專家?guī)氵M入生物安全防護實驗室分子生物學(xué)檢驗技術(shù)生物化學(xué)檢驗教研室課件

分子生物學(xué)檢驗技術(shù)專家?guī)氵M入生物安全防護實驗室生物化學(xué)檢驗教研室分子生物學(xué)檢驗技術(shù)分子生物學(xué)技術(shù)是以DNA、RNA或蛋白質(zhì)為診斷材料，通過分析基因的存在、變異或表達，從而為疾病的診斷提供更加直接、更為科學(xué)的信息。已成為生命科學(xué)特別是臨床醫(yī)學(xué)不可或缺的重要工具。目錄實驗須知01分子生物學(xué)實驗室02常用儀器03CONTENTS分子生物學(xué)檢驗技術(shù)CONTENTS實驗須知PART01正確處理試劑注意實驗安全QC嚴(yán)格操作規(guī)程習(xí)慣微量操作防止實驗污染分子生物學(xué)檢驗技術(shù)實驗須知分子生物學(xué)實驗室PART02分子生物學(xué)檢驗技術(shù)實驗室基因擴增實驗室細胞培養(yǎng)室重組DNA實驗室基因擴增實驗室擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)01擴增產(chǎn)物分析區(qū)02試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)03樣本制備區(qū)04以體外擴增檢測DNA或RNA為目的的實驗室。嚴(yán)格分區(qū)操作：四個區(qū)基因擴增實驗室基因擴增實驗室試劑準(zhǔn)備區(qū)（15-20m2）操作儲存試劑的制備、分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于標(biāo)本制作的材料應(yīng)直接運送至該區(qū)，不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原材料必須儲存在本區(qū)內(nèi)。壓力梯度要求設(shè)備有2-8℃冰箱和-80冰箱、混勻器、微量加樣器及消耗品。相對正壓狀態(tài)，以防止外界含核酸氣溶膠的空氣進入，造成污染。標(biāo)本制備區(qū)（25-30m2）操作臨床標(biāo)本的保存、核酸提取、儲存及加入至擴增反應(yīng)管和測定mRNA時cDNA的合成。壓力梯度要求設(shè)備有2-8℃冰箱、-20℃冰箱、生物安全柜（B2型，核酸提取操作）、高速臺式離心機、混勻器、水浴箱、微量移液器。生物安全柜工作區(qū)垂直氣流全部來自實驗室，排風(fēng)經(jīng)過高效過濾器過濾后直接排至室外，不允許回到安全柜和實驗室中。相對鄰近區(qū)域為正壓，以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。擴增反應(yīng)配置和擴增區(qū)（15-20m2）操作DNA或DNA擴增；壓力梯度要求設(shè)備PCR儀、微量移液器；相對鄰近區(qū)域為負壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。產(chǎn)物分析區(qū)（15-20m2）操作擴增片段的分析、鑒定；壓力梯度要求設(shè)備通風(fēng)櫥、瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳、膜上或微孔板探針雜交，印記轉(zhuǎn)移、核酸測序。相對于鄰近區(qū)域為負壓，空氣從室外流向室內(nèi)，避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴增至其他區(qū)域。常用儀器PART03培養(yǎng)箱常用培養(yǎng)箱一般為隔水式恒溫培養(yǎng)箱細菌——37℃霉菌——28℃使用時注意培養(yǎng)箱的水位，水位過低會引起溫度變化幅度加大，不能控溫。冰箱4℃：適合儲存某些溶液、試劑、藥品等。-20℃：適用于酶、血清、配好的抗生素和DNA、蛋白質(zhì)樣品等。-80℃：適合某些長期低溫保存的樣品、大腸桿菌菌種、純化的樣品、特殊的低溫處理感受態(tài)等的保存。0-10℃：適合低溫條件下的電泳、層析、透析等實驗。搖床用于大腸桿菌，酵母菌等生物工程菌種的振蕩培養(yǎng)及蛋白的誘導(dǎo)表達，培養(yǎng)通常為37℃和28℃。常溫式恒溫式烘箱用于滅菌和洗滌后的物品烘干。有些塑料用具只能在42-45℃的烤箱中進行烘干；用于RNA方面的實驗用具，需要在250℃烤箱中烘干。高壓蒸汽滅菌鍋/箱主要用于能耐高溫的物品，如培養(yǎng)基、金屬器械、玻璃、搪瓷、敷料、橡膠及一些藥物的滅菌。壓力升至103.4kPa，溫度達121.3℃，維持15~20分鐘，可達到滅菌目的。電子天平按照最大稱量的不同分為超微量（2-5g），微量（3-50g），半微量（20-100g）等規(guī)格。使用前需要檢查是否水平。稱量時需要稱量紙，決不允許直接稱量。稱量腐蝕性和吸濕性物質(zhì)時需要用燒杯稱量。pH計玻璃電極平常不用時應(yīng)浸泡在蒸餾水中。甘汞電極在初次使用前，應(yīng)浸泡在飽和氯化鉀溶液內(nèi)，不要與玻璃電極同泡在蒸餾水中。不使用時也浸泡在飽和氯化鉀溶液中。磁力攪拌器在配置試劑過程中，有些試劑較難溶解，這時需要借助磁力攪拌器。磁力攪拌器可以加速溶解固體內(nèi)容物。磁力攪拌器一般帶加熱功能。電爐和微波爐生物安全柜和超凈工作臺PCR儀普通和梯度PCR儀熒光定