JJF(皖) 161-2023 熒光法葉綠素a測定儀校準(zhǔn)規(guī)范　

JJF(皖)161—2023FluorescenceInstrumentsofChlorophylla2023-07-21發(fā)布2023-09-01實施安徽省市場監(jiān)督管理局JJF（皖）161—2023熒光法葉綠素a測定儀校準(zhǔn)規(guī)范JJF（皖）161—2023JJF（皖）161—2023I 2 2 2 4 4 5 6 JJF（皖）161—2023《水質(zhì)葉綠素a的測定分光光度法》的部分內(nèi)容。熒光法葉綠素a測定儀校準(zhǔn)規(guī)范HJ/T91-2002地表水和污水監(jiān)凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本規(guī)范；凡是不注日期的引用熒光法葉綠素a測定儀（以下簡稱儀器）基于葉綠素a發(fā)射特定波長的光照射水體，激發(fā)水體中的葉綠素a產(chǎn)生特定波長的熒光，熒光強圖1儀器原理示意圖表1計量特性要求校準(zhǔn)項目計量特性要求線性誤差±10%重復(fù)性≤5%穩(wěn)定性≤5%/h示值誤差±20%JJF（皖）161—20232環(huán)境溫度：5℃~40℃。5.2.1羅丹明B有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：相對擴展不確定度不大于3%（k=2），標(biāo)準(zhǔn)溶液的在儀器常用測量范圍內(nèi)，按照均勻取點的原則設(shè)置5個標(biāo)準(zhǔn)點配制對應(yīng)不同葉擬合羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度值和儀器的葉綠素a濃度示值平均值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線得yabx（1）x——羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度值，μg/L。按公式（2）計算各測量點線性方程計算的羅丹明B濃度值，按照公式（3）計算線性誤差（不包含最低濃度點），取結(jié)果絕對值最大值為儀器的線性誤差校準(zhǔn)結(jié)xi（2）JJF（皖）161—20233sisixi——第i點線性方程計算的羅丹明B濃度值，μg/L；和公式（5）分別計算測量值的平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差，按公7 ci7s=s=71sr——儀器重復(fù)性，%。0S=100%（7）0JJF（皖）161—20234S——儀器穩(wěn)定性，%；選取葉綠素a濃度值在儀器量值測量范圍內(nèi)的水樣，分成2份，作為儀器的校scr——示值誤差，%；由于復(fù)校時間間隔是由儀器的使用者、使用情況以及儀器本身質(zhì)量等諸因素所建議復(fù)校時間間隔一般不超過1年。如果儀器更換重要部件、維修或?qū)x器性JJF（皖）161—2023警告：羅丹明B被列入可能致癌/誘導(dǎo)有機體突變的物質(zhì)，操作過程中必須戴手A.1羅丹明B有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)A.2羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制采用儀器說明書中的方法計算校準(zhǔn)所需羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度（20℃下并依據(jù)所用羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的濃度，配制校準(zhǔn)用羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)溶液。例如，根據(jù)的羅丹明B儲備標(biāo)準(zhǔn)溶液。再用分度吸量管移取29mL羅丹明B儲備溶液置于1000mL單標(biāo)線容量瓶中，即可配制成290μg/L羅丹明B稀釋標(biāo)準(zhǔn)溶液。A.3羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)溶液的保存與使用按上述步驟配制的羅丹明B儲備標(biāo)準(zhǔn)溶液需在（0～4）℃下避光保存，防止分解。羅丹明B稀釋標(biāo)準(zhǔn)溶液必須在配制后的24h內(nèi)使用。實驗室過程中產(chǎn)生的廢液，應(yīng)集中收集，并做好相應(yīng)的標(biāo)識，委托有資質(zhì)的單將一定量樣品用濾膜過濾截留藻類，研磨破碎藻類細(xì)胞，用丙酮溶液提取葉綠除非另有說明，分析時均使用符合國家標(biāo)準(zhǔn)的分析純試劑，實驗用水為新制備B.2.1丙酮（CH3COCH3B.3.2過濾裝置：配真空泵和玻璃砂芯B.3.3研磨裝置：玻璃研缽或其他組B.3.7針式濾器：0.45μm聚四氟乙烯有機樣品24h內(nèi)不能送達(dá)檢測實驗室，應(yīng)現(xiàn)場過濾，濾膜避光冷凍運輸樣品濾膜于濾器壁。過濾時負(fù)壓不超過50kPa，在樣品剛剛完全通過濾膜時結(jié)束抽濾，用鑷子注：僅當(dāng)富營養(yǎng)化水體的樣品無法通過玻璃纖維濾膜時，可采用離心法濃縮樣品，但轉(zhuǎn)移過程中應(yīng)保證提取效率，避免葉綠素a的損失及水分對丙酮溶液濃度的表B.1參考過濾樣品體積研磨5min以上。將完全破碎后的細(xì)胞提取液轉(zhuǎn)移至玻璃刻度離心管（5.5）中，用注：葉綠素對光及酸性物質(zhì)敏感，實驗室光線應(yīng)盡量微弱，能進(jìn)行分析操作即JJF（皖）161—20238將離心管中的研磨提取液充分振蕩混勻后，用鋁箔包好，放置于4℃避光浸泡用實驗用水按照與試樣的制備（6.3）相同的步驟1=11.85A664A7501.54=（B.2）JJF（皖）161—2023JJF（皖）161—2023儀器名稱證書編號單位名稱制造廠家規(guī)格型號出廠編號測量范圍校準(zhǔn)依據(jù)校準(zhǔn)日期校準(zhǔn)地點環(huán)境溫度相對濕度校準(zhǔn)人員核驗人員葉綠素a標(biāo)準(zhǔn)濃度值 (μg/L）羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)濃度值 (μg/L）儀器測量值(μg/L）線性方程計算羅丹明B濃度值(μg/L）線性誤差擴展不確定度U（k=2）（%）123平均值//截距斜率標(biāo)準(zhǔn)值測量值(μg/L）重復(fù)性(μg/L）1234567平均值（%）20標(biāo)準(zhǔn)值(μg/L）20穩(wěn)定性（%）測量時間（min）02030405060測量值(μg/L）不同波長下的吸光度值分光光度法測量值(μg/L）儀器測量值(μg/L）示值誤差（%）A6641A6472A6303A750平均值JJF（皖）161—2023分光光度法測量值(μg/L）儀器測量值(μg/L）示值誤差（%）JJF（皖）161—2023E.1.2.1標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：羅丹明B有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。E.1.3校準(zhǔn)方法：在儀器常用測量范圍（0.2～200）μg/L內(nèi)，按照均勻取點的原則配制羅丹明B系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別進(jìn)行3次重復(fù)測量，用最小二乘法擬合標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度值和儀器的葉綠素a濃度示值平均值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線得到儀器的線性方程，按照方程計算出的羅丹明B濃度值與羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度值進(jìn)行比較（不），環(huán)境溫度：5℃~40℃。sisixsi——第i點羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度值，μg/L；c(xi)]2c2(xi)u2(xi)c2(xsi)u2(xsi)JJF（皖）161—2023式中：sisicxi=，cxsi=-sisiE.4.1線性方程計算的羅丹明B濃度值引入的不確定度分量u(xi)表E.1羅丹明B系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的線性測量結(jié)果葉綠素a標(biāo)準(zhǔn)濃度值 (μg/L）羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)濃度值 (μg/L）儀器測量值(μg/L）線性方程計算羅丹明B濃度值(μg/L）線性誤差123平均值0.23//5071521402002860截距0.0925斜率0.0724yabx=0.0925+0.0724xyiabxsisy/xsy/xN2羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)濃度值的平均值為：xsi1429.60μ以50μg/L的葉綠素a濃度點為例，線性方程計算的羅丹明B濃度值為：則線性方程計算的羅丹明B濃度值引入的不確定度分量為：uxiE.4.2由標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的不確定度分量u(cs)JJF（皖）161—2023E.4.2.1有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)本身引入的不確定度分量urel(cs)1E.4.2.2標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稀釋過程引入的不確定度分量urel(cs)2稀釋過程引入的不確定度來源主要考慮吸量管和單標(biāo)線容量瓶體積校準(zhǔn)的不確次稀釋需要50mL分度吸量管（吸取36mL）和500mL單標(biāo)線容量瓶。 u4rel=100%=0.029%b）稀釋過程中溫度變化引入的不確定度分量在移液及定容過程中由于實驗室溫度在（20±2）℃之間變動，引入的不確定度生的體積變化率為±（2×2.1×10-4引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度為u5rel=0.024%。JJF（皖）161—2023 ==(0.12%)2+(0.023%)2(0.16%)2+(0.029%)2+(0.024%)2=0.20%