《豬細管凍精解凍復蘇及深部輸精技術規(guī)程》

ICS65.020.30

B43

DB52DB52/TXXXX—XXXX

貴州省地方標準

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豬細管凍精解凍復蘇及深部輸精技術規(guī)程

Technicalprotocolfordeepspermdeliveryofporcinefinetubefrozensemen

(征求意見稿)

2022-XX-XX實施

2022-XX-XX發(fā)布

貴州省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

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豬細管凍精解凍復蘇及深部輸精技術規(guī)程

1范圍

本文件制定了豬細管冷凍精液深部輸精的技術程序，規(guī)定了發(fā)情鑒定、凍精解凍、稀釋分裝、深

部輸精、妊娠檢查等技術環(huán)節(jié)要求等。

本文件適用于豬細管冷凍精液（以下簡稱“豬凍精”）深部輸精操作。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可缺少的條款。其中，注日期的引用

文件，僅注日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件,其最新版本（包括所有的修改單）適

用于本文件。

GB/T5458液氮生物容器

GB23238—2021種豬常溫精液

NY/T636豬人工授精技術規(guī)程

3術語和定義

下列術語和定義適用于本文件。

3.1冷凍精液frozensemen

經特殊方法處理的精液超低溫冷凍后在液氮中（-196℃）長期保存。

[來源：GB20557-2006，3.5]

3.2細管冷凍精液Frozensperminfinetubes

原精經過特殊處理液灌注到細管中，再通過超低溫冷凍程序處理制成的凍精產品，簡稱“細管凍

精”。細管凍精可以在液氮中（-196℃）長期保存。

3.3細管冷凍精液解凍Thawingoffrozensperminfinetubes

細管凍精使用前迅速放入一定溫度的水浴鍋解凍，使其精子快速復蘇的方法。

3.4深部輸精DeepSpermTransfusion

通過人工采用套管式輸精管將精液通過子宮頸皺褶輸配到子宮內，使其受孕的輔助技術，稱深部

輸精。

4.豬冷凍精液深部輸精技術的構成

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豬冷凍精液深部輸精技術程序包括發(fā)情鑒定、精液解凍、稀釋分裝、深部輸精、妊娠檢查等5個

技術環(huán)節(jié)，其中母豬發(fā)情鑒定細分有3個階段。深部輸精技術流程見圖1。

發(fā)情初期（見5.1）

1.母豬發(fā)情鑒定（見第5部分）發(fā)情中期（見5.2）

發(fā)情末期（見5.3）

2.凍精解凍（見第6部分）

3.稀釋、分裝（見第7部分）

4.深部輸精（見第8部分）

5.母豬妊娠檢查（見第9部

分）

圖1豬冷凍精液深部輸精流程圖

（見9）

5母豬發(fā)情鑒定

5.1發(fā)情初期

發(fā)情初期主要表現(xiàn)如下：

a）外觀表現(xiàn)興奮不安，不停發(fā)出叫聲，游走，采食量減少，追逐、爬跨其它母豬。公豬試情不

接受其豬爬跨，手用力按壓發(fā)情母豬的背部，此時母豬會表現(xiàn)不停走動。

b）生殖器官變化陰戶腫脹、松弛、翻開充血、發(fā)亮，有稀薄透明黏液流出，黏液不呈牽絲。

5.2發(fā)情中期

發(fā)情中期主要變化如下：

a）外觀表現(xiàn)不愿意采食，多表現(xiàn)呆立不動，愿意接受其它豬爬跨，即靜立反射。公豬試情愿意

接受公豬爬跨、驅趕不走，手用力按壓發(fā)情母豬的背部，此時母豬會站立不動。這是配種的最佳時期。

b）生殖器官變化陰戶腫脹、紅潤，有大量透明而黏稠的黏液流出，呈牽絲狀。

貴州省標準化公共服務平臺注：如流出的黏液為化膿狀、呈豆腐渣樣、顏色偏黃或帶有血絲、氣味臭等癥狀，則為嚴重炎癥，應采取先

治療，治愈后再進行輸精。

5.3發(fā)情末期

發(fā)情末期主要變化如下：

a）外觀表現(xiàn)母豬興奮度降低，神情表現(xiàn)平靜，開始正常采食。不接受其他豬爬跨，手用力按

壓發(fā)情母豬的背部，此時母豬會表現(xiàn)不停走動。

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b)生殖器官變化外陰陰戶腫脹、紅潤，有大量透明而黏稠的黏液流出，呈牽絲狀。

6細管凍精解凍

6.1解凍前準備

6.1.1細管冷凍精液的貯存

貯存細管冷凍精液的液氮生物容器性能完好，符合GB/T5458的規(guī)定。由專人負責，及時補充液

氮的消耗，確保細管冷凍精液始終浸泡在液氮中。

6.1.2稀釋液的配制

稀釋液現(xiàn)配現(xiàn)用，使用前應置于37℃水浴中預熱待用。稀釋液配方見附錄A，商品稀釋液的使用

按說明書要求。

6.2解凍

6.1測算受體母豬需要解凍細管冷凍精液的數(shù)量

6.1.1確定母豬輸配的頭數(shù)

根據(jù)受體母豬發(fā)情數(shù)量確定母豬輸配的頭數(shù)。

6.1.2受體母豬需要輸配有效精子數(shù)

根據(jù)受體母豬品種，確定需要輸配有效精子數(shù)，參照GB232382021.4.表1。

6.1.3每頭母豬輸精需要的細管冷凍精液數(shù)量

根據(jù)細管冷凍精液的質量參數(shù)（精子活力、每劑量中前向運動精子數(shù)）、受體母豬需要輸配的有

效精子數(shù)及輸精方式等綜合因素，具體測算每頭母豬輸精需要的細管冷凍精液數(shù)量。參照附錄B。

6.2解凍操作

用長柄鑷子將細管冷凍精液從液氮容器中快速取出，冷凍精液離開液氮低溫環(huán)境不得超過5s。取

出的細管冷凍精液應迅速置于37℃水浴中晃動3s，立即移至50℃水浴中輕微晃動13s取出，用吸水

紙擦干管壁上的水珠，查看封口是否嚴密，管壁有無破損。

貴州省標準化公共服務平臺7稀釋、分裝

7.1稀釋

凍精解凍后，用20倍的稀釋液去稀釋精液。

7.2分裝

細管冷凍精液解凍后，剪去細管封口端，用細管推針將精液分別推至已預熱的輸精瓶（袋）中，

受體為外來品種或培育品種的稀釋至60mL/瓶（袋）；受體母豬為本地品種的，稀釋至40mL/瓶（袋），

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搖勻后放入17℃待用。

7.3貼上標簽

及時將配好的輸精瓶或輸精袋上標記公豬品種、耳號等相關信息，放入17℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

7.4使用要求

細管冷凍精液解凍輸配要求現(xiàn)配現(xiàn)用；輸配前精液從17℃恒溫箱中取出，需要用毛巾包住輸精瓶

使其保溫。

8深部輸精

8.1輸精時間確定

發(fā)情母豬出現(xiàn)靜立反射后8h～12h進行第一次輸精，之后間隔8h～12h進行第2次輸精。

8.2輸精前準備

8.2.1輸精人員需要經過專業(yè)訓練，并具有一定的專業(yè)知識。

8.2.2輸精工作時應穿著潔凈工作衣、帽，洗凈雙手。

8.2.3確認與配母豬的耳號

從精液貯存箱取出解凍分裝好的輸精瓶（20mL精液），確認母豬品種、耳號及配種方案后，

開始輸配。

8.2.4母豬輸精前應用潔凈水清洗外陰、尾根及臀部周圍，再用溫水浸濕的毛巾熱敷，擦干外陰。

8.2.5深部輸精

可采用單只獨立包裝的一次性深部輸精管，其外套管、內導管及海綿頭的組成，見NY/T636-

2021中8.3的結構圖示。經產母豬采用輸精頭直徑20mm(大號)輸精管，后備母豬采用輸精頭直徑

15mm(小號)輸精管。

8.3輸精操作

8.3.1輸精操作按以下步驟

a)從密封袋中取出輸精管，檢查海綿頭是否松動，海綿頭涂潤滑劑，手不得接觸輸精管前2/3

部分。

貴州省標準化公共服務平臺b）輸精管以45°角向上插入母豬生殖道內，當有阻力時，緩慢逆時針旋轉，同時前后移動，直

到輸精管被子宮頸鎖定(輕輕回拉不動)。

c）待母豬平靜5min左右后，將內管緩慢向前推送，如遇阻力時可等待20s～30s繼續(xù)向前推

送，通過3～5個褶皺，感覺前方空曠即可，插入深度一般為10～15cm。

d)從精液貯存箱取出解凍并分裝好的精液瓶（袋），再次確認公豬品種、耳號及配種預案。搖

均精液，剪去瓶嘴（或袋口），連接內接內導管輸精口。

e)通過母豬子宮收縮自動吸收精液或緩慢擠壓輸精液瓶（袋）向子宮內輸入精液，如果出現(xiàn)擠

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壓困難，可適當回撤內導管或暫停緩解母豬緊張片刻，再次擠壓精液瓶（袋），精液輸入過程約

3min～5min。

注：如發(fā)生回流，可能輸精管未處于正確位置，需要輕輕抽出內管再重新插入。

f)輸精完成后，將內管連同輸精瓶（袋）一并緩慢抽出，內管抽出外管抬高保持30s左右，再

順時針輕輕拔出外管。

g)為防止精液倒流可采取人工強制驅趕母豬前行活動、雙手按壓撫摸母豬背部兩側或驅趕公豬

與母豬產生性刺激，促使子宮收縮、蠕動形成負壓減少精液倒流。

8.3.2記錄母豬深部輸精的相關信息，記錄表見附錄C。

9妊娠檢查

9.1通過外部觀察，母豬配種后第2個發(fā)情期內未出現(xiàn)返情，則可初步判定為母豬已妊娠。

9.2必要時采用B超檢查判斷母豬是否妊娠。

10生產記錄表

輸精后應記錄輸精母豬的品種、耳號、發(fā)情日期、輸精日期、輸精操作人員及使用細管冷凍精液

的公豬耳號等信息，具體見附錄C.2。

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附錄A

（資料性附錄）

凍精解凍后稀釋液的配制

解凍后稀釋液配方

葡萄糖（C6H12O6）3.7g

檸檬酸鈉（C6H5Na3O70.6g

碳酸氫鈉(NaHco2)0.125g

乙二胺四乙酸（EDTA）0.125g

氯化鉀（KCL2）0.075g

雙蒸水（ddH2O）100mL

解凍后稀釋液配制：電子天平分別稱取葡萄糖37g、無水檸檬酸鈉6g、碳酸氫鈉1.25g、乙二胺四乙

酸（EDTA1.25g）、氯化鉀0.75g放入潔凈的錐形瓶中，慢慢加新鮮制取的雙蒸水1000mL，攪拌均勻，

用過濾紙過濾入另一錐形瓶中，煮沸15分鐘，放置至常溫備用，用前置于36℃水浴鍋中加熱。

商品解凍稀釋液按說明書稀釋使用

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附錄B

（規(guī)范性附錄）

細管冷凍精液深部輸精劑量

表1細管冷凍精液深部輸精劑量要求

供體公豬供體公豬

項目劑量為引入品種、為地方品種（推

備注

培育品種廣利用）

劑量（mL）/支中型0.5mL≥0.45

活力（前向運動精子％）≥45≥40

前向運動精子數(shù)/（108個/

細管冷凍精液N≥2.0N≥1

支）

質量

精子畸形率％≤20

受體母豬

受體母豬

項目劑量為引入品種、

為地方品種

培育品種

GB232382021.4.

母豬需要輸配的有效目標精

≥12個億≥10個億表1。

子數(shù)（108個/劑）

每個輸精瓶需要解凍稀釋細

深部輸精12個億/N10個億/N

管凍精數(shù)(支)

GB232382021.4.

深部輸精量劑量（mL）/份4040表1。