實訓二槐米中蕓香苷及槲皮素的提取分離檢識技術(shù)課件

實訓二槐米中蕓香苷及槲皮素的提取分離檢識技術(shù)羅蘭

副教授一、槐米中蕓香苷的化學結(jié)構(gòu)【來源】豆科槐屬植物槐SophorajaponicaL.的干燥花蕾（槐米）【生物活性】祛痰、止咳、降壓、增加冠脈血流量等活性

2010版《藥典》以總黃酮為指標成分對槐米或槐花進行定性鑒定和含量測定。要求槐花總黃酮（以蕓香苷計）大于等于8.0%，槐米總黃酮大于等于20.0%，對照品采用蕓香苷。蕓香苷（槲皮素-3-O-蕓香糖）

蕓香苷廣泛存在于植物界，已發(fā)現(xiàn)的含蘆丁植物至少在70種以上，其中以槐花米和蕎麥葉含量較高，可作為提取蘆丁的原料。蕓香苷是由槲皮素3位上的羥基與蕓香糖（葡萄糖與鼠李糖組成的雙糖）脫水而成的苷。

二、槐米中蕓香苷的理化性質(zhì)蕓香苷（槲皮素-3-O-蕓香糖）

槲皮素

二、槐米中蕓香苷的理化性質(zhì)【溶解度】蕓香苷溶解度在冷水中為1：10000，沸水中為1：200，沸乙醇中為1：60，沸甲醇中為l：7，可溶于乙醇、吡啶、甲酰胺、甘油、丙酮、冰乙酸和乙酸乙酯中，不溶于苯、乙醚、三氯甲烷和石油醚。蕓香苷分子中因含有鄰二酚羥基，性質(zhì)不太穩(wěn)定，暴露在空氣中能緩緩變?yōu)榘岛稚?，在堿性條件下更容易被氧化分解。硼酸鹽能與鄰二酚羥基結(jié)合，達到保護的目的，故在堿性溶液中加熱提取往往加入少量硼砂。蕓香苷粗提：堿溶酸沉法

槐花米粗粉20g加0.4％硼砂水250ml，石灰乳調(diào)pH8～9煮沸30min，4層紗布濾過，反復2次

濾液藥渣放冷，濃鹽酸調(diào)pH3～4，析晶，濾過濾液沉淀室溫下晾干蕓香苷粗品注意：在加熱過程中，需要隨時補充失去的水分和保持pH值8～9。蕓香苷的精制蕓香苷粗品加蒸餾水400ml，煮沸溶解10min趁熱抽濾

濾液藥渣濾液靜置析晶，抽濾結(jié)晶精制蕓香苷室溫下晾干為什么要趁熱抽濾？精制蕓香苷1g

加2％硫酸80ml，加熱回流30min，至沉淀不再增加為止，趁熱過濾

沉淀濾液用少量水洗去余酸，晾干加氫氧化鋇中和至中性，濾過槲皮素粗品硫酸鋇沉淀（棄去）濾液（糖供試液）放冷，過濾沉淀（？）濾液蕓香苷水解注意：加熱回流時出現(xiàn)的現(xiàn)象，并進行解釋。

4．蕓香苷、槲皮素的化學檢識

(1)化學檢識

A．Molish反應：取蕓香苷少許于試管中，加乙醇2ml置水浴上加熱溶解后，加a-萘酚試劑2~3滴，沿管壁加濃硫酸lml，觀察兩液面的現(xiàn)象。

B．鹽酸-鎂粉反應：取蕓香苷少許于試管中，加乙醇2mi置水浴上加熱溶解后，加鎂粉少許，濃鹽酸2-3滴，即產(chǎn)生劇烈的反應，并逐漸出現(xiàn)紅色。以同法試驗槲皮素。糖的色譜檢識(2)糖的紙色譜檢識：材料：中速色譜濾紙(5cm×20cm)。展開劑：正丁醇：醋酸：水(4：1：5上層)。供試品：(上次實驗已準備)。對照品：1％葡萄糖水溶液及1％鼠李糖水溶液(已點樣)。顯色劑：噴灑氨性硝酸銀溶液后，電吹風吹至出現(xiàn)色斑為止。注意事項1．在提取前應將槐花米略搗碎，使蕓香苷易于被熱水溶出。2．在提取過程中，加入硼砂的目的是使其與蕓香苷分子中的鄰二酚羥基發(fā)生絡合，既保護了鄰二酚羥基不被氧化破壞，又避免了鄰二酚羥基與鈣離子絡合（蕓香苷的鈣絡合物不溶于水），使蕓香苷不受損失，提高收得率。3．本實驗直接用沸水由槐花米中提取蕓香苷，收得率穩(wěn)定，且操作簡便。如用堿溶酸沉法提取，加入石灰乳可以達到堿性溶解的目的，又可除去槐花7米中所含的大量粘液質(zhì)，但應嚴格控制其堿性pH8～9，不可超