲食治療(2)運(yùn)動治療(3)行為治療(4)戒酒療法

藥物治療

(1)減肥藥物(2)改善胰島素抵抗藥物(3)調(diào)脂、降壓及控制血糖藥物(4)以抗炎為主的藥物(5)以抗氧化為主的藥物

青藏高原治療脂肪肝的主要藥物

大黃指唐古特大黃或藥用大黃的根狀莖，大黃是多種蓼科大黃屬的多年生植物的合稱，氣清香，味苦而微澀，嚼之黏牙，有砂粒感，含大黃素、大黃酸、大黃酚、大黃素、甲醚等蒽醌衍生物，具有降低血壓和膽固醇的作用，生大黃有通便活血化瘀等作用，適用于偏實(shí)證和大便干結(jié)的脂肪肝病人。大黃資源主要分布于青海、四川西部、云南西北部及西藏東部，大黃生物學(xué)特性：喜冷涼氣候，耐寒，忌高溫。據(jù)研究，現(xiàn)已從大黃中分離出蒽醌、二蒽酮、芪、苯丁酮、單寧、萘色酮等不同種類的80多種化合物，大體上分為蒽醌類、多糖類、鞣質(zhì)類。

川西獐芽菜屬龍膽科獐牙菜屬植物，主要分布于我國的西藏、青海、四川和云南，是一種珍稀的高原野生植物，也是一種常見的藏藥，藏譯音名“桑滴”，俗稱“藏茵陳”據(jù)《晶珠本草》記載，桑滴味甘、苦、性溫；具清熱解毒、清肝利膽之功效，川西獐牙菜全草入藥，是一種用于治療黃疸型肝膽疾病和病毒性肝炎的珍稀草本植物。研究表明，植物中齊墩果酸、芒果苷、環(huán)烯醚萜苷類具有降酶、利膽、強(qiáng)壯、鎮(zhèn)痛等藥效作用。近年來，隨著我國民族醫(yī)藥事業(yè)的迅速發(fā)展，川西獐牙菜的藥用資源需求量快速增加，過度采收導(dǎo)致資源量銳減，獐牙菜苦苷等環(huán)烯醚、萜苷類、黃酮類、齊墩果酸等三萜類成分被認(rèn)為是該屬中藥的主要活性成分，獐牙菜苦苷和齊墩果酸是2005年版《中國藥典》中的藥材質(zhì)量控制成分。

枸杞枸杞屬茄科植物枸杞的成熟干燥果實(shí)。我國的寧夏、青海、山東、河南等地都有生產(chǎn)。枸杞在祖國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中具有重要地位，其藥用價值備受歷代醫(yī)家推崇《本草綱目》記載：枸杞，補(bǔ)腎生精，養(yǎng)肝，明目，堅精骨，去疲勞，易顏色，變白，明目安神，令人長壽現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，枸杞具有抗腫瘤抗氧化、抗衰老、免疫調(diào)節(jié)、降血糖、降血脂等作用。對于枸杞上述功能起重要作用的因子，一般認(rèn)為與其所含枸杞多糖、類胡蘿卜素和甜菜堿等活性成分有關(guān)，特別是與枸杞多糖密切相關(guān)，因此枸杞多糖的藥理及臨床應(yīng)用研究受到格外關(guān)注。

葛根為豆科植物野葛的干燥根,習(xí)稱野葛。具有解肌退熱,生津,透疹,升陽止瀉之功效。用于外感發(fā)熱頭痛、項(xiàng)背強(qiáng)痛、口渴、消渴、麻疹不透、熱痢、泄瀉,高血壓頸項(xiàng)強(qiáng)痛等疾病。異黃酮類化合物是葛根的主要成分;其中葛根素是葛根的特有成分,在治療心血管系統(tǒng)疾病上有著廣泛的應(yīng)用。

當(dāng)歸來源于傘形科植物當(dāng)歸的根,藥性甘、辛、溫,具有補(bǔ)血活血、調(diào)經(jīng)止痛、潤燥滑腸等功效,用于具有補(bǔ)血活血,調(diào)經(jīng)止痛,潤腸通便等功效。當(dāng)歸中主要含有丁烯基苯酞、藁本內(nèi)酯、愈創(chuàng)木酚等多種揮發(fā)性成分以及阿魏酸等多種有機(jī)酸成分。

黨參為桔梗科黨參屬植物黨參的干燥根,其性甘、平,補(bǔ)脾胃,益氣血,生津止渴,是重要的傳統(tǒng)補(bǔ)中益氣,健脾益肺的要藥。黨參多糖是黨參中的有效成份之一,近年來研究表明,黨參多糖具有降血糖、降血脂作用、抗?jié)兓钚缘茸饔?其在調(diào)節(jié)免疫功能中具有抗病毒、抗衰老、抗氧化、抗腫瘤等作用。

論文的選題的意義及基本內(nèi)容1選題的意義脂肪肝不是一種獨(dú)立的疾病,是由多種素引起脂肪在肝內(nèi)過度蓄積，從而引起肝臟形態(tài)和功能上的改變。是僅次于病毒性肝炎的第二大肝病,已被公認(rèn)為隱蔽性肝硬化的常見原因。而早期診治可以阻止脂肪肝的進(jìn)一步發(fā)展，甚至使其逆轉(zhuǎn)。因此其治療日益受到重視。2研究的基本內(nèi)容

2.1實(shí)驗(yàn)動物與飼料實(shí)驗(yàn)用昆明種小鼠,清潔級,18～22g,雌雄各半，由青海省地方病防治研究所實(shí)驗(yàn)動物中心提供，飼以鼠糧，自來水。高脂飼料的準(zhǔn)備10%蛋黃粉,10%豬油，4%膽固醇,1%膽酸，75%基礎(chǔ)飼料。

2.2實(shí)驗(yàn)材料

葛根、枸杞醇提物的制備：將兩種藥粉碎，用75﹪食用酒精回餾煮2h,濾出提取液,重復(fù)3次合并提取液，濃縮醇提物，在60℃的烘箱里烘干,減壓回收乙醇。實(shí)驗(yàn)用時用花生油∶吐溫80∶水為1∶1∶8配制生藥。

2.3實(shí)驗(yàn)試劑與儀器

紫外分光光度計、溫振蕩器、離心機(jī)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)試劑盒，甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)試劑盒、普通飼料、葛根和枸杞子醇提物、生理鹽水。

2.4實(shí)驗(yàn)方法

2.4.1分組及造模

取小鼠80只,隨機(jī)分成8組,每組10只,雌雄各半,分為正常對照組、高脂模型組、葛根醇提物高、中、低劑量組，枸杞醇提物高、中、低劑量組。除正常組小鼠外,其余各組動物喂高脂飼料4周后非酒精性脂肪肝模型已建立，予以灌胃治療。按0.2ml/20g體重分別灌胃高、中、低劑量的藥物,正常組和模型組給予等量生理鹽水,每天早晚9點(diǎn)各灌喂一次,連續(xù)10d,末次給藥1h后鼠尾靜脈注射LPS生理鹽水溶液(含7.5μg)0.2ml/只,然后禁食12h后,眼眶采血,離心，分離血清，所得血清于-75℃冰箱凍存，用于血液生化檢測；迅速解剖，取出肝臟，沖洗后濾紙吸干，稱肝濕重，計算其質(zhì)量指數(shù)。2.4.2觀測指標(biāo)及測定方法一般項(xiàng)目觀察動物的體重、飲食、毛發(fā)、活動情況、肝／體重比等。生化指標(biāo)分別按照試劑盒說明書操作，ALT、AST、TG、TC的測定均采用酶比色法。

2.4.3數(shù)據(jù)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±S）表示，組間均數(shù)差異的比較用單因素方差分析，所有數(shù)據(jù)均用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理。2.5技術(shù)路線購買昆明種小鼠（體重18～22g,4～5周齡）將小鼠分組

空白對照組模型對照組給藥組

基礎(chǔ)飼料 高脂飼料高脂飼料

[四周后，每日灌胃（ig）[四周后，每日灌胃（ig）[四周后，每日灌胃（ig）0.2ml生理鹽水]0.2ml生理鹽水]0.2ml藥液]

（10天后）

空白對照組注射0.2ml無菌生理鹽水，其他各組注射0.2mlLPS生理鹽水（各組小鼠稱體重）摘眼球取血（或眼眶取血或尾靜脈取血）頸椎脫臼處死小鼠取肝臟、胸腺、脾臟，分別用電子天平稱重（目的是：計算出肝臟系數(shù)、胸腺系數(shù)和脾臟系數(shù)）一部分血離心，分離血清，進(jìn)行生化指標(biāo)的測定論文選題特色和創(chuàng)新之處

目前，高脂飼料誘導(dǎo)的非酒精性脂肪肝動物模型是國內(nèi)與國外研究藥物、治療脂肪肝較為理想的動物模型，也是國內(nèi)外許多學(xué)者所熱衷的研究課題，從而達(dá)到從篩選新藥以及從理論上研究治療脂肪肝。但是，利用高脂伺料誘導(dǎo)的非酒精性脂肪肝動物模型來進(jìn)行青海省藏藥的篩選，還未見有報道。本論文將通過建立非酒精性脂肪肝動物模型進(jìn)行兩種藏藥的篩選，來篩選出對小鼠脂肪肝有作用的成分，從而為脂肪肝的臨床實(shí)踐奠定基礎(chǔ)。

預(yù)期成果的理論意義和應(yīng)用價值隨著我國經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，膳食結(jié)構(gòu)的改變，脂肪肝發(fā)病率逐年上升，不僅直接影響人群的健康，甚至還危及人的生命安全。其所造成的直接和間接的經(jīng)濟(jì)損失也很大，嚴(yán)重地影響了生產(chǎn)、工作和學(xué)習(xí)。由于肝病是危害人類的主要疾病之一，結(jié)合青海省藏藥的優(yōu)勢來開發(fā)療效好的治療脂肪肝新藥物，不但造福于世界；同時為青海的特色經(jīng)濟(jì)發(fā)展、利用青海特色資源發(fā)展特色產(chǎn)業(yè)有實(shí)際的意義。本課題通過建立脂肪肝動物模型進(jìn)行藏藥篩選，來篩選出對小鼠脂肪肝有效的提取物及其成分，從而為脂肪肝的臨床實(shí)踐奠定基礎(chǔ)、提供依據(jù)。如果有療效一定，副作用小的治療脂肪肝藥物，將對人類的生活產(chǎn)生巨大的影響；同時具有較大的經(jīng)濟(jì)空間。

論文工作進(jìn)度計劃2010年3月--2010年12月：查閱與論文相關(guān)的資料，確定最終論文設(shè)計方向。2011年1月--2011年4月：完成實(shí)驗(yàn)設(shè)計，并進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)。2011年5月--2011年12月：非酒精性脂肪肝動物模型試驗(yàn)（包括小鼠臟器指數(shù)的測定、小鼠生化指標(biāo)ALT、AST、TG、TC含量的測定）。2012年1月--2012年2月：總結(jié)試驗(yàn)數(shù)據(jù)，分析試驗(yàn)結(jié)果，得出結(jié)論，發(fā)表研究論文并起草畢業(yè)論文。2012年2月--2012年3月：畢業(yè)論文定稿。2012年4月--2012年5月：匿名送審，專家鑒定。2012年6月：畢業(yè)論文答辯。1、字體安裝與設(shè)置如果您對PPT模板中的字體風(fēng)格不滿意，可進(jìn)行批量替換，一次性更改各頁面字體。在“開始”選