新食品原料β-羥基-β-甲基丁酸鈣

1β-羥基-β-甲基丁酸鈣擬公告文本β-羥基-β-甲基丁酸鈣英文名稱Calciumβ-hydroxy-β-methylbutyrate(CaHMB)基本信息分子式：C10H18O6Ca?H2O分子量：292生產(chǎn)工藝簡述以次氯酸鈉、二丙酮醇、鹽酸、乙酸乙酯、乙萃取、中和反應、離心、干燥等工藝制成。推薦食用量其他需要說1.使用范圍：飲料、乳及乳制品、可可制品、巧克力及巧克力制品、糖果、烘焙食品、運動營養(yǎng)食品、特殊醫(yī)學用途配方食品。標簽、說明書應當標注不適宜人群和食用限3.質(zhì)量規(guī)格和食品安全指標見附錄。2理化指標應符合表2的規(guī)定。表2理化指標2,3-二羥基-3-甲基丁酸，%≤2-羥基-3-甲基-2-丁烯酸，%≤1.3微生物限量微生物限量應符合表3的規(guī)定。表3微生物限量ncmM525250-523β-羥基-β-甲基丁酸的檢測A.1原理樣品經(jīng)溶解，采用反相高效液相色譜分離，紫外檢測器檢測，外標法定量。A.2試劑和材料除非另有說明，本方法所用的所有試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。A.2.1磷酸二氫鉀。A.2.3磷酸：85%。A.2.4氫氧化鉀。A.2.5鹽酸：36.0%~38.0%。A.2.6鹽酸溶液（0.1mol/L移取8.3mL鹽酸，小心注入已加入適量水的容量瓶中，用水定容至1000mL，混勻。A.2.7氫氧化鉀溶液（1.0mol/L稱取56.0g氫氧化鉀，加適量水溶解，并用水定容至1000mL，混勻。A.2.9尼龍濾膜：0.22μm。A.2.10流動相A稱取2.60g磷酸二氫鉀至1L燒杯中，加入950mL水，攪拌直至完全溶解，再加入50mL乙腈，攪勻。用約0.25g磷酸4（85%調(diào)節(jié)pH至2.90±0.02；如果溶液pH低于2.88，再用氫氧化鉀溶液（1.0mol/L）調(diào)節(jié)pH至范圍內(nèi)。用0.22μm的尼龍濾膜脫氣過濾。A.2.11流動相B分別量取800mL乙腈和200mL水，加入試劑瓶中，混和均勻。用0.22μm的尼龍濾膜脫氣過濾，置于密閉容器中。A.3儀器和設備A.3.1高效液相色譜儀：配紫外檢測器或二極管陣列檢測器。A.3.2電子天平：感量為0.0001g。A.4分析步驟A.4.1標準溶液的制備A.4.1.1β-羥基-β-甲基丁酸標準儲備液（1.8mg/mL）稱取β-羥基-β-甲基丁酸標準品0.18g（精確至0.0001g）于燒杯中，0.1mol/L鹽酸溶液溶解后轉(zhuǎn)移到100mL容量瓶中。用鹽酸溶液溶解并定容。A.4.1.2β-羥基-β-甲基丁酸標準工作液5mL和10mL于10mL容量瓶，用鹽酸溶液定容，混合均勻，得到濃度分別為0.225mg/mL、0.45mg/mL、0.90mg/mL和1.80A.4.2試樣溶液的制備稱取β-羥基-β-甲基丁酸鈣樣品0.14g（精確到0.0001g）5于燒杯中，用0.1mol/L鹽酸溶液溶解后轉(zhuǎn)移到100mL容量瓶中。用鹽酸溶液溶解并定容。A.4.3液相色譜參考條件A.4.3.1色譜柱：C18色譜柱，規(guī)格250mm×4.6mm×5μm或其他A.4.3.2柱溫：20℃。A.4.3.3流速：0.5mL/min。A.4.3.4進樣量：5μL。A.4.3.5波長：214nm。A.4.3.6流動相：梯度洗脫程序見表A.1。表A.1梯度洗脫程序0A%0000A.4.4標準曲線在規(guī)定色譜條件下，按照濃度從低到高，取各標準工作液5μL注入色譜儀進行測定。β-羥基-β-甲基丁酸的反相高效液相參考色譜圖見圖C.1。計算各標準工作液的峰面積。以峰面積為縱坐標，以標準工作液濃度為橫坐標，繪制得到β-羥基-β-甲基丁酸的標準曲線。A.4.5試樣溶液的測定在規(guī)定色譜條件下，取試樣溶液5μL注入色譜儀進行測定。計算試樣溶液中β-羥基-β-甲基丁酸的峰面積，從標準曲線6查得試樣溶液中β-羥基-β-甲基丁酸的濃度。A.5結(jié)果計算樣品中β-羥基-β-甲基丁酸的含量按式（A.1）計算。ω——樣品中β-羥基-β-甲基丁酸含量，單位為克每百克（g/100gρ——試樣溶液中β-羥基-β-甲基丁酸的濃度，單位為毫克每毫升（mg/mLV——試樣定容體積，單位為毫升（mLm——試樣的質(zhì)量，單位為毫克（mg100——換算系數(shù)。平行測定結(jié)果取算術(shù)平均值，結(jié)果保留至整數(shù)位。A.6精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的相對標準偏差72,3-二羥基-3-甲基丁酸及2-羥基-3-甲基-2-丁烯酸的檢測B.1原理樣品中的2,3-二羥基-3-甲基丁酸、2-羥基-3-甲基-2-丁烯酸和β-羥基-β-甲基丁酸經(jīng)反相高效液相色譜分離，紫外檢測器檢測。以試樣溶液中β-羥基-β-甲基丁酸作為對照，采用相對保留時間定性試樣溶液中的2,3-二羥基-3-甲基丁酸和2-羥基-3-甲基-2-丁烯酸，峰面積歸一法定量。B.2試劑和材料B.3儀器和設備B.4分析步驟B.4.1標準溶液的制備B.4.2試樣溶液的制備稱取β-羥基-β-甲基丁酸鈣樣品0.56g（精確到0.0001g）于燒杯中，用0.1mol/L鹽酸溶液溶解后轉(zhuǎn)移到100mL容量瓶中，加入鹽酸溶液溶解并定容。B.4.3液相色譜參考條件B.4.3.1色譜柱：C18色譜柱，規(guī)格250mm×4.6mm×5μm或其他等效色譜柱。8B.4.3.2柱溫：20℃。B.4.3.3流速：0.5mL/min。B.4.3.4進樣量：5μL。B.4.3.5波長：192nm。B.4.3.6流動相：同A.4.3.6。梯度洗脫程序同表A.1。B.4.4分析步驟在規(guī)定色譜條件下，取鹽酸溶液、β-羥基-β-甲基丁酸標準溶液和試樣溶液各5μL，分別注入色譜儀進行測定。以試樣溶液中β-羥基-β-甲基丁酸作為對照，采用相對保留時間（即試樣溶液中某組分的保留時間與試樣溶液中β-羥基-β-甲基丁酸的保留時間的比值）定性2,3-二羥基-3-甲基丁酸和2-羥基-3-甲基-2-丁烯酸-3-甲基-2-丁烯酸和β-羥基-β-甲基丁酸的峰面積，用面積歸一法計算2,3-二羥基-3-甲基丁酸和2-羥基-3-甲基-2-丁烯酸的含量。β-羥基-β-甲基丁酸標準溶液的反相高效液相參考色譜圖見圖C.2。試樣溶液中2,3-二羥基-3-甲基丁酸、2-羥基-3-甲基-2-丁烯酸和β-羥基-β-甲基丁酸的反相高效液相參考色譜圖見圖C.3。表B.2相對保留時間參考值B.5結(jié)果計算9樣品中2,3-二羥基-3-甲基丁酸的含量X1按式（B.1）計算。X1——樣品中2,3-二羥基-3-甲基丁酸的含量，單位為%；A1——試樣溶液中2,3-二羥基-3-甲基丁酸的峰面積；∑Ai——β-羥基-β-甲基丁酸、2,3-二羥基-3-甲基丁酸和2-羥基-3-甲基-2-丁烯酸的峰面積之和。結(jié)果保留一位小數(shù)。樣品中2-羥基-3-甲基-2-丁烯酸的含量按式（B.2）計算。X2——樣品中2-羥基-3-甲基-2-丁烯酸的含量，單位為%；A2——試樣溶液中2-羥基-3-甲基-2-丁烯酸的峰面積；∑Ai——β-羥基-β-甲基丁酸、2,3-二羥基-3-甲基丁酸和2-羥基-3-甲基-2-丁烯酸的峰面積之和。結(jié)果保留一位小數(shù)。反相高效液相參考色譜圖C.1β-羥基-β-甲基丁酸標準溶液的反相高效液相參考色譜圖（214nm）β-羥基-β-甲基丁酸標準溶液的反相高效液相參考色譜圖（214nm）見圖C.1。圖C.1β-羥基-β-甲基丁酸標準溶液的反相高效液相參考色譜圖（214nm）C.2β-羥基-β-甲基丁酸標準溶液的反相高效液相參考色譜圖（192nm）β-羥基-β-甲基丁酸標準溶液中的反相高效液相參考色譜圖圖C.2β-羥基-β-甲基丁酸標準溶液的反相高效液相參考色譜圖C.3試樣溶液中2,3-二羥基-3-甲基丁酸、2-羥基-3-甲基-2-丁烯酸和β-羥基-β-甲基丁酸的反相高效液相參考色譜圖（192nm）試樣溶液中2,3-二羥基-3-甲基丁酸、2-羥基-3-甲基-2-丁烯酸和β-羥基-β-甲基丁酸的反相高效液相參考色譜圖（192nm）圖C.3試樣溶液中2,3-二羥基-3-甲基丁酸、2-羥基-3-甲基-2-丁烯酸和β-羥基-β-甲基丁酸的反相高效液相參考色譜圖（192nm）三氯甲烷的檢測D.1原理樣品用水溶解后置于密封的頂空瓶中，在一定的穩(wěn)定溫度下經(jīng)一定時間的平衡，樣品中的三氯甲烷逸至上部空間，并在氣液兩相中達到動態(tài)的平衡，此時，三氯甲烷在氣相中的濃度與它在液相中的濃度成正比。通過對氣相中三氯甲烷濃度的測定，可計算出樣品中三氯甲烷的濃度。注：其它內(nèi)容參考GB/T5750.8-2006中1.2毛細管氣相色譜法，涉及到四氯化碳的內(nèi)容均不適用。D.2試劑和材料D.3儀器D.4樣品樣品的處理：稱取樣品約0.2g用水溶解，定容至50mL容量瓶中，準確移取10mL于頂空瓶中，于70℃自動頂空平衡20min。D.5分析步驟標準使用液的平衡條件為70℃,20min。樣品及標準使用液進樣量為1mL。其余同GB/T5750.8-2006中1.2.6。D.6結(jié)果的表示D.6.1定性結(jié)果D.6.2定量結(jié)果樣品中三氯甲烷的含量按式（D.1）計算。m×1000……P=C×V×nm×1000……P——樣品中三氯甲烷的含量，單位為毫克每千克（mg/kgc——標準曲線上查得的試樣中三氯甲烷的含量，單位為微克每升（ng/mLV——樣品的定容體積，單位為毫升（mLm——樣品的稱樣量，單位為克（g1000——單位換算系數(shù)。β-羥基-β-甲基丁酸鈣解讀材料β-羥基-β-甲基丁酸鈣（Calciumβ-hydroxy-methylbutyrate，CaHMB）是β-羥基-β-甲基丁酸(β-hydroxy-β-methylbutyricacid，HMB）的鈣鹽。HMB廣泛存在于多種食物中，同時也是亮氨酸在人體內(nèi)的次要代謝產(chǎn)物。本產(chǎn)品是由次氯酸鈉、二丙酮醇、鹽萃取、中和反應、離心、干燥等工藝制成。目前，β-羥基-β-甲基丁酸鈣已被我國、美國、歐盟、日本、新加坡等多個國家和國際組織批準使用。2011年我國批準CaHMB作為新資源食品用于運動營養(yǎng)食品、特殊醫(yī)學用途配方食品中，每日食用量不超過3g；2017年將其使用范圍擴大到飲料、乳及乳制品、可可制品、巧克力及巧克力制品、糖果、烘焙食品、運動營養(yǎng)食品、特殊醫(yī)學用途配方食品中，每日推薦食用量不超過3g