SZDB∕Z 315-2018 基于基因條形碼的魚(yú)類物種鑒定技術(shù)要求

SZDB/ZSZDB/Z315—2018基于基因條形碼的魚(yú)類物種鑒定技術(shù)要求TechnicalspecificationforidentificationoffishspeciesbasedonDNA2018-08-02發(fā)布2018-09-01實(shí)施深圳市市場(chǎng)和質(zhì)量監(jiān)督管理委員會(huì)發(fā)布I 1 1 1 2 2 2 3 3 5 6 7 9 本文件由深圳市檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院提出。1本文件適用于對(duì)自然環(huán)境種化產(chǎn)生的野生型魚(yú)類或其殘存的組織進(jìn)行物種鑒定,不適用于雜交品FDASOPforGeneratingDNABarcodesSuitableforSpe是指可用于物種鑒定的具有生物物種序列特征的DNA片段，本文件中指魚(yú)類線粒體基因組中的COI從基因組DNA提取步驟開(kāi)始至PCR擴(kuò)增和PCR產(chǎn)物檢測(cè)整個(gè)過(guò)程，沒(méi)有加入任何魚(yú)源性成滅菌潔凈離心管，與其他受試的樣品平行進(jìn)行操作以觀察實(shí)驗(yàn)是否處于正常狀態(tài)?？瞻讓?duì)照沒(méi)有PCR產(chǎn)2序列相似度（Similarityofthesequences）生物信息學(xué)術(shù)語(yǔ)，又稱Pearson格式，是一種用文本表示核苷酸序列或者氨基酸序列的示例1:>1NCBI：美國(guó)生物技術(shù)信息中心（Nationalcenterforbiotechno快又相對(duì)保守，既有足夠的變異又便于通用引物擴(kuò)增，DNA序列很少有插入與缺失現(xiàn)象，便于序列比對(duì)35’-3’TGTAAAACGACGGCCAGTCGACTAATCATAAAGATTGTAAAACGACGGCCAGTCAACCAACCACAAAGACCAGGAAACAGCTATGACACTTCAGGGTGACCGAACAGGAAACAGCTATGACACCTCAGGGTGTCCGAA4采集的組織置于冰上低溫保存?zhèn)溆?，如需長(zhǎng)期保存應(yīng)置于≤-20℃冷藏或置于75%乙醇中固定保存。取20mg樣品組織剪碎置于潔凈1.5mL離心管中，加入600μL裂解液（見(jiàn)附錄A.1）和20μL蛋白4℃,12000r/min離心10min，將上清液轉(zhuǎn)移至另一潔凈的1.5mL離心管中，4℃,12000r/min離4棄上清，晾干；干燥后加入50μL去離子水溶解；DNA提取液應(yīng)置于冰上備用，若需長(zhǎng)期保存應(yīng)置于≤在0.2mLPCR反應(yīng)管中，按表1配制反應(yīng)體系，加樣宜按551156 將200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中，輕輕搖動(dòng)，直至蛋白用去離子水定容至1L，即為50×TAE電泳緩沖液，滅菌后室溫保存。使用時(shí)用去離子水稀釋50倍即得17B.2.1登陸網(wǎng)址：http://www.ebi.ac.uk/Tools/st/emboss_transeq，序列B.2.3給出的六條氨基酸序列中，只要有一條沒(méi)有星號(hào)，表明可以得到一條具有完整開(kāi)放閱讀框的拼9根據(jù)序列的相似度判定魚(yú)類的種類，相似度最高且＞98.0％者，可判定為同一種類。若相似度＞D.1.1