《煙草品種抗辣椒脈斑駁病毒鑒定技術(shù)規(guī)程》編制說明

1《煙草品種抗辣椒脈斑駁病毒鑒定技術(shù)規(guī)程》編制說明1工作簡況項(xiàng)目協(xié)作單位：湖南省煙草科學(xué)研究所負(fù)責(zé)田間煙草品種對(duì)2項(xiàng)目“云南保山煙草病毒病溯源及防控關(guān)鍵技術(shù)研究與應(yīng)用”和四川省煙草公司涼山州公司科技項(xiàng)目“營養(yǎng)調(diào)節(jié)與免疫誘抗協(xié)調(diào)控制煙草病毒病技術(shù)開發(fā)與應(yīng)用”的支持下，項(xiàng)目組通過田間調(diào)查和室內(nèi)檢測(cè)抗病性鑒定任務(wù)，開展了煙草品種對(duì)ChiVMV的抗病性鑒定試驗(yàn)，制定了ChiVMV癥狀描述規(guī)范和病害嚴(yán)重度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)；篩選到毒源3毒株類型和致病力分化；在即墨試驗(yàn)基地開展抗病/感病對(duì)照品種的2相關(guān)領(lǐng)域的國、內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)研究和制修訂情況國內(nèi)外對(duì)ChiVMV發(fā)生危害和遺傳分化已廣泛開展研究，尚無4目前，煙草品種抗病毒病鑒定主要是依照GB/T23224-2008《煙草品種抗病性鑒定》中的TMV和CMV部分，該標(biāo)準(zhǔn)簡明描述了接方標(biāo)準(zhǔn)DB44/T2207—2019《辣椒品種抗辣椒脈斑駁病毒鑒定技術(shù)規(guī)本標(biāo)準(zhǔn)參考上述兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的鑒定步驟，但對(duì)煙草ChiVMV毒源3標(biāo)準(zhǔn)編制原則及主要內(nèi)容確定的依據(jù)符合煙草行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)制修訂管理工作規(guī)程對(duì)編制程序和工作的規(guī)5查、結(jié)果計(jì)算與抗性評(píng)價(jià)等操作步驟。其中，煙草ChiVMV毒源采辣椒脈斑駁病毒鑒定技術(shù)規(guī)程》來建立。煙草ChiVMV病害嚴(yán)重度分級(jí)根據(jù)ChiVMV侵染煙草的病害癥狀，并參考GB/T23222—2008《煙草病蟲害分級(jí)調(diào)查方法》中規(guī)定的TMV和CMV病害分級(jí)來制定抗病/感病對(duì)照品種、接種苗齡、接種物濃度、調(diào)查時(shí)間和抗性劃在云南省煙草公司保山市公司科技計(jì)劃項(xiàng)目“云南保山煙草病毒病溯源及防控關(guān)鍵技術(shù)研究與應(yīng)用”和四川省煙草公司涼山州公司科技項(xiàng)目“營養(yǎng)調(diào)節(jié)與免疫誘抗協(xié)調(diào)控制煙草病毒病技術(shù)開發(fā)與應(yīng)用”的支持下，項(xiàng)目組通過田間調(diào)查和室內(nèi)檢測(cè)建立了ChiVMV分離純時(shí)，扣取黃圓斑研磨為汁液后接種于健康煙株葉片上進(jìn)行二次純化6ChiVMV病葉進(jìn)行總RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR擴(kuò)大田煙株感染ChiVMV后首先表現(xiàn)該病的典型癥狀——褪綠黃室內(nèi)接種ChiVMV后主要癥狀類型有：葉脈輕微脈明或變黃，根據(jù)上述煙草ChiVMV癥狀和病程，以株為單位制定煙草3級(jí)，1/3葉片出現(xiàn)褪綠花葉或黃圓斑，但不卷葉或皺縮變形，病株矮化為7開展煙草品種對(duì)ChiVMV的抗病性鑒定試驗(yàn)，確定了抗病/感病對(duì)照指標(biāo)。SansunNN、NC89等普通煙草為供試材料，在小花盆中單株假植育苗或聯(lián)體孔育苗，于5~6葉期和7~8葉期苗齡分別接種10倍和20黃化斑駁及皰斑皺縮；21~28d感病品種中多數(shù)感病弱苗死亡，感病7~8葉期接種20倍質(zhì)量濃度處理的發(fā)病率最低。然后，確定抗病/感病對(duì)照品種的抗性水平。根據(jù)前期試驗(yàn)結(jié)果選取23份煙草種質(zhì)為供試材料，在小塑料盆中單株假植育8對(duì)在苗期接種ChiVMV抗性鑒定中表現(xiàn)中抗的品種湄潭曬煙X45，以本氏煙和烤煙品種K326、G28等為感病對(duì)照，進(jìn)行重復(fù)鑒結(jié)果顯示：在第一次進(jìn)行抗性評(píng)價(jià)時(shí)，感病對(duì)照G28和NC89的21天發(fā)病率達(dá)100%且病情指數(shù)40≦DI0<60，因而采用抗性指數(shù)9評(píng)價(jià)各個(gè)煙草品種的抗性，采用G28病情指數(shù)計(jì)算各個(gè)煙草品種的抗性指數(shù)。重復(fù)上述煙草品種對(duì)ChiVMV的抗性鑒定，結(jié)果表明感10倍質(zhì)量濃度為宜，適宜接種苗齡為5~6葉期，調(diào)查時(shí)間為接種后感病對(duì)照發(fā)病率達(dá)100%且病情指數(shù)DI0≧60時(shí)，采用病情指數(shù)DI調(diào)查總株數(shù)×9調(diào)查總株數(shù)×9抗性指數(shù)=Ln待測(cè)品種的病情指數(shù)-Ln感病對(duì)照品種的病情指數(shù)（3）100-待測(cè)品種的病情指數(shù)100-感病對(duì)照品種的病情指數(shù)......4標(biāo)準(zhǔn)預(yù)期產(chǎn)生的社會(huì)、經(jīng)濟(jì)效益ChiVMV為馬鈴薯Y病毒屬Potyvirus的確定種，主云南云煙85上被報(bào)道后，已蔓延危害至四川、貴州、山東、105、云煙116等均表現(xiàn)感病。尚無煙屬抗病資源的報(bào)道，亟需抗照GB/T23224－2008《煙草品種鑒定的試驗(yàn)方法，將為客觀評(píng)價(jià)煙草對(duì)ChiVMV的抗性、提出科學(xué)5采用國際標(biāo)準(zhǔn)和國外先進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)的情況6與有關(guān)的現(xiàn)行法律、法規(guī)和強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系7重大分歧意見的處理經(jīng)過和依據(jù)8