海三棱藨草組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程

1DB31/TXXXX—XXXX海三棱藨草組織培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程本文件確立了海三棱藨草種群恢復(fù)程序，規(guī)定了恢復(fù)場(chǎng)地的選擇、恢復(fù)材料的選擇與培育、實(shí)施恢復(fù)的方法與要求，以及監(jiān)測(cè)與管理的要求。本文件適用于本市海三棱藨草種群生態(tài)恢復(fù)與重建。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T24708濕地分類(lèi)HY/T214紅樹(shù)林植被恢復(fù)技術(shù)指南LY/T1882林木組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T2306花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程DB31/T1243互花米草生態(tài)控制技術(shù)規(guī)范3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1層積處理stratification解除種子休眠的一種方法，即將種子埋在濕沙中置于1℃~10℃溫度中，經(jīng)1～3個(gè)月的低溫處理解除休眠，促進(jìn)種子萌發(fā)。3.2優(yōu)化區(qū)habitatregulationarea通過(guò)一系列生態(tài)治理方針去除入侵物種后營(yíng)建及優(yōu)化鳥(niǎo)類(lèi)棲息地，并恢復(fù)土著植物的區(qū)域，該區(qū)域?yàn)榉浅毕绊憛^(qū)，且具備一定調(diào)度管理基礎(chǔ)。3.3球莖苗rhizomaticseedling由扁球狀的地下球莖萌發(fā)或催芽形成的幼苗。3.4再生苗regeneratedplantlet通過(guò)植物組織培養(yǎng)方式獲得的完整植株，具有根、莖、葉等植物器官。3.5人工輔助播種artificialassistedseeding將種子與潮灘沉積物混合后裝入麻袋并固定在自然潮灘上的人工輔助播種方法。4恢復(fù)流程2DB31/TXXXX—XXXX海三棱藨草種群恢復(fù)的流程如圖1所示，包括恢復(fù)場(chǎng)地選擇、恢復(fù)材料準(zhǔn)備、實(shí)施恢復(fù)、監(jiān)測(cè)與管圖1海三棱藨草種群恢復(fù)流程5恢復(fù)場(chǎng)地5.1自然潮灘生境自然潮灘恢復(fù)場(chǎng)地應(yīng)符合以下要求：a)符合GB/T24708的淤泥質(zhì)海灘和潮間鹽水沼澤的條件；b)潮灘灘面基礎(chǔ)高程在吳淞高程2.2m～3.0m的范圍內(nèi)，4月～6月單月垂向泥沙淤積應(yīng)小于c)潮灘水動(dòng)力的最大波能密度應(yīng)小于250J/m2，平均波能最高應(yīng)為50J/m2。5.2優(yōu)化區(qū)生境優(yōu)化區(qū)恢復(fù)場(chǎng)地應(yīng)符合以下要求：a)地塊水分飽和，鹽度應(yīng)小于10‰，持續(xù)淹水水深應(yīng)小于8cm；b)應(yīng)清除原有植被，翻耕地塊，去除原有植被根系；c)地勢(shì)應(yīng)平整，單個(gè)恢復(fù)斑塊內(nèi)的高程差異應(yīng)小于5cm。6恢復(fù)材料6.1種子6.1.1種子采集應(yīng)在每年10月～11月，海三棱藨草種子成熟且未脫落前，人工收割海三棱藨草成熟的果穗，晾曬3天后用工具碾壓，風(fēng)干剝落后采集飽滿(mǎn)、無(wú)蟲(chóng)害的種子。3DB31/TXXXX—XXXX6.1.2種子層積處理種子層積處理應(yīng)按照以下步驟進(jìn)行：a)將風(fēng)干種子和洗凈的濕潤(rùn)細(xì)沙按1:2的體積比混合均勻；b)置于1℃~10℃的條件下儲(chǔ)藏至少30d，期間適當(dāng)補(bǔ)水保持濕潤(rùn)，細(xì)沙宜手握成團(tuán)但不滴水；c)若發(fā)生霉變，應(yīng)及時(shí)清洗，并置于同等條件下繼續(xù)處理。6.1.3催芽種子催芽應(yīng)按照以下步驟進(jìn)行：a)將層積處理的種子去沙或和細(xì)沙一起置于20℃~30℃的條件下催芽5d～10d；b)催芽期間應(yīng)及時(shí)補(bǔ)充水分,若有霉變，應(yīng)及時(shí)清洗，并置于同等條件下繼續(xù)催芽；c)種子露白率超過(guò)50%后，即可使用。6.2球莖苗6.2.1應(yīng)于每年3月～4月，在恢復(fù)場(chǎng)地附件就近采集生長(zhǎng)健康、無(wú)病蟲(chóng)害、株高大于10cm的球莖6.2.2采集球莖苗步驟如下：a)利用采集器挖取直徑大于7cm，深度約15cm～20cm的海三棱藨草植株柱狀樣；b)應(yīng)每隔10m設(shè)置1個(gè)取苗點(diǎn)，每個(gè)取苗點(diǎn)分散采集帶土植株數(shù)量不應(yīng)超過(guò)30個(gè)，保障對(duì)原有群落的生長(zhǎng)不產(chǎn)生顯著破壞。6.3實(shí)生苗實(shí)生苗育苗方法及過(guò)程應(yīng)按以下步驟進(jìn)行：a)按6.1.1方法采集種子，并按6.1.2執(zhí)行層積處理；b)將待恢復(fù)區(qū)的土壤裝滿(mǎn)直徑為5cm～10cm，高度為5cm的可降解育苗袋中；c)將按6.1.3方法處理的海三棱藨草種子放置在育苗袋底部后填充待修復(fù)區(qū)至與袋口齊平，每個(gè)育苗袋內(nèi)播種50?！?00粒種子；d)將播種后的育苗袋置于25℃溫室內(nèi)培養(yǎng)，每天補(bǔ)充水分；e)培育1個(gè)月～2個(gè)月，待株高不低于10cm時(shí)，豎直放置于周轉(zhuǎn)箱內(nèi)備用。6.4再生苗6.4.1外植體選取應(yīng)選取當(dāng)年生且飽滿(mǎn)的小堅(jiān)果作為外植體，每隔30m采集5?！?0粒飽滿(mǎn)的小堅(jiān)果，至少采集5000粒。6.4.2外植體滅菌外植體滅菌按照以下步驟進(jìn)行：a)流水沖洗20min；b)在乙醇濃度為72%的溶液中浸泡15s；c)在次氯酸鈉濃度為0.1%的溶液中震蕩消毒5min～15min；d)無(wú)菌水沖洗5次；e)使用無(wú)菌濾紙吸干水分。6.4.3培養(yǎng)基配制、滅菌、保存4DB31/TXXXX—XXXX6.4.3.1配方6.4.3.1.1培養(yǎng)基分為種子萌發(fā)培養(yǎng)基、叢生芽誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基。6.4.3.1.2應(yīng)按附錄A要求配制培養(yǎng)基。6.4.3.2配制、滅菌、保存培養(yǎng)基配置、滅菌、保存按以下步驟進(jìn)行：a)按LY/T1882規(guī)定方法配制培養(yǎng)基；b)配制培養(yǎng)基當(dāng)天按NY/T2306規(guī)定方法進(jìn)行滅菌；c)常溫下滅菌后的培養(yǎng)基應(yīng)在3d內(nèi)使用完畢。6.4.4培養(yǎng)條件除特別說(shuō)明外，再生苗培養(yǎng)條件應(yīng)符合以下要求：——培養(yǎng)溫度25℃~30℃,培養(yǎng)周期25d～35d；——光培養(yǎng)時(shí)，光周期為12h/d，光照強(qiáng)度為1500lx～2500lx。6.4.5再生苗培養(yǎng)6.4.5.1前處理在無(wú)菌條件下，用解剖刀劃破種皮2處～3處，注意避免損傷種胚。6.4.5.2無(wú)菌苗獲取消毒后的外植體，接種于萌發(fā)培養(yǎng)基，培養(yǎng)30d后，待幼芽高度達(dá)到3cm時(shí)，轉(zhuǎn)入誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基。6.4.5.3誘導(dǎo)及增值培養(yǎng)條件培養(yǎng)溫度30℃,光照強(qiáng)度2500lx，光周期15h。6.4.5.4叢生芽的誘導(dǎo)及增殖叢生芽誘導(dǎo)及增值按以下步驟進(jìn)行：a)將健壯幼芽轉(zhuǎn)入誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基，30d后，分化形成8芽/叢～15芽/叢的叢生芽；b)將叢生芽切分成以2個(gè)～3個(gè)幼芽為一叢的叢芽，轉(zhuǎn)入誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基；c)每30d繼代培養(yǎng)一次，轉(zhuǎn)接15代后，應(yīng)重新獲取實(shí)生無(wú)菌苗。6.4.5.5壯苗培養(yǎng)壯苗培養(yǎng)，按照6.4.5.4要求分切叢生芽，轉(zhuǎn)入壯苗培養(yǎng)基，培養(yǎng)30d。6.4.5.6生根培養(yǎng)將壯苗培養(yǎng)后的叢生芽切分為單芽，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基。6.4.5.7煉苗生根培養(yǎng)21d后，當(dāng)根長(zhǎng)大于1cm時(shí)，將瓶苗從培養(yǎng)室轉(zhuǎn)移至大棚，時(shí)間為3d～5d。環(huán)境溫度為15℃~30℃,采用散射光照，避免陽(yáng)光直接照射。6.4.5.8再生苗要求5DB31/TXXXX—XXXX移栽前，再生苗應(yīng)達(dá)到以下要求：a)植株深綠色，無(wú)污染、白化、褐化；b)苗高≥8cm；c)根長(zhǎng)≥1cm，根數(shù)3條以上。6.4.6移栽6.4.6.1移栽基質(zhì)珍珠巖:草炭:蛭石=1:1:1(體積比)。6.4.6.2移栽管理移栽應(yīng)在4月～6月或10月～11月進(jìn)行，應(yīng)在移栽前1d打開(kāi)瓶苗封口，按以下步驟操作：a)從培養(yǎng)容器中取出再生苗，用清水洗凈其基部的培養(yǎng)基；b)采用128孔穴盤(pán)，一孔一苗種植于移栽基質(zhì)內(nèi)；c)種植后基質(zhì)及再生苗應(yīng)進(jìn)行霧狀噴濕，至基質(zhì)溢水為止，并放入苗床；d)移栽后，每天進(jìn)行霧狀噴濕，持續(xù)10d，保持空氣相對(duì)濕度在85%～95%；e)移栽15d后，再生苗可出圃。7實(shí)施恢復(fù)7.1自然潮灘恢復(fù)7.1.1恢復(fù)方法在符合5.1要求的場(chǎng)地范圍內(nèi)，按以下條件選擇恢復(fù)方法：a)水動(dòng)力相對(duì)較弱（最大波能密度小于150J/m2）的修復(fù)場(chǎng)地，可采用球莖苗移栽或人工輔助播種的方法；b)水動(dòng)力相對(duì)較強(qiáng)（最大波能密度大于150J/m2，且小于250J/m2）的修復(fù)場(chǎng)地，采用人工輔助播種方法。7.1.2球莖苗移栽7.1.2.1時(shí)間自然潮灘的移栽時(shí)間應(yīng)滿(mǎn)足以下要求：a)每年4月，日均氣溫高于15℃,日最b)應(yīng)選擇在小潮的低潮期實(shí)施移栽，且移栽后至少6h內(nèi)不被潮水淹沒(méi)。7.1.2.2運(yùn)輸將球莖苗柱狀樣豎直、緊密放置在周轉(zhuǎn)箱內(nèi)，遮蔭運(yùn)輸至恢復(fù)場(chǎng)地。7.1.2.3移栽球莖苗移栽按以下步驟及要求進(jìn)行：a)在恢復(fù)場(chǎng)地內(nèi)，挖15cm深的坑將球莖苗柱狀樣種植于坑內(nèi)，移栽植物表層土壤應(yīng)與潮灘表面齊平；b)移栽密度應(yīng)不低于30株/m2。6DB31/TXXXX—XXXX7.1.3人工輔助播種7.1.3.1時(shí)間人工輔助播種時(shí)間應(yīng)滿(mǎn)足以下要求：a)4月～5月；b)日均氣溫高于15℃;c)日最低氣溫高于10℃;d)小潮汛低潮期。7.1.3.2運(yùn)輸將催芽種子與細(xì)沙一起放置于周轉(zhuǎn)箱內(nèi)，箱體表面覆蓋通氣的遮陰網(wǎng)，運(yùn)輸至恢復(fù)場(chǎng)地。7.1.3.3輔助播種人工輔助播種按以下步驟進(jìn)行：a)將6.1.3獲得的催芽種子與潮灘沉積物混合后裝入孔徑大于1mm且小于4mm、尺寸不小于100cm×60cm×10cm的麻袋中，每個(gè)麻袋內(nèi)種子數(shù)量應(yīng)不少于1000粒/袋；b)用鐵锨在潮灘上掘出與麻袋大小一致的坑位，將裝有種子的麻袋埋入坑位中，使用竹竿或U形釘將麻袋固定于灘面，上覆少量潮灘沉積物，麻袋與灘面齊平；c)輔助播種的麻袋之間宜保持1～3m間距；d)若竹竿破損或U形釘丟失，應(yīng)及時(shí)更新和加固。7.1.4繁殖體保存恢復(fù)備用的球莖苗和種子等繁殖體若無(wú)法及時(shí)種植，應(yīng)遮陰保存，并適當(dāng)噴水保濕。7.2優(yōu)化區(qū)生境恢復(fù)7.2.1時(shí)間應(yīng)在4月～6月期間進(jìn)行。7.2.2場(chǎng)地準(zhǔn)備7.2.2.1在符合5.2要求的場(chǎng)地四周設(shè)置圍欄，控制人為干擾。7.2.2.2在場(chǎng)地內(nèi)灌水，使土壤含水量達(dá)到飽和。7.2.3繁殖體運(yùn)輸將準(zhǔn)備的繁殖體（球莖苗、種子、實(shí)生苗或再生苗）放置在周轉(zhuǎn)箱內(nèi)，遮蔭保濕運(yùn)輸至恢復(fù)地塊。7.2.4種植方法7.2.4.1球莖苗移栽7.2.4.1.1在移栽點(diǎn)挖取深度為15cm的小坑，放入帶球莖苗的土塊后壓實(shí)。7.2.4.1.2宜保持50cm的叢距和行距，密度宜為4叢/m2。7.2.4.2播種播種密度宜為50?！?00粒/m2；宜在陰天直接撒播萌發(fā)后的種子。7DB31/TXXXX—XXXX7.2.4.3實(shí)生苗移栽7.2.4.3.1在移栽點(diǎn)挖取比育苗袋更深的小坑，放入育苗袋后壓實(shí)。7.2.4.3.2應(yīng)以一個(gè)育苗袋為一叢進(jìn)行移栽，宜保持50cm的叢距與行距，密度宜為4叢/m2。7.2.4.4再生苗移栽7.2.4.4.1在移栽點(diǎn)挖取深度2cm～3cm的小坑，放入再生苗后壓實(shí)。7.2.4.4.2應(yīng)以3株～5株再生苗為一叢進(jìn)行移栽，宜保持50cm的叢距與行距，密度宜為4叢/m2。7.2.5繁殖體保存7.2.5.1繁殖體運(yùn)輸至生態(tài)恢復(fù)區(qū)后，在6h～8h內(nèi)完成種植。7.2.5.2無(wú)法及時(shí)種植的，應(yīng)按HY/T214的方法保存。7.2.6養(yǎng)護(hù)要求7.2.6.1水位調(diào)控7.2.6.1.1種植1個(gè)月內(nèi)，應(yīng)保持土壤含水率＞80%，水深不應(yīng)超過(guò)10cm。7.2.6.1.2種植1個(gè)月后，水深不應(yīng)超過(guò)20cm。7.2.6.2鹽度調(diào)控7.2.6.2.1定期測(cè)定水體鹽度，保持水體鹽度范圍不高于10‰。7.2.6.2.2水體鹽度大于10‰的，應(yīng)及時(shí)灌水稀釋。7.2.6.3蟹類(lèi)控制蟹類(lèi)控制應(yīng)按以下步驟進(jìn)行：a)移栽前，應(yīng)在地塊四周搭建蟹類(lèi)防護(hù)網(wǎng)，控制地塊內(nèi)蟹類(lèi)的數(shù)量；b)移栽后，應(yīng)設(shè)置捕蟹桶，每天將捕捉的蟹類(lèi)清理至地塊外。7.2.6.4管理周期養(yǎng)護(hù)管理應(yīng)按以下步驟進(jìn)行：a)種植后2個(gè)月～3個(gè)月內(nèi)，應(yīng)進(jìn)行水位調(diào)控、鹽度調(diào)控、雜草清除、蟹類(lèi)控制；b)種植2個(gè)月～3個(gè)月后，若海三棱藨草種群密度超過(guò)1000株/m2，可進(jìn)行水位調(diào)控和鹽度調(diào)控。8監(jiān)測(cè)與管理8.1自然潮灘恢復(fù)監(jiān)測(cè)與管理8.1.1監(jiān)測(cè)可根據(jù)恢復(fù)方法不同按如下要求實(shí)施監(jiān)測(cè)：a)球莖苗移栽1個(gè)月后，應(yīng)檢測(cè)移栽成活率、蓋度和密度，成活率低于70%，應(yīng)及時(shí)補(bǔ)種；b)人工輔助播種1個(gè)月后，應(yīng)檢測(cè)每個(gè)麻袋輔助樣方的出苗率、成活率、蓋度、密度，輔助樣方內(nèi)出苗率低于10%，應(yīng)及時(shí)補(bǔ)種。8.1.2后期管理8DB31/TXXXX—XXXX恢復(fù)場(chǎng)地內(nèi)有互花米草入侵，應(yīng)按照DB31/T124