職業(yè)技術(shù)學院《臨床微生物學檢驗技術(shù)》實驗教學大綱

《臨床微生物學檢驗技術(shù)》實驗教學大綱總學時：108學時理論課學時數(shù)：60學時課間實驗課學時數(shù)：48學時課程類別：專業(yè)必修課

一、實驗教學的性質(zhì)和任務(wù)：《臨床微生物學檢驗技術(shù)》是醫(yī)學檢驗專業(yè)重要的專業(yè)課程之一，是一門實踐性很強的學科。其培養(yǎng)目標是使學生系統(tǒng)地掌握微生物學實驗技術(shù)的基本理論和基本技能，同時具備良好的實驗技能及分析問題、解決問題的能力。《臨床微生物學檢驗》課程是醫(yī)學檢驗專業(yè)學生的專業(yè)必修課。實驗課的教學是基本理論與實踐技能、抽象思維與感性認識相結(jié)合的過程。通過實驗教學，可以激發(fā)學生的學習興趣，培養(yǎng)觀察能力和實踐動手能力；驗證微生物學理論，促進其對理論的掌握與理解；有助于培養(yǎng)學生實事求是，嚴肅認真的科學態(tài)度和科學的學習方法，特別是啟迪思維、培養(yǎng)科學精神和創(chuàng)新能力，為學生終身學習和未來的發(fā)展奠定堅實基礎(chǔ)，不斷適應(yīng)時代進步的需要。

二、實驗教學的目標和要求：

《臨床微生物學檢驗技術(shù)》實驗課的教學目標是：1、使學生掌握基本的微生物學檢驗的實驗技能；2、通過系統(tǒng)實驗的教學幫助學生掌握組織和設(shè)計綜合實驗的能力；3、通過實驗啟發(fā)并培養(yǎng)學生針對不同的臨床問題，設(shè)計解決這些問題的臨床微生物學診斷方法；4、通過實驗報告的書寫和數(shù)據(jù)的處理，培養(yǎng)學生對實驗數(shù)據(jù)的整理、分析能力；5、培養(yǎng)學生觀察實驗現(xiàn)象、獨立思考的能力及實事求是的科學態(tài)度。

本實驗課的基本要求為：1

強調(diào)課前預(yù)習，明確實驗?zāi)康呐c內(nèi)容；2

掌握微生物學試驗的原理、基本操作技術(shù)和臨床意義；3

通過同學之間的合作，培養(yǎng)良好的團隊協(xié)作精神；4

以嚴謹?shù)目茖W態(tài)度對待實驗，尊重事實，認真記錄實驗結(jié)果或現(xiàn)象；5

針對實驗中出現(xiàn)的現(xiàn)象和問題能進行合理的臨床和技術(shù)上的分析；6

認真撰寫實驗報告。

三、實驗內(nèi)容及課時分配：實驗內(nèi)容及課時分配表

思政融入點實驗類型學時數(shù)演示驗證綜合設(shè)計1基礎(chǔ)培養(yǎng)基制作

√

32細菌基本形態(tài)及特殊結(jié)構(gòu)觀察

√

13咽拭子細菌學檢驗

√

44球菌形態(tài)觀察

√

15尿液標本細菌學檢驗

√

36藥物敏感試驗

√

37血液標本細菌學檢驗

√

48革蘭陽性桿菌形態(tài)觀察

√

19糞便標本細菌學檢驗

√

410弧菌、螺旋菌、放線菌、結(jié)核桿菌形態(tài)觀察

√

111真菌標本的細菌學檢驗

√

412螺旋體、真菌形態(tài)觀察

√

113厭氧菌形態(tài)觀察及分離培養(yǎng)方法示教

√

114病毒分離培養(yǎng)方法錄像觀看、討論

√

115細菌自動化鑒定、院感監(jiān)測臨床見習

√

416綜合性、設(shè)計性、應(yīng)用性試驗

√617臨床微生物學檢驗基本實驗操作技能考核

√

6

合計

48四、課程思政點：

在講芽胞時，可以引入著名的生化武器“炭疽芽胞桿菌”，屬于革蘭陽性的需氧芽胞桿菌屬，小小微生物卻能造成世界大范圍毀滅性的破壞。呼吁學生尊重科學、正確利用科學為人類造福，愛護人類，愛護和平，愛護來之不易的無數(shù)革命先烈換來的社會穩(wěn)定、富強繁榮的生活。

五、考核方式：

1.技能考試（30％）；2.平時成績（包括實驗報告、課堂討論等）（10％）。

六、教學參考書：《臨床微生物學檢驗技術(shù)》

劉運德，樓永良主編.北京：人民衛(wèi)生出版社.2016.1.《醫(yī)學微生物學》（第9版）.李凡，徐志凱主編.北京：人民衛(wèi)生出版社2018.7.《臨床微生物學與檢驗》（第4版）.倪語星，尚紅主編.北京：人民衛(wèi)生出版社.2010.5.

七、具體實驗課內(nèi)容：實驗一

基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制備【實驗類型】基礎(chǔ)性實驗【教學目標】1

掌握基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制備方法；2

了解PH比色管的制備和使用?！痉椒ㄔ怼渴怯扇斯し椒ㄅ渲枚蓪９┪⑸锷L繁殖使用的混合營養(yǎng)制品，用于培養(yǎng)或分離各種微生物?！窘虒W內(nèi)容】1

牛肉湯的制備；2

液體、半固體、固體培養(yǎng)基的制備?！局饕獙嶒瀮x器及材料】培養(yǎng)基：普通營養(yǎng)瓊脂平板、血瓊脂平板；試劑：革蘭染液；器材：酒精燈、接種環(huán)、培養(yǎng)箱等；標本：菌種（大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌

）、咽拭子（自?。??！窘虒W方式】講解實驗?zāi)康摹⒃?、方法、注意事項、討論、學生操作、課堂總結(jié)【學時數(shù)】3學時

實驗二

細菌的基本形態(tài)及特殊結(jié)構(gòu)觀察【實驗類型】基礎(chǔ)性實驗【教學目標】1

本實驗要求掌握菌落形態(tài)的觀察與描述、普通光學顯微鏡下觀察并描述革蘭染色細菌形態(tài)及細菌特殊結(jié)構(gòu)觀察；2

掌握革蘭染色方法的原理、技術(shù)要點與意義。【方法原理】描述菌落特征：大小、形狀、突起、邊緣、顏色、表面、透明度、黏度、濕潤度、溶血性等?！窘虒W內(nèi)容】1

學習菌落觀察與描述方法；2

革蘭染色：革蘭陽性球菌、革蘭陰性桿菌；3

觀察細菌芽孢、莢膜及鞭毛示教片?！局饕獙嶒瀮x器及材料】革蘭染液【教學方式】講解實驗?zāi)康?、原理、方法、注意事項、學生操作、課堂總結(jié)。【學時數(shù)】1學時

實驗三

咽拭子細菌學檢驗【實驗類型】綜合性實驗【教學目標】1

掌握咽拭子標本細菌學檢驗程序及臨床意義；2

掌握革蘭陽性球菌主要鑒定依據(jù)及主要鑒定試驗的原理、操作；3

了解人體體表及呼吸道正常菌群的分布；4

了解咽拭子標本的采集方法?！痉椒ㄔ怼空Ｈ搜蕧{部培養(yǎng)應(yīng)有口腔正常菌群，而無致病菌生長。咽部的細菌均來自外界，正常情況下不致病，但在機體全身或局部抵抗力下降和其他外部因素下可以出現(xiàn)感染等而導(dǎo)致疾病。因此，咽部拭子細菌培養(yǎng)能分離出致病菌，有助于白喉、化膿性扁桃體炎、急性咽喉炎等的診斷。【教學內(nèi)容】1

咽拭子標本的采集；2

咽拭子標本分離培養(yǎng)、細菌鑒定及結(jié)果報告?！局饕獙嶒瀮x器及材料】棉簽等?！窘虒W方式】講解實驗?zāi)康?、方法、結(jié)果報告方法、注意事項，學生操作、討論分析、課堂總結(jié)。【學時數(shù)】4學時

實驗四

球菌形態(tài)觀察【實驗類型】基礎(chǔ)性實驗【教學目標】1

本實驗要求掌握球菌菌落形態(tài)的觀察與描述、普通光學顯微鏡下觀察并描述球菌細菌形態(tài)【方法原理】細胞壁學說：G+菌細胞壁結(jié)構(gòu)較致密，肽聚糖層厚，脂質(zhì)含量少，乙醇不易滲入（不易脫色），而G-菌則相反。2.等電點學說：G+菌的等電點低（pI2-3），G-菌的等電點較高（pI4-5），在相同的pH條件下，G+菌所帶負電荷多，與帶正電荷的結(jié)晶紫染料結(jié)合牢固且不易脫色。3.化學學說：G+菌細胞內(nèi)含有大量的核糖核酸鎂鹽，可與結(jié)晶紫和碘牢固的結(jié)合成大分子復(fù)合物，不易被乙醇脫色，而G-菌相反?！窘虒W內(nèi)容】1

觀察葡萄球菌、鏈球菌形態(tài)；2

觀察淋球菌胞內(nèi)外形態(tài)。【主要實驗儀器及材料】標本：金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌；試劑：革蘭染液、生理鹽水等；培養(yǎng)基：血平板、普通瓊脂平板；其他：玻片、接種環(huán)、酒精燈、顯微鏡、37℃恒溫箱等。【教學方式】講解菌體形態(tài)、鑒別要點，學生操作、課堂總結(jié)【學時數(shù)】1學時

實驗五

尿液標本細菌學檢驗【實驗類型】綜合性實驗【教學目標】1

掌握尿液標本細菌學檢驗程序及臨床意義；2

掌握所涉病原菌的主要鑒定依據(jù)及主要鑒定試驗的原理、操作；3

了解人體泌尿道正常菌群的分布；4

了解尿液標本的采集方法?！痉椒ㄔ怼堪Y狀指征：有典型的尿路感染癥狀：如菌尿頻、尿急、尿痛等膀胱刺激征；肉眼膿尿或血尿；從尿常規(guī)檢查表現(xiàn)為白細胞酯酶陽性，離心沉渣男性采WBC>5/HP(高倍鏡)，女性>10/HP;不明原因的發(fā)熱伴尿路刺激癥狀；留置導(dǎo)尿管的患者出現(xiàn)發(fā)熱且由尿液渾濁；前列腺增生、尿路畸形等器質(zhì)性病變導(dǎo)道致尿潴留，并伴隨膀胱刺激征、腹痛、腰痛等癥狀；尿道口有膿性分泌物。②疾病指征：單純性尿路感染；腎結(jié)核；泌尿系結(jié)石伴感染、前列腺增生伴尿路感染；無癥狀性菌尿，是一種隱匿型尿路感染，白細胞輕度升高，但無明顯祕尿系感染的膀胱刺激癥狀，僅表現(xiàn)為低熱、腰膝酸軟，隨機中段尿細菌培養(yǎng)陽性。無癥狀性菌尿病程長，并可轉(zhuǎn)變?yōu)榈湫图毙阅蚵犯腥??！窘虒W內(nèi)容】尿液標本分離培養(yǎng)、計數(shù)、細菌鑒定及結(jié)果報告?！局饕獙嶒瀮x器及材料】小便標本1#、2#；培養(yǎng)基：血瓊脂平板、MH瓊脂平板、O/F、KIA、MIU、IMViC培養(yǎng)基；試劑：

革蘭染液、氧化酶試紙、甲基紅、吲哚、VP甲液、VP乙液，藥敏紙片等；其他：無菌棉簽、尺子、接種環(huán)、35℃培養(yǎng)箱。【教學方式】講解實驗?zāi)康?、方法、計算方法、結(jié)果報告方法、注意事項，學生操作、討論分析、課堂總結(jié)?！緦W時數(shù)】3學時

實驗六

藥物敏感試驗【實驗類型】綜合性實驗【教學目標】1

掌握藥物敏感試驗K-B法的原理、主要技術(shù)關(guān)鍵和意義；2

了解藥敏實驗藥物選擇的原則；3

了解K-B法質(zhì)量控制措施?！痉椒ㄔ怼繉⒑卸靠咕幬锏募埰N在已接種測試菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸收瓊脂中的水分溶解后不斷向紙片周圍擴散形成遞減的梯度濃度，在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)細菌的生長被抑制，從而形成無菌生長的透明圈為抑菌圈。抑菌圈的大小反映待測菌對測定藥物的敏感程度，并與該藥對待測菌的最小抑菌濃度（MIC）呈負相關(guān)，即抑菌圈愈大，MIC愈小?！窘虒W內(nèi)容】細菌藥物敏感試驗（K-B法）方法，結(jié)果測定及報告?！局饕獙嶒瀮x器及材料】氨芐西林、慶大霉素、環(huán)丙沙星、氨芐西林/舒巴坦等。【教學方式】講解實驗?zāi)康摹⒃怼⒎椒ā⒂嬎惴椒?，結(jié)果報告、注意事項，學生操作、課堂總結(jié)?！緦W時數(shù)】3學時

實驗七

血液標本細菌學檢驗【實驗類型】綜合性實驗【教學目標】1

掌握血液標本細菌學檢驗程序及臨床意義；2

掌握所涉病原菌的主要鑒定依據(jù)及主要鑒定試驗的原理、操作；3

掌握腸桿菌屬常見細菌的主要微生物學特性；4

了解血液標本的采集方法?！痉椒ㄔ怼?、標本采集：早期、無菌、適量；采集標本前檢查血培養(yǎng)瓶有無破裂、有無細菌生長及有效期等；標本大多由肘靜脈采取，對亞急性細菌性心內(nèi)膜炎的患者一般采集動脈血，多部位采集血液標本也可增加陽性率；血液標本注入肉湯后，應(yīng)搖勻防止血液凝固。【教學內(nèi)容】血液標本分離培養(yǎng)、細菌鑒定及結(jié)果報告?！局饕獙嶒瀮x器及材料】標本：金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌；試劑：革蘭染液、生理鹽水等；培養(yǎng)基：血平板、普通瓊脂平板；其他：玻片、接種環(huán)、酒精燈、顯微鏡、37℃恒溫箱等?！窘虒W方式】講解實驗?zāi)康?、方法、結(jié)果報告方法、注意事項，學生操作、討論分析、課堂總結(jié)?！緦W時數(shù)】4學時

實驗八

革蘭陽性桿菌形態(tài)觀察【實驗類型】基礎(chǔ)性實驗【教學目標】1

本實驗要求觀察并描述革蘭陽性桿菌普通光學顯微鏡下細菌形態(tài)。【方法原理】革蘭染色破傷風桿菌【教學內(nèi)容】1

觀察炭疽桿菌形態(tài)及串珠實驗示教片；2

觀察白喉棒狀桿菌及異染顆粒形態(tài)示教片。【主要實驗儀器及材料】顯微鏡、37℃恒溫培養(yǎng)箱、玻片、試管、試管架、接種環(huán)、接種針、小牛血清、厭氧袋、生理鹽水等【教學方式】講解菌體形態(tài)、鑒別要點，學生操作、課堂總結(jié)?！緦W時數(shù)】1學時

實驗九

糞便標本細菌學檢驗【實驗類型】綜合性實驗【教學目標】1

掌握糞便標本細菌學檢驗程序及臨床意義；2

掌握所涉病原菌的主要鑒定依據(jù)及主要鑒定試驗的原理、操作；3

掌握主要非發(fā)酵菌的主要鑒定特征；4

了解人體腸道正常菌群的分布；5

了解糞便標本的采集方法?！痉椒ㄔ怼坑捎谀c道中存在大腸埃希菌等很多條件致病菌，其與腸道致病菌的主要區(qū)別之一是：大多數(shù)條件致病菌可分解乳糖，而絕大多數(shù)腸道致病菌則不分解乳糖。分離腸道致病菌多用含乳糖的弱選擇性鑒別培養(yǎng)液（如麥康凱瓊脂等）對大腸埃希菌等條件致病菌有較強抑制作用、而又有利于腸道某些致病菌（如沙門菌及志賀菌屬）生長繁殖的強選擇性鑒別培養(yǎng)基?！窘虒W內(nèi)容】糞便標本分離培養(yǎng)、細菌鑒定及結(jié)果報告?！局饕獙嶒瀮x器及材料】、標本：糞便（肛拭子）；培養(yǎng)基：普通瓊脂平板、氧化酶試紙、O/F、KIA、MIU、IMViC等；試劑：革蘭染液、生化反應(yīng)試劑（吲哚、甲基紅、VP甲液、乙液）。【教學方式】講解實驗?zāi)康?、方法、結(jié)果報告方法、注意事項，學生操作、討論分析、課堂總結(jié)?！緦W時數(shù)】4學時

實驗十

弧菌、螺旋菌、放線菌、結(jié)核桿菌形態(tài)觀察【實驗類型】基礎(chǔ)性實驗【教學目標】1

本實驗要求觀察并描述弧菌、螺旋菌、放線菌、結(jié)核桿菌在普通光學顯微鏡下細菌形態(tài)?！痉椒ㄔ怼客ㄟ^革蘭染色、抗酸染色等觀察鏡下形態(tài)?！窘虒W內(nèi)容】1

觀察幽門螺桿菌形態(tài)示教片；2

觀察霍亂弧菌形態(tài)示教片；3

觀察放線菌形態(tài)示教片；4

觀察結(jié)核桿菌形態(tài)示教片?！局饕獙嶒瀮x器及材料】顯微鏡等【教學方式】講解菌體形態(tài)、鑒別要點，學生操作、課堂總結(jié)?！緦W時數(shù)】1學時

實驗十一

真菌標本微生物學檢驗【實驗類型】綜合性實驗【教學目標】1

掌握皮膚真菌感染標本直接檢查方法及臨床意義；2

掌握真菌小培養(yǎng)方法及結(jié)果觀察；3

掌握白色假絲酵母菌和新型隱球菌的主要鑒定特征；4

了解真菌感染標本的采集方法?！痉椒ㄔ怼吭恚翰煌募俳z酵母菌可通過其自身特殊的酶和培養(yǎng)基中的底物作用產(chǎn)生明顯的菌落顏色?！窘虒W內(nèi)容】1

皮膚真菌感染標本直接檢查及結(jié)果報告。2

真菌小培養(yǎng)；3

白色假絲酵母菌厚膜孢子實驗、芽管形成試驗?！局饕獙嶒瀮x器及材料】顯微鏡、37℃恒溫培養(yǎng)箱、玻片、試管、試管架、接種環(huán)、接種針、小牛血清、厭氧袋、生理鹽水等【教學方式】講解實驗?zāi)康?、方法、結(jié)果報告方法、注意事項，學生操作、討論分析、課堂總結(jié)?！緦W時數(shù)】4學時

實驗十二

螺旋體、真菌形態(tài)觀察【實驗類型】基礎(chǔ)性實驗【教學目標】1

本實驗要求觀察并描述鉤端螺旋體、梅毒螺旋體及真菌菌絲、分生孢子和新型隱球菌在普通光學顯微鏡下形態(tài)?！痉椒ㄔ怼堪准俳z酵母菌在營養(yǎng)和溫度條件不佳時，形成厚膜孢子來抵御不良環(huán)境?！窘虒W內(nèi)容】1

觀察鉤端螺旋體、梅毒螺旋體形態(tài)示教片；2

觀察真菌菌絲、分生孢子形態(tài)示教片；3

觀察新型隱球菌形態(tài)示教片?！局饕獙嶒瀮x器及材料】顯微鏡、37℃恒溫培養(yǎng)箱、玻片、試管、試管架、接種環(huán)、接種針、小牛血清、厭氧袋、生理鹽水等【教學方式】講解菌體形態(tài)、鑒別要點，學生操作、課堂總結(jié)?！緦W時數(shù)】1學時

實驗十三

厭氧菌形態(tài)觀察及分離培養(yǎng)方法示教【實驗類型】基礎(chǔ)性實驗【教學目標】1

掌握常用厭氧培養(yǎng)法的原理和技術(shù)關(guān)鍵；2

了解人體厭氧菌的分布情況；3

了解厭氧培養(yǎng)標本的采集運送原則?！痉椒ㄔ怼吭诿荛]的厭氧袋內(nèi)，通過化學的方法，去除罐內(nèi)的氧氣，并產(chǎn)生一定量的CO2，造成無氧環(huán)境。破傷風梭菌為革蘭氏染色陽性厭氧菌。必須在無氧或低氧分壓條件下才能生長?！窘虒W內(nèi)容】1

厭氧罐法或庖肉基法等厭氧培養(yǎng)法示教。2

破傷風梭菌形態(tài)示教?！局饕獙嶒瀮x器及材料】顯微鏡、37℃恒溫培養(yǎng)箱、玻片、試管、試管架、接種環(huán)、接種針、小牛血清、厭氧袋、生理鹽水等【教學方式】講解實驗?zāi)康?、原理、方法、注意事項、討論、課堂總結(jié)?！緦W時數(shù)】1學時

實驗十四

病毒的分離培養(yǎng)方法錄像觀看、討論【實驗類型】基礎(chǔ)性實驗【教學目標】觀看錄像后，結(jié)合講授內(nèi)容進行討論，理解和掌握病毒培養(yǎng)方法及注意事項。【方法原理】雞胚培養(yǎng)法【教學內(nèi)容】觀看病毒的分離培養(yǎng)方法錄像、教師介紹背景情況、課堂討論、總結(jié)?！局饕獙嶒瀮x器及材料】雞蛋、流感病毒等。【教學方式】介紹討論課目的、方式，引導(dǎo)學生提出和討論問題，課堂總結(jié)。