2025年冀教新版選擇性必修3生物上冊(cè)階段測(cè)試試卷

…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………※※請(qǐng)※※不※※要※※在※※裝※※訂※※線※※內(nèi)※※答※※題※※…………○…………外…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………第=page22頁(yè)，總=sectionpages22頁(yè)第=page11頁(yè)，總=sectionpages11頁(yè)2025年冀教新版選擇性必修3生物上冊(cè)階段測(cè)試試卷855考試試卷考試范圍：全部知識(shí)點(diǎn)；考試時(shí)間：120分鐘學(xué)校：______姓名：______班級(jí)：______考號(hào)：______總分欄題號(hào)一二三四五六總分得分評(píng)卷人得分一、選擇題(共8題，共16分)1、下列生物技術(shù)操作對(duì)遺傳物質(zhì)的改變，不會(huì)遺傳給子代的是（）A.將腺苷酸脫氨酶基因轉(zhuǎn)入淋巴細(xì)胞后回輸患者，進(jìn)行基因治療B.將花青素代謝基因?qū)胫参矬w細(xì)胞，經(jīng)組培獲得花色變異植株C.將腸乳糖酶基因?qū)肽膛Ｊ芫?，培育出低乳糖牛乳的奶牛D.將胰島素基因表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌，篩選獲得基因工程菌2、圖為實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)和純化大腸桿菌過程中的部分操作步驟；下列說法不正確的是（）

A.①步驟使用的培養(yǎng)基需先滅菌再調(diào)節(jié)pHB.②步驟接種環(huán)經(jīng)灼燒滅菌冷卻后蘸取菌液C.③到④過程中，每次接種前后都需要對(duì)接種環(huán)進(jìn)行灼燒處理D.①②③步驟操作時(shí)都需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行3、有人認(rèn)為轉(zhuǎn)基因生物勢(shì)必會(huì)打破自然界物種的原有界限，改變生態(tài)系統(tǒng)中的能量流動(dòng)和物質(zhì)循環(huán)，會(huì)對(duì)生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性造成破壞。下列哪項(xiàng)是對(duì)上述觀點(diǎn)的完全反駁（）A.種植轉(zhuǎn)基因抗蟲作物，可以減少農(nóng)藥的使用量B.種植抗除草劑農(nóng)作物，可以保護(hù)農(nóng)田土壤環(huán)境C.重組的微生物在降解某些化合物的過程中所產(chǎn)生的中間產(chǎn)物，可能會(huì)造成二次污染D.轉(zhuǎn)基因生物不會(huì)改變生物原有的分類地位，充其量只能說是具有某種新特征的同一物種，不會(huì)破壞生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性4、下列不宜作為基因工程中標(biāo)記基因的是（）A.核糖體蛋白基因B.熒光蛋白基因C.產(chǎn)物具有顏色反應(yīng)的基因D.抗性基因5、PCR引物的3'端為結(jié)合模板DNA的關(guān)鍵堿基，5'端無嚴(yán)格限制，可用于添加限制酶切點(diǎn)等序列。下列敘述正確的是（）

A.該圖表示PCR循環(huán)中的變性環(huán)節(jié)B.PCR第四次循環(huán)要消耗15對(duì)引物C.Taq酶催化相鄰的兩個(gè)游離dNTP之間形成磷酸二酯鍵D.用圖中引物擴(kuò)增兩個(gè)循環(huán)后即可獲得添加限制酶切點(diǎn)的產(chǎn)物6、下列關(guān)于限制酶的敘述，錯(cuò)誤的是（）A.限制酶可從原核生物中提取B.同一種限制酶切割不同的DNA分子產(chǎn)生的末端能夠進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)C.限制酶能任意切割DNA分子，從而產(chǎn)生大量的DNA片段D.每種限制酶只能識(shí)別特定的脫氧核苷酸序列7、胚胎工程技術(shù)在生產(chǎn)中的應(yīng)用不包括（）A.移植胚胎干細(xì)胞使退化的組織修復(fù)并恢復(fù)正常功能B.進(jìn)行胚胎移植以充分發(fā)揮雌性優(yōu)良個(gè)體的繁殖潛能C.在小鼠腹腔中培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞生產(chǎn)單克隆抗體D.采用機(jī)械方法將早期胚胎分割產(chǎn)生同卵雙胎8、下列關(guān)于生物工程的敘述，正確的是A.在花藥離體培養(yǎng)形成愈傷組織的的過程中，有可能發(fā)生基因的突變和基因重組B.目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的常用方法是顯微注射法C.植物的單倍體育種和雜交育種都必須利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)D.蛋白質(zhì)工程也需要構(gòu)建含控制預(yù)期蛋白質(zhì)合成的基因表達(dá)載體評(píng)卷人得分二、多選題(共8題，共16分)9、下列動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中屬于原代培養(yǎng)的是（）A.通常將動(dòng)物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)B.從機(jī)體取得細(xì)胞后立即進(jìn)行培養(yǎng)的過程C.出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象后接下來的細(xì)胞培養(yǎng)過程D.哺乳動(dòng)物細(xì)胞在培養(yǎng)基中的懸浮生長(zhǎng)過程10、重疊延伸PCR技術(shù)是一種通過寡聚核苷酸鏈之間重疊的部分互相搭橋；互為模板；經(jīng)過多次PCR擴(kuò)增。從而獲得目的基因的方法。該技術(shù)在擴(kuò)增較長(zhǎng)片段的DNA、不同來源的DNA片段拼接、基因的定點(diǎn)誘變等方而具有廣泛的應(yīng)用前景，下圖表示利用重疊延伸PCR技術(shù)擴(kuò)增某目的基因的過程。下列敘述正確的是（）

A.引物中G＋C的含量越高，引物與模板DNA結(jié)合的穩(wěn)定性越高B.在第一階段由于引物2和引物3發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)，因此兩者置于不同反應(yīng)系統(tǒng)中C.引物1、2組成的反應(yīng)系統(tǒng)和引物3、4組成的反應(yīng)系統(tǒng)中均進(jìn)行一次復(fù)制，共產(chǎn)生4種雙鏈DNA分子D.在引物1、2組成的反應(yīng)系統(tǒng)中，經(jīng)第一階段要形成圖示雙鏈DNA，至少要經(jīng)過3次復(fù)制11、研究人員從土壤中篩選得到酵母菌纖維素酶高產(chǎn)菌株；并對(duì)其降解纖維素的條件進(jìn)行了研究。據(jù)圖分析正確的是（）

A.篩選該高產(chǎn)菌株需要在纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基中培養(yǎng)B.探究最適溫度時(shí)應(yīng)盡可能將發(fā)酵液的pH控制在9左右C.該酵母菌高產(chǎn)菌株產(chǎn)生纖維素酶的最適溫度是35℃D.利用該高產(chǎn)菌株降解纖維素時(shí)需嚴(yán)格保持厭氧環(huán)境12、野生型大腸桿菌菌株能在基本培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，氨基酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株無法合成某種氨基酸，只能在完全培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，下圖為純化某氨基酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株的部分流程圖，①②③④代表培養(yǎng)基，A、B、C表示操作步驟，D、E為菌落。下列敘述正確的是（）

A.圖中①②④為完全培養(yǎng)基，③為基本培養(yǎng)基B.A操作的目的是提高突變率，增加突變株的數(shù)量C.B的正確操作是用涂布器蘸取菌液后均勻地涂布在②表面D.經(jīng)C過程原位影印及培養(yǎng)后，可從④中挑取D進(jìn)行純化培養(yǎng)13、地球上的植物每年產(chǎn)生的纖維素超過70億噸，其中40%~60%能被土壤中的某些微生物分解利用，這是因?yàn)樗麄兡軌虍a(chǎn)生纖維素酶。研究者從牛的瘤胃中篩選產(chǎn)生纖維酶的纖維素分解菌，其篩選過程如圖1所示。將丙中的菌懸液轉(zhuǎn)接于含有稻草作碳源的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到若干菌落后用剛果紅處理，看到如圖2所示情況，下列有關(guān)敘述，錯(cuò)誤的是（）

A.②過程是涂布器取乙中的菌液均勻的涂布在Ⅰ號(hào)培養(yǎng)表面B.甲、乙試管中的液體都屬于液體培養(yǎng)基，主要作用是稀釋菌種C.Ⅰ號(hào)、Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基都屬于固體培養(yǎng)基，配置時(shí)先滅菌后調(diào)節(jié)pHD.可挑取圖2中周圍出現(xiàn)透明圈的菌落，用平板劃線法繼續(xù)純化14、聚羥基脂肪酸酯(PHA)是由嗜鹽細(xì)菌合成的一種胞內(nèi)聚酯，它具有類似于合成塑料的理化特性，且廢棄后易被生物降解，可用于制造無污染的“綠色塑料”?？茖W(xué)家從某咸水湖中尋找生產(chǎn)PHA菌種的流程圖如下。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A.步驟②可用稀釋涂布平板法接種到含合成塑料的選擇培養(yǎng)基上B.步驟③所用的培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度越高，對(duì)嗜鹽細(xì)菌的生長(zhǎng)越有利C.步驟④所用到的培養(yǎng)基應(yīng)加入瓊脂，以便挑取單菌落獲得純化菌株D.挑取菌落時(shí)，應(yīng)挑取多個(gè)菌落并分別測(cè)定嗜鹽細(xì)菌的PHA含量15、下圖1表示限制酶SpeⅠ、XbaⅠ的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)，圖2表示基因P（960bp）、基因Q（840bp）的限制酶SpeⅠ或XbaⅠ的酶切圖譜和融合基因，圖3表示幾種基因經(jīng)限制酶SpeⅠ或XbaⅠ處理后進(jìn)行電泳（電泳條帶表示特定長(zhǎng)度的DNA片段）得到的帶譜圖，下列相關(guān)分析正確的是（）

A.基因P經(jīng)限制酶SpeⅠ處理后進(jìn)行電泳的結(jié)果與圖3中的Ⅰ相同B.基因Q經(jīng)限制酶XbaⅠ處理后進(jìn)行電泳的結(jié)果與圖3中的Ⅱ相同C.融合基因經(jīng)限制酶SpeⅠ處理后進(jìn)行電泳的結(jié)果與圖3中的Ⅲ相同D.融合基因經(jīng)限制酶XbaⅠ處理后進(jìn)行電泳的結(jié)果與圖3中的Ⅳ相同16、下列關(guān)于試管嬰兒和克隆猴的敘述，錯(cuò)誤的是（）A.受精過程中，透明帶和卵細(xì)胞膜的反應(yīng)保證了受精卵染色體數(shù)目的正常B.克隆猴的性狀表現(xiàn)與細(xì)胞核供體的一模一樣，體現(xiàn)了動(dòng)物細(xì)胞核具有全能性C.試管嬰兒的生殖方式屬于無性生殖，克隆猴的生殖方式屬于有性生殖D.“設(shè)計(jì)試管嬰兒”與“試管嬰兒”在操作上唯一的區(qū)別是前者需要進(jìn)行遺傳學(xué)診斷評(píng)卷人得分三、填空題(共6題，共12分)17、載體具備的條件：①_____。②具有一至多個(gè)限制酶切點(diǎn)，供外源DNA片段插入。③______。18、_________℃左右最適合酵母菌繁殖，酒精發(fā)酵時(shí)一般將溫度控制在_______________℃。19、在____________的溫度范圍內(nèi)，DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)解體，雙鏈分開，這過程成為__________。20、___________（簡(jiǎn)稱PCR）是一種____________迅速_______________的技術(shù)，它能以極少數(shù)的DNA為模板，在幾個(gè)小時(shí)內(nèi)復(fù)制出上百萬份的DNA拷貝。21、植物基因工程：______。22、蛋白質(zhì)工程在生物制藥上有廣泛的應(yīng)用。如果已經(jīng)確認(rèn)某種新蛋白質(zhì)可能具有特殊的抗癌功能，其氨基酸序列也已經(jīng)確認(rèn)，如何通過蛋白質(zhì)工程生產(chǎn)這種新藥？如果回答有困難，可以向老師請(qǐng)教或通過互聯(lián)網(wǎng)查找答案。_____評(píng)卷人得分四、判斷題(共2題，共6分)23、生殖性克隆和治療性克隆兩者有著本質(zhì)的區(qū)別。()A.正確B.錯(cuò)誤24、中國(guó)政府禁止生殖性克隆，但不反對(duì)治療性克隆。()A.正確B.錯(cuò)誤評(píng)卷人得分五、實(shí)驗(yàn)題(共2題，共6分)25、苯酚是工業(yè)生產(chǎn)排放的有毒污染物質(zhì),自然界中存在著降解苯酚的微生物。某工廠產(chǎn)生的廢水中含有苯酚,為了降解廢水中的苯酚,研究人員從土壤中篩選獲得了只能降解利用苯酚的細(xì)菌菌株,篩選的主要步驟如圖所示,①為土壤樣品。請(qǐng)回答下列問題:

(1)②中培養(yǎng)目的菌株的培養(yǎng)基中應(yīng)加入________作為碳源,②中不同濃度碳源的培養(yǎng)基____（A.影響;B.不影響)細(xì)菌的數(shù)量,如果要測(cè)定②中活細(xì)菌數(shù)量,常采用_____法.

(2)④為對(duì)照,微生物在④中不生長(zhǎng),在⑤中生長(zhǎng),④與⑤培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于_______;使用________法可以在⑥上獲得單菌落;采用固體平板培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)為什么進(jìn)行倒置培養(yǎng)?___________________。

(3)如何比較不同菌株降解苯酚能力的大小?____________________________。

(4)實(shí)驗(yàn)過程中如何防止其他微生物的污染?____________________________。26、炭疽；是一種由炭疽芽孢桿菌引起的人獸共患性傳染病，也是我國(guó)規(guī)定的乙類傳染病?；卮鹣铝杏嘘P(guān)問題：

(1)人通常是通過接觸患炭疽的動(dòng)物或動(dòng)物制品被感染，皮膚炭疽病在人類炭疽病中最為常見，這類患者的皮膚滲出物中含有炭疽芽孢桿菌。皮膚炭疽病疑似患者就醫(yī)時(shí)，醫(yī)生先要取患者的皮膚滲出物稀釋后涂布到固體培養(yǎng)基上，經(jīng)過一段時(shí)間的培養(yǎng)獲得的平板可能是_____。A．B．C．D．(2)挑取上述培養(yǎng)基上的菌落進(jìn)行如圖所示實(shí)驗(yàn)（注：實(shí)驗(yàn)組中的噬菌體能特異性地侵染炭疽芽孢桿菌）。

①該實(shí)驗(yàn)的目的是_____。

②對(duì)照組試管中應(yīng)加入_____，實(shí)驗(yàn)過程中為避免雜菌污染進(jìn)行的操作包括_____（至少寫出兩點(diǎn)）。

③實(shí)驗(yàn)結(jié)果為_____時(shí)；表明該疑似患者被炭疽芽孢桿菌感染。

④實(shí)驗(yàn)過程中需將錐形瓶固定在搖床上，在35℃下振蕩培養(yǎng)24h，直至液體培養(yǎng)基變渾濁。振蕩培養(yǎng)說明炭疽芽孢桿菌的代謝類型是_____，振蕩培養(yǎng)的目的是_____。液體培養(yǎng)基變渾濁的原因是_____。

(3)對(duì)炭疽芽孢桿菌進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，選用10-4、10-5、10-6三個(gè)稀釋度的菌液，各取0．2mL涂布，每個(gè)稀釋度作三次重復(fù)，經(jīng)24h恒溫培養(yǎng)后結(jié)果如表。稀釋度10-410-510-6平板編號(hào)A1A2A3B1B2B3C1C2C3菌落數(shù)31529830245535112911

由表可知，最適合計(jì)數(shù)的稀釋度為_____，原因是_____。評(píng)卷人得分六、綜合題(共3題，共24分)27、科學(xué)家從某細(xì)菌中提取抗鹽基因；轉(zhuǎn)入煙草并培育成轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草，培育過程如圖1所示，圖2為相關(guān)限制酶識(shí)別序列及切割位點(diǎn)?；卮鹣铝袉栴}：

。限制酶。

BamHⅠ

BclⅠ

Sau3AⅠ

HindⅢ

識(shí)別序列及切劑位點(diǎn)。

（1）用圖中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒，應(yīng)選用______________________兩種限制酶切割。若Sau3AI酶切的DNA末端與BamHI酶切的DNA末端連接，該連接序列___________（填“能”；“不能”或“不一定能”）被BamHI酶識(shí)別。

（2）步驟①構(gòu)建的表達(dá)載體，除圖1中質(zhì)粒所示結(jié)構(gòu)外，還需具有___________及目的基因：步驟②中需先用___________處理農(nóng)桿菌以便將重組質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌細(xì)胞；步驟③中通常需要添加酚類物質(zhì)，其目的是________________________________________________________。

（3）將轉(zhuǎn)入抗鹽基因的煙草細(xì)胞在固體培養(yǎng)基上培育成完整的植株需要用___________技術(shù)，此過程除營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外還必須向培養(yǎng)基中添加______________________。

（4）基因工程中的檢測(cè)篩選是一個(gè)重要的步驟。為篩選出導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌，圖2表示運(yùn)用影印培養(yǎng)法（使一系列培養(yǎng)皿的相同位置上能出現(xiàn)相同菌落的一種接種培養(yǎng)方法）檢測(cè)基因表達(dá)載體是否導(dǎo)入了農(nóng)桿菌。在培養(yǎng)基A篩選的基礎(chǔ)上，培養(yǎng)基B除了含有細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖必需的成分外，還應(yīng)加入___________。從檢測(cè)篩選的結(jié)果分析，含有目的基因的是___________菌落中的細(xì)菌。28、請(qǐng)回答基因工程方面的有關(guān)問題:

（1）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因,其原理與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制類似（如下圖所示）。圖中引物為單鏈DNA片段,它是子鏈合成延伸的基礎(chǔ)。

①理論上推測(cè),第四輪循環(huán)產(chǎn)物中含有引物A的DNA片段所占的比例為____________。

②在第_________輪循環(huán)產(chǎn)物中開始出現(xiàn)兩條脫氧核苷酸鏈等長(zhǎng)的DNA片段。

（2）設(shè)計(jì)引物是PCR技術(shù)關(guān)鍵步驟之一。某同學(xué)設(shè)計(jì)的兩組引物（只標(biāo)注了部分堿基序列）都不合理（如圖）,請(qǐng)分別說明理由。

①第1組:_____________________________________________；

②第2組:_____________________________________________。

（3）PCR反應(yīng)體系中含有熱穩(wěn)定DNA聚合酶,下面的表達(dá)式不能正確反映DNA聚合酶的功能,這是因?yàn)開____。

（4）用限制酶EcoRV、MboⅠ單獨(dú)或聯(lián)合切割同一種質(zhì)粒,得到的DNA片段長(zhǎng)度如下圖（1kb即1000個(gè)堿基對(duì)）,請(qǐng)畫出質(zhì)粒上EcoRV、MboⅠ的切割位點(diǎn)_____________________。

29、新冠病毒外殼中的5蛋白具有很強(qiáng)的抗原性；S蛋白與人細(xì)胞膜上ACE2受體結(jié)合后入侵人體細(xì)胞，導(dǎo)致人體患肺炎，抗體可阻斷病毒的黏附或入侵。2021年12月8日，我國(guó)首個(gè)抗新冠病毒特效藥——安巴韋單抗/羅米司韋單抗聯(lián)合療法特效藥獲得中國(guó)藥監(jiān)局的上市批準(zhǔn)，這標(biāo)志著中國(guó)擁有的首個(gè)全自主研發(fā)并證明有效的抗新冠病毒抗體特效藥正式問世?；卮鹣铝袉栴}：

(1)制備抗S蛋白單克隆抗體時(shí)，分多次間隔給小鼠注射S蛋白，能獲得大量產(chǎn)生_________的B淋巴細(xì)胞。誘導(dǎo)小鼠B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合時(shí)，采用的誘導(dǎo)方法具體有_________（2點(diǎn)）。

(2)為選出能產(chǎn)生專一抗體的細(xì)胞，要從特定培養(yǎng)基上篩選出雜交瘤細(xì)胞，然后稀釋滴入多孔培養(yǎng)板中，使多孔培養(yǎng)板每孔中_________，然后篩選出抗體檢測(cè)呈_________（填“陽(yáng)性”或“陰性”）的細(xì)胞進(jìn)行克隆化培養(yǎng)；該克隆化培養(yǎng)細(xì)胞具有_________的特點(diǎn)（2點(diǎn)）。

(3)用抗S蛋白的單克隆抗體生產(chǎn)的新冠病毒抗原試紙能準(zhǔn)確診斷出某人是否感染原因是抗S蛋白的單克隆抗體_________。

(4)鼠源單克隆抗體進(jìn)入人體后，會(huì)使人體產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)，導(dǎo)致該抗體失效。目前有多種技術(shù)可以解決抗體失效問題，如從雜交瘤細(xì)胞中提取編碼鼠源單克隆抗體的_________（填“5區(qū)”或“6區(qū)”，抗體的結(jié)構(gòu)如下圖所示）序列的基因，與從人體中獲得的編碼抗體_________（填“5區(qū)”或“6區(qū)”）的基因進(jìn)行拼接，然后導(dǎo)入骨髓瘤細(xì)胞中，進(jìn)行培養(yǎng)獲得新的抗體。

參考答案一、選擇題(共8題，共16分)1、A【分析】【分析】

轉(zhuǎn)基因技術(shù)的原理是基因重組?；蛑亟M和基因突變；染色體變異均屬于可遺傳的變異?；蛑委熓侵赴颜；?qū)氩∪梭w內(nèi)；使該基因的表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮功能，從而達(dá)到治療疾病的目的。

【詳解】

A；將腺苷酸脫氨酶基因轉(zhuǎn)入淋巴細(xì)胞后回輸患者；進(jìn)行基因治療時(shí)不會(huì)改變其他細(xì)胞的基因組成，且淋巴細(xì)胞不能進(jìn)行減數(shù)分裂，產(chǎn)生配子，所以不會(huì)遺傳給子代，A正確；

B；將花青素代謝基因?qū)胫参矬w細(xì)胞；經(jīng)組培獲得花色變異植株，說明花青素代謝基因可表達(dá)，花色變異植株細(xì)胞中都含花青素代謝基因，因而能遺傳給子代，B錯(cuò)誤；

C；將腸乳糖酶基因?qū)肽膛Ｊ芫?；培育出產(chǎn)低乳糖牛乳的奶牛細(xì)胞中都含腸乳糖酶基因，因而能遺傳給子代，C錯(cuò)誤；

D；將胰島素基因表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌；篩選獲得基因工程菌，重組質(zhì)粒能隨細(xì)菌分裂而遺傳給后代，D錯(cuò)誤。

故選A。2、A【分析】【分析】

根據(jù)題圖分析；①是倒平板，②是用接種環(huán)沾取菌液，③是進(jìn)行平板劃線，④是培養(yǎng)。

【詳解】

A；①步驟為倒平板；使用的培養(yǎng)基需要先調(diào)節(jié)pH再滅菌，避免調(diào)pH時(shí)造成污染，A錯(cuò)誤；

B；②中接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)冷卻后再挑取菌液；以防高溫殺死大腸桿菌，B正確；

C；③到④過程中；每次劃線前后對(duì)接種環(huán)進(jìn)行灼燒處理，是為了殺死接種環(huán)上殘留的菌種，使劃線時(shí)接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，C正確；

D；①②③步驟操作時(shí)都需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行；防止被雜菌污染，D正確。

故選A。

【點(diǎn)睛】3、D【分析】【分析】

轉(zhuǎn)基因生物的安全性問題：食物安全（滯后效應(yīng)；過敏源、營(yíng)養(yǎng)成分改變）、生物安全（對(duì)生物多樣性的影響）、環(huán)境安全（對(duì)生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性的影響）?？瓜x棉的種植；減少了農(nóng)藥的使用，有利于保護(hù)農(nóng)田的土壤環(huán)境；但是抗蟲棉不抗蚜蟲、盲椿象、紅蜘蛛等害蟲，導(dǎo)致這些害蟲大面積的爆發(fā)，破壞了自然界的生態(tài)平衡，對(duì)環(huán)境造成了負(fù)面影響；另外棉鈴蟲對(duì)抗性頻率越來越大．重組的微生物在降解污染物的過程中可能產(chǎn)生一些中間產(chǎn)物，產(chǎn)生二次污染。

【詳解】

A；種植轉(zhuǎn)基因抗蟲作物；可以減少農(nóng)藥的使用量是轉(zhuǎn)基因生物的優(yōu)點(diǎn)，A錯(cuò)誤；

B；種植抗除草劑農(nóng)作物可以保護(hù)農(nóng)田土壤環(huán)境是轉(zhuǎn)基因生物的優(yōu)點(diǎn)；B錯(cuò)誤；

C；重組的微生物在降解某些化合物的過程中所產(chǎn)生的中間產(chǎn)物；可能會(huì)造成第二次污染與題干要求不符，C錯(cuò)誤；

D；轉(zhuǎn)基因生物不會(huì)改變生物原有的分類地位；充其量只能說明它具有某種新特征的同一物種，不會(huì)破壞生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性，該觀點(diǎn)與轉(zhuǎn)基因生物對(duì)生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性造成破壞相反，D正確。

故選D。4、A【分析】【分析】

基因工程的關(guān)鍵步驟是構(gòu)建基因表達(dá)載體；基因表達(dá)載體主要由啟動(dòng)子；目的基因、標(biāo)記基因和終止子組成，其中標(biāo)記基因用于篩選重組DNA分子，可以是四環(huán)素、氨芐青霉素等抗性基因，也可以是熒光蛋白基因或產(chǎn)物能顯色的基因。

【詳解】

A；核糖體蛋白所有細(xì)胞中都含有；不易檢測(cè)，不宜作為基因工程中標(biāo)記基因，A符合題意；

B；發(fā)光基因如綠色熒光蛋白基因可以用作基因工程的標(biāo)記基因；B不符合題意；

C；產(chǎn)物具有顏色反應(yīng)的基因可根據(jù)顏色反應(yīng)是否發(fā)生篩選重組質(zhì)粒；可以用作基因工程的標(biāo)記基因，C不符合題意；

D；抗性基因可作為基因工程的標(biāo)記基因；篩選重組質(zhì)粒，D不符合題意。

故選A。5、D【分析】【分析】

PCR全稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)；是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)。PCR需要模板DNA；四種脫氧核苷酸、一對(duì)引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）。

【詳解】

A；圖中引物與模板鏈堿基互補(bǔ)配對(duì)；該圖表示PCR循環(huán)中的復(fù)性環(huán)節(jié)，A錯(cuò)誤；

B、PCR三次循環(huán)共消耗7（23-1）對(duì)引物，PCR四次循環(huán)共消耗15（24-1）對(duì)引物；第四次循環(huán)要消耗8對(duì)引物，B錯(cuò)誤；

C；dNMP只有一個(gè)磷酸基團(tuán)；為脫氧核苷酸，dNTP有三個(gè)磷酸基團(tuán)，延伸時(shí)，在Taq酶催化下，dNMP作為擴(kuò)增的原料會(huì)依次連接到3'端，相鄰的dNMP間形成磷酸二酯鍵，C錯(cuò)誤；

D；由于一個(gè)引物不在該片段的端點(diǎn)；因此第一輪循環(huán)后，得到的一個(gè)DNA片段中兩條脫氧核苷酸鏈都不等長(zhǎng)，通過繪圖可推知，再經(jīng)過一次循環(huán)，產(chǎn)物中開始出現(xiàn)脫氧核苷酸鏈等長(zhǎng)的DNA片段，所以擴(kuò)增兩個(gè)循環(huán)后即可獲得添加限制酶切點(diǎn)的產(chǎn)物，D正確。

故選D。6、C【分析】【分析】

限制酶屬于基因工程中的工具酶的一種：

來源：主要從原核生物中分離純化出來。

特異性：能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列；并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂，形成黏性末端和平末端兩種。

作用部位：磷酸二酯鍵。

【詳解】

A；限制酶可以從某些原核生物中提?。籄正確；

B；同一種限制酶切割不同的DNA分子時(shí)；由于識(shí)別位點(diǎn)相同，所產(chǎn)生的末端相同，能夠進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)，B正確；

C；限制酶只能識(shí)別特定的脫氧核苷酸序列；而不能任意切割DNA分子，C錯(cuò)誤；

D；一種限制酶只能識(shí)別一種特定的脫氧核苷酸序列；D正確。

故選C。7、C【分析】【分析】

胚胎工程是指對(duì)動(dòng)物早期胚胎或配子所進(jìn)行的多種顯微操作和處理技術(shù)。包括體外受精；胚胎移植、胚胎分割移植、胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)等技術(shù)。

【詳解】

A；胚胎工程包括體外受精、胚胎移植、胚胎分割移植、胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)等技術(shù)；移植胚胎干細(xì)胞使退化的組織修復(fù)并恢復(fù)正常功能，屬于胚胎工程技術(shù)，A正確；

B；進(jìn)行胚胎移植可以充分發(fā)揮雌性優(yōu)良個(gè)體的繁殖潛能；胚胎移植屬于胚胎工程，B正確；

C；在小鼠腹腔中培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞生產(chǎn)單克隆抗體屬于動(dòng)物細(xì)胞融合工程中；不屬于胚胎工程，C錯(cuò)誤；

D；采用機(jī)械方法將早期胚胎分割產(chǎn)生同卵雙胎；胚胎分割屬于胚胎工程，D正確。

故選C。8、D【分析】【分析】

【詳解】

A；基因重組只發(fā)生在減數(shù)分裂過程中；愈傷組織的形成過程只有有絲分裂，A錯(cuò)誤；

B；目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的常用方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；B錯(cuò)誤；

C；植物的單倍體育種必須利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)；雜交育種不需要利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，C錯(cuò)誤；

D；蛋白質(zhì)工程包含基因工程技術(shù)；也需要構(gòu)建含控制預(yù)期蛋白質(zhì)合成的基因表達(dá)載體，D正確。

故選D

【點(diǎn)睛】二、多選題(共8題，共16分)9、A:B【分析】【分析】

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)；取幼齡動(dòng)物的組織，剪碎后，用胰蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞，制成細(xì)胞懸浮液，轉(zhuǎn)入細(xì)胞培養(yǎng)液中進(jìn)行的培養(yǎng)是原代培養(yǎng)；當(dāng)細(xì)胞貼滿瓶壁，在用胰蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞，制成細(xì)胞懸浮液，轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中進(jìn)行的是傳代培養(yǎng)。

【詳解】

A；通常將動(dòng)物組織經(jīng)處理后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)；A正確；

B；從機(jī)體取得細(xì)胞后立即進(jìn)行培養(yǎng)過程是原代培養(yǎng)；B正確；

C；出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象后；接去下的細(xì)胞的培養(yǎng)過程是傳代培養(yǎng)，C錯(cuò)誤；

D；無論原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)細(xì)胞過程；細(xì)胞都有在培養(yǎng)基中的懸浮生長(zhǎng)過程，D錯(cuò)誤。

故選AB。10、A:B【分析】【分析】

PCR擴(kuò)增運(yùn)用DNA分子復(fù)制的原理；經(jīng)過變性；復(fù)性、延伸，最終獲得大量DNA的過程。

【詳解】

A；引物中G＋C的含量越高；C和G之間是三個(gè)氫鍵連接，因此引物與模板DNA結(jié)合的穩(wěn)定性越高，A正確；

B；圖中可知；引物2和引物3分別作用同一段DNA的兩條鏈，會(huì)發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)，因此兩者置于不同反應(yīng)系統(tǒng)中，B正確；

C；引物1、2組成的反應(yīng)系統(tǒng)和引物3、4組成的反應(yīng)系統(tǒng)中均進(jìn)行一次復(fù)制；共產(chǎn)生2種雙鏈DNA分子，C錯(cuò)誤；

D；在引物1、2組成的反應(yīng)系統(tǒng)中；經(jīng)第一階段要形成圖示雙鏈DNA，至少要經(jīng)過2次復(fù)制，D錯(cuò)誤。

故選AB。11、A:B【分析】【分析】

分解纖維素微生物的分離實(shí)驗(yàn)原理：

（1）土壤中存在著大量纖維素分解酶；包括真菌；細(xì)菌和放線菌等，它們可以產(chǎn)生纖維素酶。纖維素酶是一種復(fù)合酶，可以把纖維素分解為纖維二糖，進(jìn)一步分解為葡萄糖使微生物加以利用，故在用纖維素作為唯一碳源的培養(yǎng)基中，纖維素分解菌能夠很好地生長(zhǎng)，其他微生物則不能生長(zhǎng)。

（2）在培養(yǎng)基中加入剛果紅；可與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被分解后，紅色復(fù)合物不能形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，從而可篩選纖維素分解菌。

【詳解】

A；篩選該高產(chǎn)菌株需要在纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基中培養(yǎng)；A正確；

B；由pH與纖維素酶活性的曲線圖分析可知；當(dāng)pH為9時(shí)，纖維素酶的活性最高，故在探究最適溫度時(shí)應(yīng)盡可能將發(fā)酵液的pH控制在9左右，B正確；

C；由溫度與纖維素酶活性的曲線圖分析可知；當(dāng)溫度為35℃時(shí)纖維素酶的活性最大，但是由于缺少35℃之后的溫度實(shí)驗(yàn)組，故無法判斷該酵母菌高產(chǎn)菌株產(chǎn)生纖維素酶的最適溫度是35℃，C錯(cuò)誤；

D；酵母菌是兼性厭氧微生物；在有氧條件下，酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，大量繁殖，故在降解初期需要給酵母菌提高有氧環(huán)境，以保證酵母菌的數(shù)量，D錯(cuò)誤。

故選AB。

【點(diǎn)睛】12、A:D【分析】【分析】

由題圖信息分析可知；圖中首先利用培養(yǎng)基擴(kuò)增菌體，然后在涂布在平板上，再通過影印法將菌種接種到兩種培養(yǎng)基中，分別是基本培養(yǎng)基；完全培養(yǎng)基；野生型大腸桿菌菌株能在基本培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，而氨基酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株由于發(fā)生基因突變無法合成某種氨基酸只能在完全培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，據(jù)此利用培養(yǎng)基的種類便可以選擇出氨基酸突變株。

【詳解】

A；野生型大腸桿菌菌株能在基本培養(yǎng)基上生長(zhǎng)；氨基酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株無法合成某種氨基酸，只能在完全培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，根據(jù)題干信息和圖形分析，圖中①②④中含有菌落，①②④為完全培養(yǎng)基，③中影印處無菌落，③為基本培養(yǎng)基，A正確；

B；紫外線可以提高突變的頻率；而A操作即培養(yǎng)的目的是提高已經(jīng)突變菌株的濃度（A操作不能提高突變率），即增加突變株的數(shù)量，B錯(cuò)誤；

C；B操作是將菌液滴加到培養(yǎng)基表面；再用涂布器將菌液均勻的涂布在②表面，C錯(cuò)誤；

D；從圖中可看出；D在③基本培養(yǎng)基中無法生長(zhǎng)，在完全培養(yǎng)基中可生長(zhǎng)，說明D是氨基酸缺陷型菌落，故經(jīng)C過程影印及培養(yǎng)后，可從④培養(yǎng)基中挑取D菌落進(jìn)行純化培養(yǎng)，D正確。

故選AD。13、A:B:C【分析】分解纖維素的微生物的分離實(shí)驗(yàn)的原理：①土壤中存在著大量纖維素分解酶；包括真菌；細(xì)菌和放線菌等，它們可以產(chǎn)生纖維素酶。纖維素酶是一種復(fù)合酶，可以把纖維素分解為纖維二糖，進(jìn)一步分解為葡萄糖使微生物加以利用，故在用纖維素作為唯一碳源的培養(yǎng)基中，纖維素分解菌能夠很好地生長(zhǎng)，其他微生物則不能生長(zhǎng)。②在培養(yǎng)基中加入剛果紅，可與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被分解后，紅色復(fù)合物不能形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，從而可篩選纖維素分解菌。

【詳解】

A；根據(jù)Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基上菌落分布均勻可知；②過程是用涂布器取乙中的樣品稀釋液均勻的涂布在Ⅰ號(hào)培養(yǎng)表面，即乙中是分解纖維素菌的樣品稀釋液，不是菌液，A錯(cuò)誤；

B；液體培養(yǎng)基的作用是讓菌體增殖；而不是稀釋菌種，甲、乙試管中的液體都是樣品稀釋液，捕食液體培養(yǎng)基，B錯(cuò)誤；

C；配置固體培養(yǎng)基的基本步驟是計(jì)算、稱量、溶化、調(diào)pH、滅菌、倒平板；故需要先調(diào)pH，再滅菌，C錯(cuò)誤；

D；剛果紅能與纖維素形成紅色復(fù)合物；若菌落周圍出現(xiàn)透明圈，說明纖維素分解菌將纖維素進(jìn)行了分解，可挑取該菌落用平板劃線法繼續(xù)純化該菌體，D正確。

故選ABC。14、A:B:C【分析】【分析】

聚羥基脂肪酸酯（PHA）是由嗜鹽細(xì)菌合成的一種胞內(nèi)聚酯；要從某咸水湖中尋找生產(chǎn)PHA菌種，首先要進(jìn)行目的菌株的篩選，可將咸湖水接種在含鹽量較高的選擇培養(yǎng)基上，篩選培養(yǎng)得到嗜鹽細(xì)菌；然后，從選擇培養(yǎng)基上挑選多個(gè)單菌落分別進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，擴(kuò)大培養(yǎng)的培養(yǎng)基是液體培養(yǎng)基；最后檢測(cè)嗜鹽細(xì)菌的數(shù)目和PHA的產(chǎn)量，選擇PHA產(chǎn)量最高的嗜鹽細(xì)菌作為目的菌株。

【詳解】

A；PHA是由嗜鹽細(xì)菌合成的一種胞內(nèi)聚酯；要篩選嗜鹽細(xì)菌，步驟②可用稀釋涂布平板法接種到含鹽量較高的選擇培養(yǎng)基上，A錯(cuò)誤；

B；步驟③培養(yǎng)基濃度過高；會(huì)導(dǎo)致菌體失水死亡，不利于嗜鹽細(xì)菌的生長(zhǎng)，B錯(cuò)誤；

C；步驟④擴(kuò)大培養(yǎng)應(yīng)選用液體培養(yǎng)基；液體培養(yǎng)基中無需加入瓊脂，C錯(cuò)誤；

D；要挑選高產(chǎn)聚羥基脂肪酸酯（PHA）的嗜鹽菌；挑取菌落時(shí)，應(yīng)挑取多個(gè)菌落并分別測(cè)定嗜鹽細(xì)菌的PHA含量，進(jìn)行比較，D正確。

故選ABC。15、A:B:D【分析】【分析】

限制酶能識(shí)別雙鏈DNA中特定的核苷酸序列并進(jìn)行切割；具有特異性；DNA連接酶將不同的DNA片段連接成DNA鏈。

【詳解】

A、根據(jù)圖2所示，基因P上有限制酶SPeⅠ的一個(gè)酶切位點(diǎn)，基因P的總長(zhǎng)度960bp；所以經(jīng)酶切后可以得到兩個(gè)小于960的片段，符合圖3中的Ⅰ，A正確；

B、根據(jù)圖2所示，基因Q上有限制酶XbaⅠ的一個(gè)酶切位點(diǎn)，基因P的總長(zhǎng)度為840bP；所以經(jīng)酶切后可以得到兩個(gè)小于840的片段，符合圖3中的Ⅱ，B正確；

CD、融合基因中沒有限制酶SPeⅠ和限制酶XbaⅠ的酶切位點(diǎn)；所以用這兩種端處理都不會(huì)斷開，因此處理之后只有一個(gè)片段，符合圖3中的Ⅳ，C錯(cuò)誤，D正確。

故選ABD。16、B:C:D【分析】【分析】

1；“試管嬰兒”是利用體外授精和胚胎移植的方法；解決不孕夫婦的生育問題。

2；設(shè)計(jì)試管嬰兒概念：是指體外受精形成的胚胎在植入母體孕育前；根據(jù)人們的需要，將胚胎的一個(gè)細(xì)胞取出，進(jìn)行某些設(shè)計(jì)，當(dāng)檢測(cè)結(jié)果符合人們需要時(shí)，再把胚胎植入母體孕育。

【詳解】

A；透明帶和卵細(xì)胞膜的反應(yīng)可以防止多精入卵；從而保證受精卵染色體數(shù)目的正常，A正確；

B；由于細(xì)胞質(zhì)中也存在基因控制生物性狀；所以克隆猴的性狀不完全與細(xì)胞核供體的相同，B錯(cuò)誤；

C；試管嬰兒技術(shù)與正常的生殖過程相比僅僅是受精和早期胚胎發(fā)育的場(chǎng)所不同；實(shí)質(zhì)沒有變化，屬于有性生殖；而克隆猴是將動(dòng)物體細(xì)胞的細(xì)胞核移植到去核的卵細(xì)胞后發(fā)育成的新個(gè)體，屬于無性生殖的范疇，C錯(cuò)誤；

D；設(shè)計(jì)試管嬰兒與試管嬰兒的主要區(qū)別是前者在胚胎植入前需進(jìn)行遺傳學(xué)診斷；設(shè)計(jì)試管嬰兒有時(shí)除體外受精、胚胎培養(yǎng)和胚胎移植外還需要借助其它技術(shù)，D錯(cuò)誤。

故選BCD。三、填空題(共6題，共12分)17、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】能在受體細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存具有標(biāo)記基因，供重組DNA的鑒定和選擇18、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】2018～2519、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】80—100℃變性20、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體外擴(kuò)增DNA片段21、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】抗蟲、抗病、抗逆轉(zhuǎn)基因植物，利用轉(zhuǎn)基因改良植物的品質(zhì)22、略

【分析】【詳解】

蛋白質(zhì)工程的基本途徑：從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)，設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列，找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列，以下按照基因工程的一般步驟進(jìn)行。該蛋白質(zhì)的氨基酸序列已知，因此通過蛋白質(zhì)工程，生產(chǎn)該蛋白質(zhì)新藥的基本過程為：根據(jù)已知的氨基酸序列→找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列→合成該蛋白質(zhì)新藥基因→將獲得的目的基因與質(zhì)粒構(gòu)建形成基因表達(dá)載體→將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體菌→獲得工程菌→生產(chǎn)該蛋白質(zhì)新藥?！窘馕觥扛鶕?jù)已知的氨基酸序列→找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列→合成該蛋白質(zhì)新藥基因→將獲得的目的基因與質(zhì)粒構(gòu)建形成基因表達(dá)載體→將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體菌→獲得工程菌→生產(chǎn)該蛋白質(zhì)新藥四、判斷題(共2題，共6分)23、A【分析】【分析】

生殖性克隆和治療性克隆兩者有著本質(zhì)區(qū)別；最重要的體現(xiàn)在目的不同。

【詳解】

治療性克?。菏侵赴芽寺〕鰜淼慕M織和器官用于治療疾病，這種用于醫(yī)療目的的使用克隆技術(shù)制造胚胎稱為治療性克隆。生殖性克?。禾幱谏车哪康氖褂每寺〖夹g(shù)在實(shí)驗(yàn)室制造人類胚胎。治療性克隆和生殖性克隆最重要的差別是目的不同。24、A【分析】【分析】

轉(zhuǎn)基因生物的安全性問題：食物安全（滯后效應(yīng)；過敏源、營(yíng)養(yǎng)成分改變）、生物安全（對(duì)生物多樣性的影響）、環(huán)境安全（對(duì)生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性的影響）。治療性克?。褐咐每寺〖夹g(shù)產(chǎn)生特定細(xì)胞和組織（皮膚、神經(jīng)或肌肉等）用于治療性移植。生殖性克?。褐笇⒖寺〖夹g(shù)用于生育目的；即用于產(chǎn)生人類個(gè)體。中國(guó)政府：禁止生殖性克隆人，堅(jiān)持四不原則（不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人實(shí)驗(yàn)），不反對(duì)治療性克隆人。

【詳解】

據(jù)分析可知；中國(guó)政府禁止生殖性克隆，但不反對(duì)治療性克隆。

故正確。五、實(shí)驗(yàn)題(共2題，共6分)25、略

【分析】【詳解】

（1）②中的選擇培養(yǎng)基中應(yīng)加入苯酚作為碳源；②中不同濃度的碳源A影響細(xì)菌數(shù)量，稀釋涂布平板法來測(cè)定②中活菌數(shù)目。

（2）④與⑤培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于④的培養(yǎng)基沒有加入苯酚作為碳源；⑤培養(yǎng)基的中加入苯酚作為碳源。使用釋涂布平板法或平板劃線法可以在（6）上獲得單菌落。采用固體平板培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)要倒置培養(yǎng)，以防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基。

（3）5支潔凈培養(yǎng)瓶→分別加入相同培養(yǎng)基（加等量的苯酚；用pH試紙檢測(cè)這5支瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基的pH值，用苯酚調(diào)試使之相等，苯酚是唯一的碳源）→分別接種5種等量的來自不同菌株的菌種→在相同的適宜條件下培養(yǎng)相同時(shí)間→再用pH試紙檢測(cè)這5支瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基的pH.苯酚顯酸性，不同菌株的菌種降解苯酚的能力不同，5支瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基中的苯酚被分解的量不同，所以pH值不同。用pH試紙檢測(cè)這5支瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基的pH值，從而比較不同菌株降解苯酚能力的大小。

（4）從制備培養(yǎng)基到接種與培養(yǎng)等全部實(shí)驗(yàn)過程要無菌操作，通過培養(yǎng)基滅菌、接種環(huán)境滅菌、接種過程無菌操作等都可以防止其他微生物的污染?！窘馕觥竣?苯酚②.A③.稀釋涂布平板④.①含除苯酚外的其他碳源；②以苯酚作為唯一碳源⑤.稀釋涂布平板法或平板劃線⑥.避免培養(yǎng)過程中產(chǎn)生的水分影響微生物的生長(zhǎng)⑦.用同樣苯酚濃度的培養(yǎng)液培養(yǎng)不同菌株,一定時(shí)間后,測(cè)定培養(yǎng)液中苯酚的含量⑧.培養(yǎng)基滅菌、接種環(huán)境滅菌、接種過程無菌操作26、略

【分析】【分析】

1；稀釋涂布平板法：將待測(cè)樣品制成均勻的系列稀釋液；盡量使樣品中的微生物細(xì)胞分散開，使成單個(gè)細(xì)胞存在，再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)。2、平板劃線法：把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細(xì)胞，用接種環(huán)在平板表面上作多次由點(diǎn)到線的劃線稀釋而獲得較多獨(dú)立分布的單個(gè)細(xì)胞，并讓其成長(zhǎng)為單菌落的方法。

【詳解】

（1）A；B、C中的菌落分布較均勻；是通過稀釋涂布平板法獲得的，而D是通過平板劃線法獲得的，劃線平板法是從上一次劃線的末端開始劃線。故選ABC。

（2）①?gòu)恼麄€(gè)實(shí)驗(yàn)過程可以看出；實(shí)驗(yàn)通過對(duì)皮膚滲出物稀釋培養(yǎng)形成的菌落進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)后，利用噬菌體的作用檢測(cè)其中是否含有炭疽芽孢桿菌。②對(duì)照組中加入的液體不應(yīng)含有噬菌體，因此應(yīng)加入等量的生理鹽水；在進(jìn)行微生物培養(yǎng)時(shí)為防止雜菌的混入，消毒和滅菌工作是關(guān)鍵，主要包括對(duì)操作的空間；操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒；將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌；實(shí)驗(yàn)操作在酒精燈火焰附近進(jìn)行；操作過程中避免已經(jīng)滅菌的材料用具與周圍物品相接觸等。③若實(shí)驗(yàn)組液體培養(yǎng)基的渾濁度低于對(duì)照組，說明實(shí)驗(yàn)組中的炭疽芽孢桿菌被噬菌體侵染與破壞，即該疑似患者感染了炭疽芽孢桿菌。④炭疽芽孢桿菌屬于細(xì)菌，能寄生在人和動(dòng)物體內(nèi)，說明它是異養(yǎng)型生物，培養(yǎng)時(shí)需要借助搖床振蕩培養(yǎng)，說明它是需氧型生物；振蕩培養(yǎng)的目的是增加培養(yǎng)液中的氧氣含量，使細(xì)菌與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)充分接觸，有利于炭疽芽孢桿菌的大量繁殖；培養(yǎng)液變渾濁表明炭疽芽孢桿菌大量繁殖。

（3）分析表中數(shù)據(jù)可知，只有稀釋度為10-5時(shí)菌落數(shù)在30~300之間，適合用于計(jì)數(shù)?！窘馕觥?1)ABC

(2)檢驗(yàn)皮膚炭疽病疑似患者的皮膚滲出物中是否含有炭疽芽孢桿菌與實(shí)驗(yàn)組等量的生理鹽水對(duì)操作的空間；操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒；將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌；實(shí)驗(yàn)操作在酒精燈火焰附近進(jìn)行；操作過程中避免已經(jīng)滅菌的材料用具與周圍物品相接觸實(shí)驗(yàn)組液體培養(yǎng)基的渾濁度比對(duì)照組低（異養(yǎng)）需氧型增加培養(yǎng)液中的氧氣含量；使細(xì)菌與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)充分接觸炭疽芽孢桿菌大量繁殖。

(3)10-5稀釋度為10-5時(shí)菌落數(shù)在30~300之間六、綜合題(共3題，共24分)27、略

【分析】【分析】

分析圖1：圖1所示為轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草的培育過程；其中①表示重組質(zhì)粒的構(gòu)建過程；②表示重組質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌；③表示采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞；④表示植物組織培養(yǎng)。

分析表格：表中BamHI；BclI和Sau3AI三種酶切割位點(diǎn)有共同的序列GATC；其中Sau3AI酶能切割BamHI、BclI和Sau3AI三種切割位點(diǎn)。

【詳解】

（1）用圖中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒；不能選用BclI酶，因?yàn)樵撁笗?huì)破壞復(fù)制原點(diǎn)；也不能用HindⅢ酶切割，該酶與Sau3AI酶和BamHI酶切割后的粘性末端不同。所以應(yīng)選用Sau3AI酶和BamHI酶兩種限制酶切割。若Sau3AI酶切的DNA末端與BamHI酶切的DNA末端連接，序列可能是GGATCC，也可能不是，該連接序列不一定能被BamHI酶識(shí)別。

（2）基因表達(dá)載體的組成包括目的基因、標(biāo)記基因、啟動(dòng)子、終止子和復(fù)制原點(diǎn)，步驟①構(gòu)建的表達(dá)載體，除圖1中質(zhì)粒所示結(jié)構(gòu)外，還需具有啟動(dòng)子、終止子及目的基因；農(nóng)桿菌為細(xì)菌，細(xì)菌作受體細(xì)胞時(shí)需先用Ca2+處理；讓細(xì)胞膜通過性增加，以使農(nóng)桿菌細(xì)胞處于能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，以便將重組質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌細(xì)胞；為吸引農(nóng)桿菌移向煙草細(xì)胞，有利于目的基因成果轉(zhuǎn)化，通常在步驟③中通常需要添加酚類物質(zhì)。

（3）運(yùn)用植物組織培養(yǎng)技術(shù)；能將轉(zhuǎn)入抗鹽基因的煙草細(xì)胞在固體培養(yǎng)基上培育成完整的植株。題中植物組織培養(yǎng)過程除營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外還必須向培養(yǎng)基中添加植物激素（生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素），以促進(jìn)細(xì)胞增殖分化產(chǎn)生根；莖等。

（4）基因工程中的檢測(cè)篩選是一個(gè)重要的步驟。常根據(jù)標(biāo)記基因設(shè)計(jì)培養(yǎng)基；最終篩選出導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌。圖3表示影印培養(yǎng)法，分析可知，培養(yǎng)基B除了含有細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖必需的成分外，還含有氨芐青霉素（或四環(huán)素或氨芐青霉素和四環(huán)素），能在此培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的農(nóng)桿菌含有非重組質(zhì)粒（有氨芐青霉素抗性基因），不能在此培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的農(nóng)桿菌只含有重組質(zhì)粒（重組質(zhì)粒構(gòu)建破壞了氨芐青霉素抗性基因，