RNA檢測技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗科培訓(xùn)課件

常見生殖道病原體及危害生殖支原體(MG)沙眼衣原體(CT)解脲脲原體(UU)淋病奈瑟菌（NG）不孕不育泌尿生殖道炎癥眼科炎癥類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎不良妊娠/母嬰感染1RNA檢測技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗科1/22/2025沙眼衣原體(CT)

80%的女性和50%男性感染人群無臨床癥狀感染人群中無臨床癥狀

淋病奈瑟菌(NG)

50%的女性和10%的男性無臨床癥狀

解脲脲原體(UU)75%的成人無臨床癥狀，

在孕婦中無癥狀比例達到80%

生殖支原體（MG）

50%以上感染人群無明顯臨床癥狀

ClinicalEffectivenessGuidelinefortheManagementofChlamydiatrachomatisGenitalTractInfection.2001葉順章.性傳播疾病的實驗室診斷.第二版.102沉默的殺手European(IUSTI/WHO)GuidelineontheDiagnosisandTreatmentofGonorrhoeainAdults.20092RNA檢測技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗科1/22/2025歐美國家指南中建議篩查CT/NGCT/NG所有妊娠女性在第一次產(chǎn)檢時都要進行CT/NG檢查，并需在孕晚期進行復(fù)查。CDCGrandRounds:TheGrowingThreatofMultidrug-ResistantGonorrhea。USACDC2013GuidelinesfortheLaboratoryDiagnosisofMycoplasmagenitaliumInfectionsinEastEuropeanCountries,2010ScreeningforChlamydiaandGonorrhea:U.S.PreventiveServicesTaskForceRecommendationStatement.2014美國2014年預(yù)防服務(wù)工作組(USPSTF)美國疾控(USCDC)2010版《性病診療指南》CT/NG建議所有育齡人群中進行CT/NG檢查。英國2013版國家臨床最優(yōu)化研究所(NICE)指南建議所有育齡人群中進行CT檢查。CT3RNA檢測技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗科1/22/2025Preventionofinfectionafterinducedabortion.ReleasedateOctober2010.SFPGuideline20102美國計劃生育學(xué)會（SFP）《人工流產(chǎn)后預(yù)防感染指南》

人工流產(chǎn)手術(shù)患者應(yīng)在術(shù)前接受預(yù)防性抗生素治療，從而降低其術(shù)后生殖道感染的風(fēng)險。

對擬行人工流產(chǎn)手術(shù)患者，推薦術(shù)前進行沙眼衣原體和淋病奈瑟菌的篩查，對于檢測陽性患者依照規(guī)范治療后再施行手術(shù)。歐美國家指南中建議篩查CT/NGCT/NG4RNA檢測技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗科1/22/2025孕前和孕期保健指南2011.中華醫(yī)學(xué)會婦產(chǎn)科分會產(chǎn)科學(xué)組孕前和孕期保健指南

-孕前3個月：CT/NG為備查項目-懷孕6-13周：高危孕婦、有癥狀者CT/NG為備查項目國家免費孕前優(yōu)生健康檢查項目試點技術(shù)服務(wù)規(guī)范-陰道分泌物進行CT/NG檢測黏液膿性宮頸炎的診斷和治療

-對疑似患者，在確定臨床體征后，

應(yīng)進一步做衣原體及淋病奈瑟菌的檢測CT/NGCT/NGCT/NG黏液膿性宮頸炎的診斷和治療.2012.中華醫(yī)學(xué)會婦產(chǎn)科分會感染協(xié)作組我國指南關(guān)于CT/NG的檢查建議5RNA檢測技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗科1/22/2025生殖道病原體實驗室檢測方法細(xì)菌法免疫法分子生物學(xué)法培養(yǎng)法鏡檢法抗原抗體檢測DNA檢測RNA檢測6RNA檢測技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗科1/22/2025方法學(xué)檢測方法檢測樣本檢測復(fù)雜程度特點檢測項目細(xì)菌法培養(yǎng)法細(xì)菌培養(yǎng)分泌物較復(fù)雜，檢測過程長準(zhǔn)確率低，易漏檢及誤檢用于NG/UU/CT/MG檢測形態(tài)學(xué)法涂片鏡檢分泌物全手工操作，較復(fù)雜準(zhǔn)確率較高，但有漏檢用于NG檢測免疫法免疫法膠體金/酶聯(lián)免疫法分泌物耗時短，操作簡單準(zhǔn)確率低，假陰性問題突出用于CT檢測分子生物學(xué)法DNA檢測PCR分泌物操作較復(fù)雜，需有一定經(jīng)驗才能做好檢測準(zhǔn)確率相對較高，但存在污染和死亡病原體導(dǎo)致的假陽性問題用于CT/NG/UU檢測RNA檢測TMA/SAT尿液和分泌物耗時耗時短，儀器自動化操作，較簡單檢測活體RNA，靈敏度和特異性均很高歐美國家用于CT/NG/MG檢測常用CT/NG/UU/MG檢測方法比較7RNA檢測技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗科1/22/2025國外診療指南推薦使用分子檢測法診斷生殖道病原體CT/NG美國疾控2014版《CT/NG實驗室診斷指南》RecommendationsfortheLaboratory-BasedDetectionofChlamydiatrachomatisandNeisseriagonorrhoeae.USACDC.March2014.Unemoetal.Laboratorydiagnosisofsexuallytransmitted

infections,includinghumanimmunodeficiencyvirus,WHO,2013WHO2013版《性傳播疾病實驗室診斷方法》8RNA檢測技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗科1/22/2025

WHO性傳播疾病實驗室診斷指南利用16SrRNA為靶標(biāo)的RNA檢測技術(shù)（TMA），在靈敏度上比PCR要高，它是目前一種靈敏度、特異度均非常高的MG檢測技術(shù)。Unemoetal.Laboratorydiagnosisofsexuallytransmitted。a.infections,includinghumanimmunodeficiencyvirus,WHO,2013WHO明確指出核酸檢測法（NAAT）是診斷MG的唯一可行方法;通過RNA檢測技術(shù)檢測生殖支原體比PCR方法要更準(zhǔn)確。核酸檢測法（NAAT）是診斷MG的唯一可行方法WHO推薦用RNA技術(shù)檢測MG9RNA檢測技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗科1/22/2025RNA用于臨床檢驗的優(yōu)勢靈敏度高，不易漏檢：RNA拷貝數(shù)≥DNA拷貝數(shù)（e.g，16srRNA104copy/cell）與臨床相關(guān)性好，可以區(qū)分“死菌”“活菌”：病原體死亡，RNA很快降解，可進行療效評估和輔助判愈，減少無效治療，比如抗生素濫用。無創(chuàng)取樣：尿液檢測，顯著降低病人的采樣痛苦和檢測依從性。不易誤檢：靶標(biāo)和擴增產(chǎn)物都是RNA，不易污染，不易出現(xiàn)假陽性。10RNA檢測技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗科1/22/2025RNA檢測技術(shù)NASBA（Biomerieux）(NAsequencebasedamplification)TMA（Gen-probe）(TranscriptionMediatedAmplification)SAT（上海仁度)（SimultaneousAmplificationandTesting)11RNA檢測技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗科1/22/2025SAT技術(shù)12RNA檢測技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗科1/22/2025SAT與PCR技術(shù)原理比較RTRNAcDNART~1000copiesT7SATDNATaqTaqPCR30分鐘內(nèi)擴增1010倍13RNA檢測技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗科1/22/2025中國診療指南推薦用SAT診斷生殖道病原體梅毒、淋病、生殖器皰疹、生殖道沙眼衣原體感染診療指南。中國疾控中心、中華醫(yī)學(xué)會皮膚性病學(xué)分會性病學(xué)組。2014。中國2014版《梅毒、淋病、生殖器皰疹、生殖道沙眼衣原體感染診療指南》14RNA檢測技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗科1/22/2025CT/NG/UU/MG-SAT是國內(nèi)唯一獲得CFDA認(rèn)證的RNA檢測試劑15RNA檢測技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗科1/22/2025SAT擴增曲線圖（ABI7500）陰性結(jié)果陽性結(jié)果以CT-SAT為例16RNA檢測技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗科1/22/2025SAT技術(shù)可實現(xiàn)尿液檢測

樣本類型：宮頸拭子、尿液金華中心醫(yī)院浙大醫(yī)學(xué)院附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院臨床結(jié)果顯示拭子和尿液標(biāo)本檢測陽性率基本一致。鄭雅萍

袁青

陳偉,實時核酸恒溫擴增技術(shù)在奈瑟菌感染檢測中的應(yīng)用,《浙江實用醫(yī)學(xué)》,2015年01期

沙眼衣原體淋病奈瑟菌17RNA檢測技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗科1/22/2025編號作者發(fā)表時間研究中心病例數(shù)項目靈敏度特異性診斷標(biāo)準(zhǔn)1王千秋等2010中科院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院皮膚病研究所205NG100%94.5%PCR2顧偉鳴等2010上海市皮膚病性病醫(yī)院229CT97.1%100%培養(yǎng)+PCR3高志華等2012東莞市南方醫(yī)科大學(xué)廣濟醫(yī)院218NG100%97.08%培養(yǎng)+PCR4陳敏等2014湖南省婦幼保健院,解放軍163醫(yī)院200CT88.12%100%培養(yǎng)+PCR5鄭雅萍等2015金華市中心醫(yī)院153NG95.9%88.8%分離培養(yǎng)SAT技術(shù)具有高靈敏度，高特異性18RNA檢測技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗科1/22/2025男科多種樣本類型檢測（課題）仁度CT/NG/UU/MGRNA檢測試劑用于精液檢測

采用SAT技術(shù)對438例男性精液標(biāo)本進行CT/NG/UU/MG檢測結(jié)論：1、SAT技術(shù)可對精漿標(biāo)本進行CT/NG/UU/MG檢測。2、與醫(yī)院傳統(tǒng)檢測方法相比，傳統(tǒng)檢測方法陽性標(biāo)本，SAT檢測均為陽性；同時SAT還比傳統(tǒng)方法多檢出陽性標(biāo)本。19RNA檢測技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗科1/22/2025仁度UU/MGRNA檢測試劑用于尿液和前列腺液檢測（同一患者同時采集尿液和前列腺液）前列腺液標(biāo)本合計陽性陰性尿液標(biāo)本陽性35136陰性06363合計356499表199例患者兩種樣本類型UU檢測結(jié)果前列腺液標(biāo)本合計陽性陰性尿液標(biāo)本陽性303陰性09696合計39699表299例患者兩種樣本類型MG檢測結(jié)果結(jié)論：前列腺液檢測陽性樣本，尿液檢測均為陽性！SAT可應(yīng)用于前列腺液和尿液的檢測！20RNA檢測技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗科1/22/2025操作簡單-----小批量樣本檢測樣本磁珠法提取核酸恒溫擴增檢測結(jié)果報告21RNA檢測技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗科1/22/2025操作簡單----大批量樣本檢測全自動高通量樣本適用范圍廣全自動樣本制備工作站的開發(fā)陰性結(jié)果陽性結(jié)果全自動核酸提取儀22RNA檢測技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗科1/22/2025適用范圍廣-----多種檢測機型ABI系列熒光定量PCR儀器羅氏實時熒光PCR儀器STRATAGENE熒光定量PCR儀器西安天隆實時熒光PCR儀器23RNA檢測技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗科1/22/2025CT/NG/UU/MG-SAT產(chǎn)品特點SAT產(chǎn)品特點SAT的優(yōu)勢帶給檢驗科的益處檢測靶標(biāo)：RNA靈敏度高活菌檢測可尿液檢測結(jié)果準(zhǔn)確度高，可靠尿液檢測，減少醫(yī)務(wù)人員工作量，減輕病人痛苦擴增產(chǎn)物：RNA產(chǎn)物易降解，減少實驗室污染風(fēng)險維護實驗室質(zhì)控水平實驗室質(zhì)控、污染非常少核酸提取：超聲波處理15min操作簡單，快速操作簡單、易掌握擴增方式：42℃恒溫降低實驗室設(shè)備要求縮短檢測時間減少工作量提高工作效率檢測方法：實時熒光檢測實時反映擴增反應(yīng)的動態(tài)過程結(jié)果是否容易判讀24RNA檢測技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗科1/22/2025CT/NG/UU/MG-SAT項目開展相關(guān)參數(shù)CT/NG/UU/MG-SAT項目開展相關(guān)參數(shù)樣本樣本類型宮頸拭子、尿道拭子、陰道拭子（MG項目）、尿液樣本保存尿液樣本2℃～30℃條件下24小時內(nèi)加入樣本保存液加入樣本保存液的標(biāo)本，-20℃保存3個月，-70℃可長期保存。注意：不立即進行檢測的樣本，最好放入-20℃凍存，防止樣本RNA降解。試劑主要試劑CT/NG/UU/MG-SAT試劑盒試劑保存

A盒（提取盒）：4℃冰箱冷藏B盒（擴增檢測盒）：-20℃冰箱凍存主要設(shè)備提取磁珠分離器、電動吸引器擴增檢測熒光定量PCR儀（ABI系列PCR儀、Roche480等）、連續(xù)加樣槍操作操作步驟樣本處理→核酸提取→擴增檢測操作時間樣本處理時間90m