儲(chǔ)糧害蟲抗藥性測定方法 第2部分：防護(hù)劑抗性測定方法

1儲(chǔ)糧害蟲抗藥性測定方法第2部分：防護(hù)劑抗性測定方法本文件適用于儲(chǔ)糧害蟲對化學(xué)儲(chǔ)糧防護(hù)劑抗藥性檢測方法，蟲態(tài)以成蟲為檢測對藥膜法適用于拉硫磷、溴氰菊酯、殺螟硫磷、甲基嘧啶磷等防護(hù)劑米象（SitophilusoryzaeLinnaeus）、谷蠹（Rhizoperthadominica）、玉米象（Sitophiluszeamais）、銹赤扁谷盜（CryptolestesferrugineusStephens）、大谷盜（TenebroidesmauritanicusLinnaeus）、綠Hübener)等，蟲糧等級劃分及等級指標(biāo)遵照GB/T29890注：常用于大型糧2造成同一蟲齡儲(chǔ)糧害蟲（實(shí)驗(yàn)生物）群體中產(chǎn)生50%死亡率的某一藥物或毒物的劑注：用LD50表示，單位以mg/kg（糧食）表示。是測試化學(xué)儲(chǔ)糧防護(hù)劑殺蟲效果的重要參數(shù)，即LD50值越小，則其殺抗性系數(shù)反應(yīng)儲(chǔ)糧害蟲群體對防護(hù)劑的抗藥性，用注：Rf=供試品系LD50/敏感品系LD50，Rf值越大4飼料混毒法4.2供試蟲源供試害蟲品系采集自為害場所，如大型糧庫、谷物加工廠、農(nóng)戶小型糧倉等，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)1世代4.3設(shè)備（儀器）與試劑4.3.1養(yǎng)蟲室4.3.2試蟲飼料將小麥水洗后置于電熱鼓風(fēng)干燥箱中經(jīng)60℃恒溫消毒烘干至少4h，待其烘干至水分為13%±0.5%時(shí)取出，冷卻至室溫后，用粉碎機(jī)制備全麥粉，按全麥粉：干酵母粉=9：1的比例制備基礎(chǔ)混合飼料，密封低溫（5℃)儲(chǔ)存?zhèn)溆?。最高濃度劑量組死亡率≤90%，且僅以溶劑處理的對照組死亡率≤10%，理想等級測試不少于5組，否則4.3.5其他設(shè)備34.4檢測方法4.4.1試蟲飼養(yǎng)供試害蟲均培養(yǎng)在30℃±0.5℃,（70%±5%）RH，24h無光照條件的恒溫恒濕培養(yǎng)箱或養(yǎng)蟲室中。取數(shù)百頭成蟲，投入裝有適量4.3.2中制備的基礎(chǔ)飼4.4.2試蟲準(zhǔn)備），4.4.3混毒飼料制備按照4.3.3要求制備系列劑量梯度的儲(chǔ)糧防護(hù)劑溶液與4.3.2中基礎(chǔ)飼料充分均勻混合制備系列劑4.4.4防護(hù)劑抗藥性測定取4.4.2中供試害蟲投入裝有300g4.4.3制備的混毒飼料的培養(yǎng)瓶中，置于25℃±0.5℃,（70%±5%）RH，黑暗恒溫培養(yǎng)箱飼養(yǎng)24h，挑出試蟲轉(zhuǎn)入放置未添加防護(hù)劑飼料的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)飼養(yǎng)14d，每處理不少于5次重復(fù)。特殊情況可以適當(dāng)調(diào)整試驗(yàn)環(huán)境條件。若供試儲(chǔ)糧害蟲成蟲期不足28d，可以4.4.5.1死亡率4.4.5.2校正死亡率4.4.5.3抗性系數(shù)(Rf)··················································4抗性系數(shù)計(jì)算結(jié)果均保留到小數(shù)點(diǎn)后兩位。依據(jù)附錄A中表A.1判定供試儲(chǔ)糧害蟲的抗性水平。5.2供試蟲源供試害蟲品系采集自為害場所，如大型糧庫、谷物加工廠、農(nóng)戶小型糧倉等，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)1世代5.3設(shè)備（儀器）與試劑5.3.1養(yǎng)蟲室將小麥水洗后置于電熱鼓風(fēng)干燥箱中經(jīng)60℃恒溫消毒烘干至少4h，待其烘干至水分為13%±0.5%時(shí)取出，冷卻至室溫后，用粉碎機(jī)制備全麥粉，按全麥粉：干酵母粉=9：1的比例制備基礎(chǔ)混合飼料，亡率≥10%，最高濃度劑量組死亡率≤90%，且僅以溶劑處理的對照組死亡率≤10%，理想等級測試不少配制防護(hù)劑系列梯度溶液有機(jī)溶劑可用丙酮、二甲基亞砜、甲5.4檢測方法取數(shù)百頭成蟲，投入裝有適量5.3.2中制備的基礎(chǔ)飼料的500mL玻璃瓶中的基礎(chǔ)飼料收集放回原培養(yǎng)瓶內(nèi)置于原培養(yǎng)箱或養(yǎng)蟲室中繼續(xù)培養(yǎng)，待其子代發(fā)育到成蟲后，挑選2周取5.4.1中羽化2周齡健康成蟲，并隨機(jī)分組（每組不少于50頭用于防護(hù)劑抗藥性測定。5并冷卻后的小麥顆粒表面，確保小麥顆粒表面均勻涂理不少于5次重復(fù)。特殊情況可以適當(dāng)調(diào)整試驗(yàn)環(huán)境條件。若供試儲(chǔ)糧害蟲成蟲期不足28d，可以適當(dāng)調(diào)整處理后培養(yǎng)時(shí)間，檢查死亡蟲數(shù)。5.4.5.1死亡率5.4.5.2校正死亡率×100%················5.4.5.3抗性系數(shù)(Rf)··················································抗性系數(shù)計(jì)算結(jié)果均保留到小數(shù)點(diǎn)后兩位。依據(jù)附錄A中表A.1判定供試儲(chǔ)糧害蟲的抗性水平。6供試害蟲品系采集自為害場所，如大型糧庫、谷物加工廠、農(nóng)戶小型糧倉等，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)1個(gè)世用以實(shí)現(xiàn)培養(yǎng)儲(chǔ)糧害蟲所需溫濕度條件的設(shè)備或者專用房間，其溫度精準(zhǔn)控制在30℃±0.5℃,相將小麥水洗后置于電熱鼓風(fēng)干燥箱中經(jīng)60℃恒溫消毒烘干至少4h，待其烘干至水分為13%±0.5%時(shí)取出，冷卻至室溫后，用粉碎機(jī)制備全麥粉，按全麥粉：干酵母粉=9：1的比例制備基礎(chǔ)混合飼料，亡率≥10%，最高濃度劑量組死亡率≤90%，且僅以溶劑處理的對照組死亡率≤10%，理想等級測試不少配制防護(hù)劑系列梯度溶液有機(jī)溶劑可用丙酮、二甲基亞砜、甲試蟲均培養(yǎng)在30℃±0.5℃,（70%±5%）RH，24h無光照條件的恒溫恒濕培養(yǎng)箱或養(yǎng)蟲室中。取數(shù)百頭成蟲，投入裝有適量6.3.2中制備的基礎(chǔ)飼料的500mL玻璃瓶中，產(chǎn)基礎(chǔ)飼料收集放回原培養(yǎng)瓶內(nèi)置于原培養(yǎng)箱或養(yǎng)蟲室中繼續(xù)培養(yǎng)，待其子代發(fā)育到成蟲后，挑選2周齡取6.4.1中羽化2周齡健康成蟲，并隨機(jī)分組（每組不少于50頭用于防護(hù)劑抗藥性測定。準(zhǔn)備直徑9cm培養(yǎng)皿，取直徑9cm定性濾紙置于皿底將6.4.2中供試害蟲移人墊有濾紙藥膜的培養(yǎng)皿中，待其在濾紙藥膜上爬行1RH，黑暗恒溫培養(yǎng)箱飼養(yǎng)14d，檢查死亡蟲數(shù)，觸角展開，用毛筆輕觸試蟲尾部，任何附肢都不動(dòng)者7×100%················