葛根與枸杞對小鼠脂肪肝的影響

開題報告

論文題目：葛根與枸杞對小鼠脂肪肝的影響對比研究方向：植物生物化學

研究生姓名：解婧

導師姓名：陳志論文選題的國內(nèi)外研究現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢肝病至今仍是人類沉重的健康負擔和主要死因之一。究其原因主要為生活方式的改變導致肥胖、糖尿病、嗜酒及其相關(guān)脂肪性肝病(FLD)增加迅速。FLD疾病譜包括單純性脂肪肝、脂肪性肝炎、肝硬化，甚至肝細胞癌；臨床上則分為酒精性肝病(ALD)和非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)兩大類型。隨著社會老齡化以及慢性病毒性肝炎等其他肝病被控制，F(xiàn)LD現(xiàn)已成為肝病相關(guān)殘疾和死亡越來越重要的原因。此外，NAFLD還與糖尿病和心血管疾病的發(fā)病密切相關(guān)。FLD的防治不但是臨床醫(yī)學問題，而且為預防醫(yī)學、社會醫(yī)學和衛(wèi)生行政主管部門共同面臨的重大課題。脂肪肝的研究進展脂肪肝的病因諸多，包括飲酒過量、代謝性疾病、藥物和營養(yǎng)不良等。脂肪肝疾患可以主要由一種病因引起，也可以由多種病因同時作用或先后參與。在不同的時期、不同的國家和地區(qū)及不同人群中，脂肪肝的發(fā)病率及病因分布不一。目前在發(fā)達國家和地區(qū)，酒精中毒、肥胖、糖尿病是脂肪肝的3大病因，營養(yǎng)不良性脂肪肝僅流行于部分經(jīng)濟落后地區(qū)，單純遺傳因素引起的代謝性脂肪肝非常少見。故以下討論的脂肪肝主要為酒精性脂肪肝和非酒精性脂肪肝，主要包括肥胖、糖尿病和高脂血病所致的脂肪肝。病理病機食物中的脂肪經(jīng)水解酶消化后,其乳糜微粒(主要成分是甘油三酯)被小腸上皮吸收入血。血的乳糜微粒有3條去路:(1)分解后成為肌肉活動的能源;(2)儲存在脂肪組織作為潛在能源;(3)轉(zhuǎn)運至肝臟進行代謝。轉(zhuǎn)運至肝臟的甘油三酯與載脂蛋白結(jié)合成極低密度脂蛋白(VLDL)顆粒分泌入血液。如果甘油三酯產(chǎn)生量多,或極低密度脂蛋白量少,造成甘油三酯在肝內(nèi)堆積,則形成脂肪肝。

成因：(1)酒是罪魁,長期飲酒,導致酒精中毒,致使肝內(nèi)脂肪氧化減少,慢性嗜酒者近60％發(fā)生脂肪肝,20％～30％最終將發(fā)展為肝硬化。(2)長期攝入高脂飲食或長期大量吃糖、淀粉等碳水化合物,使肝臟脂肪合成過多。(3)肥胖,缺乏運動,使肝內(nèi)脂肪輸入過多。(4)糖尿病。(5)肝炎。(6)某些藥物引起的急性或慢性肝損害

脂肪肝模型的研究進展酒精性脂肪肝模型

（1）急性酒精性脂肪肝模型（2）慢性酒精性脂肪肝模型非酒精性脂肪肝模型

（1）營養(yǎng)失調(diào)性脂肪肝模型（2）高脂性脂肪肝模型（3）營養(yǎng)不良性脂肪肝模型（4）禁食大鼠脂肪肝模型脂肪肝的危害肝臟具有消化、解毒、合成、免疫、貯存等功能，是動物機體一類組織器官。脂肪肝是肝細胞發(fā)生脂肪變性的一種脂類代謝紊亂性疾病，組織學表現(xiàn)為肝細胞胞漿內(nèi)充滿脂肪滴（三酰甘油）。脂肪肝是由多種原因引起的脂類代謝障礙,使肝細胞中脂肪含量異常增加的一種疾病,肝臟在正常情況下總脂肪量不超過肝重的5%,而脂肪肝的患者總脂肪量可高達肝重的40%～50%,肝病患者治療過程中食物攝入過多,活動減少,極易引起脂肪肝,可導致肝功能反復異常,不易恢復,甚至形成肝硬化,預后不良。脂肪肝一般可分為急性和慢性2種。急性脂肪肝比較少見,臨床癥狀表現(xiàn)為疲勞、惡心、嘔吐和不同程度的黃疸,并可短期內(nèi)發(fā)生肝昏迷、腎衰、肝硬化，嚴重者可在數(shù)小時死于并發(fā)癥。慢性較為常見,起病緩慢、隱匿,病程漫長,早期沒有明顯的臨床癥狀,一般是在做B超時偶然發(fā)現(xiàn),部分病人可出現(xiàn)食欲減退、惡心、乏力、肝區(qū)疼痛、腹脹,以及右上腹脹滿和壓迫感。由于這些癥狀沒有特異性,與一般的慢性胃炎、膽囊炎相似,因而往往容易被誤診誤治。脂肪肝防治的研究進展基礎治療

(1)飲食治療(2)運動治療(3)行為治療(4)戒酒療法

藥物治療

(1)減肥藥物(2)改善胰島素抵抗藥物(3)調(diào)脂、降壓及控制血糖藥物(4)以抗炎為主的藥物(5)以抗氧化為主的藥物

青藏高原治療脂肪肝的主要藥物

大黃指唐古特大黃或藥用大黃的根狀莖，大黃是多種蓼科大黃屬的多年生植物的合稱，氣清香，味苦而微澀，嚼之黏牙，有砂粒感，含大黃素、大黃酸、大黃酚、大黃素、甲醚等蒽醌衍生物，具有降低血壓和膽固醇的作用，生大黃有通便活血化瘀等作用，適用于偏實證和大便干結(jié)的脂肪肝病人。大黃資源主要分布于青海、四川西部、云南西北部及西藏東部，大黃生物學特性：喜冷涼氣候，耐寒，忌高溫。據(jù)研究，現(xiàn)已從大黃中分離出蒽醌、二蒽酮、芪、苯丁酮、單寧、萘色酮等不同種類的80多種化合物，大體上分為蒽醌類、多糖類、鞣質(zhì)類。

川西獐芽菜屬龍膽科獐牙菜屬植物，主要分布于我國的西藏、青海、四川和云南，是一種珍稀的高原野生植物，也是一種常見的藏藥，藏譯音名“桑滴”，俗稱“藏茵陳”據(jù)《晶珠本草》記載，桑滴味甘、苦、性溫；具清熱解毒、清肝利膽之功效，川西獐牙菜全草入藥，是一種用于治療黃疸型肝膽疾病和病毒性肝炎的珍稀草本植物。研究表明，植物中齊墩果酸、芒果苷、環(huán)烯醚萜苷類具有降酶、利膽、強壯、鎮(zhèn)痛等藥效作用。近年來，隨著我國民族醫(yī)藥事業(yè)的迅速發(fā)展，川西獐牙菜的藥用資源需求量快速增加，過度采收導致資源量銳減，獐牙菜苦苷等環(huán)烯醚、萜苷類、黃酮類、齊墩果酸等三萜類成分被認為是該屬中藥的主要活性成分，獐牙菜苦苷和齊墩果酸是2005年版《中國藥典》中的藥材質(zhì)量控制成分。

枸杞枸杞屬茄科植物枸杞的成熟干燥果實。我國的寧夏、青海、山東、河南等地都有生產(chǎn)。枸杞在祖國傳統(tǒng)醫(yī)學中具有重要地位，其藥用價值備受歷代醫(yī)家推崇《本草綱目》記載：枸杞，補腎生精，養(yǎng)肝，明目，堅精骨，去疲勞，易顏色，變白，明目安神，令人長壽現(xiàn)代醫(yī)學研究表明，枸杞具有抗腫瘤抗氧化、抗衰老、免疫調(diào)節(jié)、降血糖、降血脂等作用。對于枸杞上述功能起重要作用的因子，一般認為與其所含枸杞多糖、類胡蘿卜素和甜菜堿等活性成分有關(guān)，特別是與枸杞多糖密切相關(guān)，因此枸杞多糖的藥理及臨床應用研究受到格外關(guān)注。

葛根為豆科植物野葛的干燥根,習稱野葛。具有解肌退熱,生津,透疹,升陽止瀉之功效。用于外感發(fā)熱頭痛、項背強痛、口渴、消渴、麻疹不透、熱痢、泄瀉,高血壓頸項強痛等疾病。異黃酮類化合物是葛根的主要成分;其中葛根素是葛根的特有成分,在治療心血管系統(tǒng)疾病上有著廣泛的應用。

當歸來源于傘形科植物當歸的根,藥性甘、辛、溫,具有補血活血、調(diào)經(jīng)止痛、潤燥滑腸等功效,用于具有補血活血,調(diào)經(jīng)止痛,潤腸通便等功效。當歸中主要含有丁烯基苯酞、藁本內(nèi)酯、愈創(chuàng)木酚等多種揮發(fā)性成分以及阿魏酸等多種有機酸成分。

黨參為桔?？泣h參屬植物黨參的干燥根,其性甘、平,補脾胃,益氣血,生津止渴,是重要的傳統(tǒng)補中益氣,健脾益肺的要藥。黨參多糖是黨參中的有效成份之一,近年來研究表明,黨參多糖具有降血糖、降血脂作用、抗?jié)兓钚缘茸饔?其在調(diào)節(jié)免疫功能中具有抗病毒、抗衰老、抗氧化、抗腫瘤等作用。

論文的選題的意義及基本內(nèi)容1選題的意義脂肪肝不是一種獨立的疾病,是由多種素引起脂肪在肝內(nèi)過度蓄積，從而引起肝臟形態(tài)和功能上的改變。是僅次于病毒性肝炎的第二大肝病,已被公認為隱蔽性肝硬化的常見原因。而早期診治可以阻止脂肪肝的進一步發(fā)展，甚至使其逆轉(zhuǎn)。因此其治療日益受到重視。2研究的基本內(nèi)容

2.1實驗動物與飼料實驗用昆明種小鼠,清潔級,18～22g,雌雄各半，由青海省地方病防治研究所實驗動物中心提供，飼以鼠糧，自來水。高脂飼料的準備10%蛋黃粉,10%豬油，4%膽固醇,1%膽酸，75%基礎飼料。

2.2實驗材料

葛根、枸杞醇提物的制備：將兩種藥粉碎，用75﹪食用酒精回餾煮2h,濾出提取液,重復3次合并提取液，濃縮醇提物，在60℃的烘箱里烘干,減壓回收乙醇。實驗用時用花生油∶吐溫80∶水為1∶1∶8配制生藥。

2.3實驗試劑與儀器

紫外分光光度計、溫振蕩器、離心機、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)試劑盒，甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)試劑盒、普通飼料、葛根和枸杞子醇提物、生理鹽水。

2.4實驗方法

2.4.1分組及造模

取小鼠80只,隨機分成8組,每組10只,雌雄各半,分為正常對照組、高脂模型組、葛根醇提物高、中、低劑量組，枸杞醇提物高、中、低劑量組。除正常組小鼠外,其余各組動物喂高脂飼料4周后非酒精性脂肪肝模型已建立，予以灌胃治療。按0.2ml/20g體重分別灌胃高、中、低劑量的藥物,正常組和模型組給予等量生理鹽水,每天早晚9點各灌喂一次,連續(xù)10d,末次給藥1h后鼠尾靜脈注射LPS生理鹽水溶液(含7.5μg)0.2ml/只,然后禁食12h后,眼眶采血,離心，分離血清，所得血清于-75℃冰箱凍存，用于血液生化檢測；迅速解剖，取出肝臟，沖洗后濾紙吸干，稱肝濕重，計算其質(zhì)量指數(shù)。2.4.2觀測指標及測定方法一般項目觀察動物的體重、飲食、毛發(fā)、活動情況、肝／體重比等。生化指標分別按照試劑盒說明書操作，ALT、AST、TG、TC的測定均采用酶比色法。

2.4.3數(shù)據(jù)處理

實驗數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標準差（X±S）表示，組間均數(shù)差異的比較用單因素方差分析，所有數(shù)據(jù)均用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理。2.5技術(shù)路線購買昆明種小鼠（體重18～22g,4～5周齡）將小鼠分組

空白對照組模型對照組給藥組

基礎飼料 高脂飼料高脂飼料

[四周后，每日灌胃（ig）[四周后，每日灌胃（ig）[四周后，每日灌胃（ig）0.2ml生理鹽水]0.2ml生理鹽水]0.2ml藥液]

（10天后）

空白對照組注射0.2ml無菌生理鹽水，其他各組注射0.2mlLPS生理鹽水（各組小鼠稱體重）摘眼球取血（或眼眶取血或尾靜脈取血）頸椎脫臼處死小鼠取肝臟、胸腺、脾臟，分別用電子天平稱重（目的是：計算出肝臟系數(shù)、胸腺系數(shù)和脾臟系數(shù)）一部分血離心，分離血清，進行生化指標的測定論文選題特色和創(chuàng)新之處

目前，高脂飼料誘導的非酒精性脂肪肝動物模型是國內(nèi)與國外研究藥物、治療脂肪肝較為理想的動物模型，也是國內(nèi)外許多學者所熱衷的研究課題，從而達到從篩選新藥以及從理論上研究治療脂肪肝。但是，利用高脂伺料誘導的非酒精性脂肪肝動物模型來進行青海省藏藥的篩選，還未見有報道。本論文將通過建立非酒精性脂肪肝動物模型進行兩種藏藥的篩選，來篩選出對小鼠脂肪肝有作用的成分，從而為脂肪肝的臨床實踐奠定基礎。

預期成果的理論意義和應用價值隨著我國經(jīng)濟的發(fā)展，膳食結(jié)構(gòu)的改變，脂肪肝發(fā)病率逐年上升，不僅直接影響人群的健康，甚至還危及人的生命安全。其所造成的直接和間接的經(jīng)濟損失也很大，嚴重地影響了生產(chǎn)、工作和學習。由于肝病是危害人類的主要疾病之一，結(jié)合青海省藏藥的優(yōu)勢來開發(fā)療效好的治療脂肪肝新藥物，不但造福于世界；同時為青海的特色經(jīng)濟發(fā)展、利用青海特色資源發(fā)展特色產(chǎn)業(yè)有實際的意義。本課題通過建立脂肪肝動物模型進行藏藥篩選，來篩選出對小鼠脂肪肝有效的提取物及其成分，從而為脂肪肝的臨床實踐奠定基礎、提供依據(jù)。如果有療效一定，副作用小的治療脂肪肝藥物，將對人類的生活產(chǎn)生巨大的影響；同時具有較大的經(jīng)濟空間。

論文工作進度計劃2010年3月--2010年12月：查閱與論文相關(guān)的資料，確定最終論文設計方向。2011年1月--2011年4月：完成實驗設計，并進行預試驗。2011年5月--2011年12月：非酒精性脂肪肝動物模型試驗（包括小鼠臟器指數(shù)的測定、小鼠生化指標ALT、AST、TG、TC含量的測定）。2012年1月--2012年2月：總結(jié)試驗數(shù)據(jù)，分析試驗結(jié)果，得出結(jié)論，發(fā)表研究論文并起草畢業(yè)論文。2012年2月--2012年3月：畢業(yè)論文定稿。2012年4月--2012年5月：匿名送審，專家鑒定。2012年6月：畢業(yè)論文答辯。1、字體安裝與設置如果您對PPT模板中的字體風格不滿意，可進行批量替換，一次性更改各頁面字體。在“開始”選