靶向高通量測(cè)序技術(shù)應(yīng)用于感染性疾病專家共識(shí)解讀

靶向高通量測(cè)序技術(shù)應(yīng)用于感染性疾病專家共識(shí)匯報(bào)人：目錄CATALOGUE摘要臨床適應(yīng)證tNGS的實(shí)驗(yàn)流程建議質(zhì)量控制報(bào)告解讀總結(jié)與展望01摘要PART摘要感染性疾病的威脅與檢測(cè)感染性疾病仍為全球公共衛(wèi)生重要威脅，準(zhǔn)確病原學(xué)檢測(cè)對(duì)診治至關(guān)重要；傳統(tǒng)方法雖各有優(yōu)勢(shì)，但也存在不同局限性，亟待更精準(zhǔn)的檢測(cè)手段。tNGS技術(shù)的應(yīng)用與挑戰(zhàn)靶向高通量測(cè)序技術(shù)（tNGS）在感染性疾病病原體檢測(cè)中展現(xiàn)潛力，隨著技術(shù)進(jìn)步和成本降低，預(yù)計(jì)tNGS將在感染性疾病的診斷和治療中得到更廣泛應(yīng)用。制定共識(shí)的意義為確保tNGS在臨床應(yīng)用中的規(guī)范性，提升感染性疾病病原體診斷質(zhì)量，明確應(yīng)用場(chǎng)景并實(shí)施質(zhì)量管理，我們組織專家制定了共識(shí)，旨在促進(jìn)技術(shù)良性發(fā)展。共識(shí)的期望與影響希望共識(shí)能促進(jìn)技術(shù)交流與合作，助力臨床抗感染診治能力提升，為感染性疾病的精準(zhǔn)治療提供堅(jiān)實(shí)的技術(shù)支持，為公共衛(wèi)生事業(yè)貢獻(xiàn)力量。02臨床適應(yīng)證PART疑似下呼吸道感染tNGS助診下呼吸道感染對(duì)于疑似下呼吸道感染的非重癥患者，tNGS檢測(cè)有助于明確病原體，尤其當(dāng)傳統(tǒng)微生物檢測(cè)未明、治療無(wú)效及針對(duì)高危人群時(shí)。tNGS檢出優(yōu)勢(shì)顯著tNGS顯著提升病原體檢出率，優(yōu)于傳統(tǒng)方法，且在識(shí)別非典型病原體和混合感染方面表現(xiàn)突出，為下呼吸道感染診斷提供有力支持。tNGS指導(dǎo)治療tNGS檢測(cè)效率高、成本效益優(yōu)，其臨床應(yīng)用為下呼吸道感染治療提供指導(dǎo)，突顯了在感染性疾病診斷中的應(yīng)用價(jià)值。tNGS助診MP感染tNGS在兒童MP感染診斷中準(zhǔn)確，且能檢測(cè)耐藥基因，助力早期診斷與流行病學(xué)監(jiān)測(cè)，對(duì)兒童社區(qū)獲得性肺炎具有重要意義。疑似中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染01tNGS早診顱內(nèi)感染針對(duì)經(jīng)驗(yàn)性抗感染治療不佳、傳統(tǒng)微生物檢測(cè)陰性及顱內(nèi)感染疑似占位性病變的非重癥患者，tNGS檢測(cè)在傳染性腦膜炎/腦炎腦脊液中表現(xiàn)出色。02tNGS敏感度遠(yuǎn)超傳統(tǒng)方法在小兒神經(jīng)外科患者中，tNGS診斷中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染的敏感度和特異度遠(yuǎn)高于傳統(tǒng)腦脊液培養(yǎng)和涂片方法，ROC分析顯示其性能優(yōu)越。疑似血流感染tNGS助診BSI對(duì)于疑似血流感染的非重癥患者，tNGS檢測(cè)尤其適用于傳統(tǒng)微生物檢測(cè)陰性、治療無(wú)效及高危人群（兒童、孕婦、老年人及基礎(chǔ)疾病患者）。tNGS精準(zhǔn)識(shí)別病原體tNGS性能優(yōu)于血培養(yǎng)BSI是危及生命的全身性感染，對(duì)高危人群需高度重視；tNGS技術(shù)能快速準(zhǔn)確識(shí)別病原體，輔助醫(yī)師精準(zhǔn)診斷治療，提高臨床療效。tNGS對(duì)BSI診斷敏感度高，檢測(cè)TAT快，且31.9%患者在針對(duì)性抗感染治療調(diào)整后病情改善，其性能優(yōu)于血培養(yǎng)和mNGS。123疑似泌尿系統(tǒng)脊柱關(guān)節(jié)感染在關(guān)節(jié)假體感染中，tNGS診斷敏感度和特異度與mNGS相當(dāng)，但成本和檢測(cè)TAT更優(yōu)，且在關(guān)節(jié)假體感染中的診斷性能與培養(yǎng)和mNGS相當(dāng)。tNGS診斷PJI精準(zhǔn)tNGS檢測(cè)尿路感染病原體快速、靈敏、全面，可作為傳統(tǒng)尿液培養(yǎng)方法的補(bǔ)充，尤其適用于復(fù)雜和混合感染，提升臨床診斷價(jià)值。tNGS助診尿路感染0102結(jié)核分枝桿菌耐藥檢測(cè)針對(duì)結(jié)核分枝桿菌耐藥基因與表型一致性高的物種，tNGS檢測(cè)方法表現(xiàn)出色，與傳統(tǒng)方法相比，它能夠快速識(shí)別結(jié)核分枝桿菌的譜系和耐藥性。tNGS助力耐藥檢測(cè)tNGS檢出率高tNGS指導(dǎo)治療tNGS檢出率高于AFB涂片、培養(yǎng)及免疫學(xué)檢查，與XpertMTB/RIF敏感度相當(dāng)，且對(duì)不同耐藥譜結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)結(jié)果與WGS高度一致。tNGS對(duì)利福平、異煙肼等耐藥檢測(cè)敏感度高，且糞便樣本檢測(cè)顯示其廣泛適用性，為耐藥結(jié)核病治療提供精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)指導(dǎo)的臨床信息。優(yōu)先mNGS送檢情況對(duì)于病原體未明且病因不明的危重癥患者，應(yīng)優(yōu)先考慮mNGS送檢，以盡早明確病原學(xué)診斷，指導(dǎo)精準(zhǔn)治療。mNGS助診危重癥感染免疫功能抑制患者感染復(fù)雜，mNGS能覆蓋更廣泛病原體，提高病原學(xué)診斷率，應(yīng)優(yōu)先考慮以明確病因。mNGS助力免疫功能抑制患者在社區(qū)聚集疑似新發(fā)病原體暴發(fā)流行中，mNGS因其更廣的病原體覆蓋優(yōu)勢(shì)，成為明確病原體的重要手段，助力早期診斷與控制。mNGS助力早期診斷多學(xué)科會(huì)診與判讀多標(biāo)本檢測(cè)助診在臨床中，多標(biāo)本檢測(cè)為致病菌判斷提供豐富參考，詳細(xì)評(píng)估患者確定潛在感染病因時(shí)，建議進(jìn)行病原微生物深入分析。微生物多學(xué)科會(huì)診判讀結(jié)合多領(lǐng)域知識(shí)對(duì)于病情嚴(yán)重且病因不明的患者，建議感染科、病原微生物團(tuán)隊(duì)及相關(guān)臨床科室進(jìn)行多學(xué)科會(huì)診，以全面評(píng)估病情。tNGS檢測(cè)結(jié)果判讀需結(jié)合患者病情、標(biāo)本類型和實(shí)驗(yàn)室結(jié)果，必要時(shí)參考文獻(xiàn)，確保診斷的準(zhǔn)確性和可靠性。123tNGS結(jié)果判讀臨床中多標(biāo)本檢測(cè)為致病菌判斷提供豐富信息，建議綜合患者病情、標(biāo)本類型和實(shí)驗(yàn)室結(jié)果，必要時(shí)參考文獻(xiàn)，由感染科、病原微生物團(tuán)隊(duì)等多學(xué)科會(huì)診，以確定潛在感染病因。多標(biāo)本綜合判讀對(duì)于病因復(fù)雜的微生物群落關(guān)系，建議進(jìn)行病原微生物深入分析，識(shí)別微生物群體組成及其與患者病情相關(guān)性，并考慮其他臨床科室的協(xié)同作用，以實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)抗菌治療。病原微生物深入分析010203tNGS的實(shí)驗(yàn)流程建議PART樣本采集與預(yù)處理建議在使用抗菌藥物治療前采集疑似感染患者的樣本，并優(yōu)先選擇感染部位樣本。實(shí)驗(yàn)室需建立完整前處理流程，保障生物安全性。樣本采集時(shí)機(jī)與類型樣本采集建議樣本處理與記錄不同樣本采集及注意事項(xiàng)詳述了各類樣本的采集要求，如鼻咽拭子、口咽拭子、BALF、痰液等，并強(qiáng)調(diào)了樣本采集時(shí)的注意事項(xiàng)。實(shí)驗(yàn)室收到樣本后需記錄詳細(xì)信息，包括樣本編號(hào)與類型。不同類型樣本需進(jìn)行滅活處理，檢查體積和黏度，預(yù)處理為可吸取液體樣本后再進(jìn)行后續(xù)操作。核酸提取要求常用核酸提取方法有柱提法和磁珠法，可根據(jù)實(shí)際操作和具體需求選擇或優(yōu)化。對(duì)于細(xì)胞壁較厚的樣本，可結(jié)合酶解法或化學(xué)法提高裂解效率。核酸提取技術(shù)核酸評(píng)估與污染防控為保證高純度和高質(zhì)量的DNA/RNA，需對(duì)核酸進(jìn)行純度和濃度評(píng)估。在RNA提取過(guò)程中需特別注意防止RNase污染，避免影響RNA病毒檢測(cè)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)針對(duì)不同類型樣本和特殊病原體建立核酸提取流程，并設(shè)立陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照。核酸提取的質(zhì)量是高通量測(cè)序成功的關(guān)鍵，需確保操作符合需求。核酸提取與質(zhì)量控制基于探針捕獲技術(shù)的tNGS（hc-tNGS）通過(guò)設(shè)計(jì)特異性探針捕獲目標(biāo)病原體核酸序列，提高檢測(cè)序列數(shù)和覆蓋度，可適用于已知病原體檢測(cè)，尤其苛養(yǎng)和低載量病原體，但不適用新發(fā)病原體檢測(cè)。tNGS技術(shù)選擇hc-tNGS的應(yīng)用與局限基于多重PCR技術(shù)的tNGS（mp-tNGS）通過(guò)設(shè)計(jì)多重PCR引物對(duì)目標(biāo)病原體核酸進(jìn)行富集，實(shí)驗(yàn)步驟簡(jiǎn)單快捷，適用于檢測(cè)幾十到幾百個(gè)靶標(biāo)，但存在引物間干擾、非特異性擴(kuò)增等問(wèn)題，影響穩(wěn)定性。mp-tNGS的優(yōu)缺點(diǎn)概述實(shí)驗(yàn)室在選擇tNGS技術(shù)時(shí)，需綜合考慮臨床需求、適用場(chǎng)景、樣本類型、預(yù)期病原體種類和數(shù)量、實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和技術(shù)水平等因素，確保選擇的技術(shù)能滿足檢測(cè)要求。技術(shù)選擇考慮因素生物信息學(xué)分析優(yōu)化生物信息學(xué)分析流程始于原始fastq文件，包括過(guò)濾低質(zhì)量序列、與參考數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)、序列組裝、耐藥基因和毒力基因鑒定等步驟，確保數(shù)據(jù)處理的準(zhǔn)確性和完整性。生物信息學(xué)分析流程為驗(yàn)證生物信息學(xué)分析流程的性能，需包括對(duì)照組和患者數(shù)據(jù)集的分析與比較，并通過(guò)常規(guī)實(shí)驗(yàn)室結(jié)果確認(rèn)最終結(jié)果準(zhǔn)確性。不同實(shí)驗(yàn)室可能采用不同分析流程，需詳細(xì)記錄所使用的方法。流程性能驗(yàn)證與記錄010204質(zhì)量控制PART實(shí)驗(yàn)室污染防控實(shí)驗(yàn)室應(yīng)通過(guò)合理的布局、環(huán)境潔凈度控制、單向工作流程、嚴(yán)格的去污染方案和對(duì)照的設(shè)置等降低污染風(fēng)險(xiǎn)，尤其采用專用操作空間，以最大程度減少氣溶膠污染。實(shí)驗(yàn)室防控污染策略tNGS診斷面臨污染挑戰(zhàn)，需防控氣溶膠、試劑及環(huán)境微生物污染；操作需嚴(yán)格訓(xùn)練，避免交叉污染；同時(shí)，實(shí)施去污染方案，如PCR標(biāo)簽控制和dUTP防污染技術(shù)。污染風(fēng)險(xiǎn)與控制措施核酸提取與數(shù)據(jù)質(zhì)控實(shí)驗(yàn)室的核酸提取流程應(yīng)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證；測(cè)序原始數(shù)據(jù)應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量控制，確保測(cè)序原始數(shù)據(jù)的質(zhì)量；同時(shí)，根據(jù)測(cè)序平臺(tái)和樣本類型選擇試劑盒和檢測(cè)流程。核酸提取與測(cè)序選擇寡核苷酸設(shè)計(jì)合成影響tNGS成功率與數(shù)據(jù)質(zhì)量，需嚴(yán)格質(zhì)控其來(lái)源、質(zhì)量與數(shù)量；同時(shí)數(shù)據(jù)與序列管理需檢驗(yàn)醫(yī)師與臨床醫(yī)師團(tuán)隊(duì)合作，確保檢測(cè)的準(zhǔn)確性。寡核苷酸設(shè)計(jì)與質(zhì)控測(cè)序數(shù)據(jù)量標(biāo)準(zhǔn)建議下機(jī)數(shù)據(jù)中單樣本平均數(shù)據(jù)量≥1M，識(shí)別正確率超過(guò)99.9%的堿基占比（Q30）≥85%，以確保tNGS在感染性疾病病原體診斷中的敏感度和特異度。數(shù)據(jù)量對(duì)診斷影響測(cè)序數(shù)據(jù)量直接影響tNGS診斷敏感度和特異度，較高數(shù)據(jù)量可提升低豐度病原體檢出率，區(qū)分病原體序列與背景噪音，減少假陽(yáng)性和假陰性，提高診斷準(zhǔn)確性。下機(jī)數(shù)據(jù)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性閾值設(shè)定依據(jù)tNGS技術(shù)中陽(yáng)性閾值的設(shè)定對(duì)于確保檢測(cè)的敏感度、特異度和臨床意義至關(guān)重要，需綜合考慮實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)分析、病原體特性等，并保證結(jié)果的可重復(fù)性。陽(yáng)性閾值重要性實(shí)驗(yàn)室分析tNGS結(jié)果時(shí)，陽(yáng)性閾值設(shè)定至關(guān)重要；應(yīng)基于檢測(cè)流程、臨床意義、病原體特性及實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)，設(shè)定閾值確保結(jié)果可重復(fù)，符合行業(yè)規(guī)范。實(shí)驗(yàn)室閾值設(shè)定建議0102參考樣品性能確認(rèn)參考樣品性能確認(rèn)對(duì)檢測(cè)和分析流程中的參考樣品（代表物種）進(jìn)行確認(rèn)是確保實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)性能的關(guān)鍵；建議確認(rèn)包括檢出限、精密度、準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性和重復(fù)性。檢測(cè)性能驗(yàn)證研究性能確認(rèn)步驟應(yīng)通過(guò)使用陰性、陽(yáng)性質(zhì)控和標(biāo)準(zhǔn)參考品，在不同時(shí)間點(diǎn)、不同操作人員和不同儀器上重復(fù)實(shí)驗(yàn)來(lái)完成，確保檢測(cè)方法的可靠性和實(shí)驗(yàn)室間的可比較性。偏差與干擾評(píng)估比較tNGS結(jié)果與傳統(tǒng)微生物學(xué)方法和其他分子診斷技術(shù)的一致性也十分必要；同時(shí)檢測(cè)流程中可能引入的偏差和干擾因素評(píng)估也是非常重要的環(huán)節(jié)。本地化檢測(cè)優(yōu)勢(shì)與挑戰(zhàn)醫(yī)院建檢測(cè)平臺(tái)提升技術(shù)與運(yùn)營(yíng)水平，可根據(jù)臨床實(shí)踐和病例特點(diǎn)定制流程，滿足特定臨床需求，提升診療水平。平臺(tái)提升醫(yī)療水平檢測(cè)提速診療效率挑戰(zhàn)醫(yī)院內(nèi)部檢測(cè)能夠顯著縮短樣本處理和結(jié)果報(bào)告的時(shí)間，有助于醫(yī)療團(tuán)隊(duì)更迅速地獲取關(guān)鍵的診斷信息，及時(shí)調(diào)整方案并提供緊急護(hù)理。醫(yī)院開(kāi)展本地化tNGS檢測(cè)面臨的挑戰(zhàn)主要包括技術(shù)人員的質(zhì)控意識(shí)、儀器設(shè)備校準(zhǔn)、方法學(xué)性能驗(yàn)證，以及實(shí)驗(yàn)室環(huán)境控制和安全保證等方面。05報(bào)告解讀PARTtNGS報(bào)告內(nèi)容tNGS結(jié)果報(bào)告應(yīng)全面，含患者信息、檢測(cè)方法、范圍、結(jié)果、質(zhì)量控制、結(jié)論建議、解釋權(quán)及參考文獻(xiàn)，確保檢測(cè)透明度與準(zhǔn)確性。檢測(cè)全方位報(bào)告報(bào)告基本內(nèi)容應(yīng)包括患者個(gè)人信息、送檢科室詳情、樣本采集接收記錄、tNGS技術(shù)步驟、測(cè)序平臺(tái)與策略、檢測(cè)范圍及結(jié)果、質(zhì)量控制措施等。報(bào)告詳實(shí)全面07060504030201引物：引物是PCR擴(kuò)增過(guò)程中至關(guān)重要的組成部分，為確保擴(kuò)增反應(yīng)的特異性，引物設(shè)計(jì)需精確匹配目標(biāo)DNA序列。檢出序列數(shù)：檢出序列數(shù)指樣本中檢出的微生物核酸序列總數(shù)；數(shù)值越高，理論上該病原體的有效擴(kuò)增信號(hào)越強(qiáng)。庫(kù)：庫(kù)是為進(jìn)行高通量測(cè)序而準(zhǔn)備的核酸樣本集合，包括經(jīng)過(guò)切割、修飾和適配體連接的DNA或RNA片段。質(zhì)控：質(zhì)控是在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中用于確保數(shù)據(jù)質(zhì)量的各種檢測(cè)和措施，質(zhì)控品建立背景微生物數(shù)據(jù)庫(kù)和排除環(huán)境污染等情況。內(nèi)參：內(nèi)參是實(shí)驗(yàn)中加入的已知量的核酸序列，用于監(jiān)控實(shí)驗(yàn)過(guò)程的準(zhǔn)確性和可靠性，以確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。陰性對(duì)照：陰性對(duì)照是實(shí)驗(yàn)中不含目標(biāo)病原體的樣本，其作用是確保實(shí)驗(yàn)過(guò)程不受污染，以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。SDSMRN：SDSMRN是標(biāo)準(zhǔn)化后的物種（種或型或亞型）嚴(yán)格比對(duì)序列數(shù)，用于評(píng)估測(cè)序數(shù)據(jù)中對(duì)病原體的檢測(cè)情況。報(bào)告常用術(shù)語(yǔ)解釋08Q30：Q30表示堿基錯(cuò)誤識(shí)別的概率為0.1%，即正確率為99.9%；Q30比例指正確率超過(guò)99.9%的堿基占比。質(zhì)控品數(shù)據(jù)庫(kù)建立01質(zhì)控品與數(shù)據(jù)庫(kù)建為確保tNGS檢測(cè)的準(zhǔn)確性，可使用質(zhì)控品建立背景微生物數(shù)據(jù)庫(kù)，并排除環(huán)境污染等情況。02質(zhì)控流程與結(jié)果判質(zhì)量合格的測(cè)序數(shù)據(jù)應(yīng)該綜合臨床特征和其他檢測(cè)指標(biāo)判定結(jié)果；陰性質(zhì)控品檢測(cè)陰性，陽(yáng)性質(zhì)控品正確檢出對(duì)應(yīng)病原體。樣本質(zhì)控流程分析測(cè)序完成后，應(yīng)全面質(zhì)控樣本、實(shí)驗(yàn)流程、文庫(kù)及數(shù)據(jù)質(zhì)量，合格后進(jìn)行分析；查看結(jié)果文件，包括臨床和對(duì)照樣本的下機(jī)數(shù)據(jù)量、數(shù)據(jù)質(zhì)量等。測(cè)序完成質(zhì)控全質(zhì)控合格后，使用比對(duì)工具將過(guò)濾后的讀段與本實(shí)驗(yàn)室的tNGS參考病原體數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，對(duì)檢出物種進(jìn)行精確注釋，以獲取有意義的生物學(xué)信息。比對(duì)注釋精準(zhǔn)0102檢出結(jié)果綜合判斷理論上，標(biāo)準(zhǔn)化后的物種SDSMRN高于其對(duì)應(yīng)類別的陽(yáng)性判斷閾值則視為檢出，同時(shí)考慮微生物自身特點(diǎn)及患者臨床實(shí)際情況。病原檢出標(biāo)準(zhǔn)病原檢出與校正序列數(shù)與致病判斷細(xì)菌分革蘭陽(yáng)性和陰性，病毒分DNA和RNA；根據(jù)陽(yáng)性判斷值、陰控倍數(shù)及強(qiáng)陽(yáng)污染閾值分析檢出靶標(biāo)，全部滿足則判定為陽(yáng)性。檢出序列數(shù)可能不足以反映病原體的真實(shí)豐度或致病潛力，應(yīng)結(jié)合臨床實(shí)際情況及其他臨床檢測(cè)結(jié)果、病原體本身致病情況判斷是否為致病微生物。低序列數(shù)綜合判斷法報(bào)告中某種/某些胞內(nèi)菌（如結(jié)核分枝桿菌）/厚壁菌（真菌，如曲霉等）檢出序列數(shù)不高時(shí)，需要結(jié)合患者臨床癥狀及其他檢測(cè)結(jié)果綜合判斷。胞內(nèi)菌厚壁菌低檢低序列數(shù)可能是由于破壁技術(shù)未能有效破壞微生物的細(xì)胞壁，導(dǎo)致胞內(nèi)DNA釋放不充分；對(duì)于低序列數(shù)無(wú)法明確判斷的胞內(nèi)菌和厚壁菌，須綜合分析。低序數(shù)綜合判斷tNGS報(bào)告內(nèi)容全面涵蓋患者、送檢及樣本信息，tNGS技術(shù)細(xì)節(jié)，測(cè)序平臺(tái)與策略，檢測(cè)范圍，病原體檢出與解釋，以及質(zhì)量控制措施，確保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。報(bào)告基本內(nèi)容詳解報(bào)告常用術(shù)語(yǔ)解釋檢出序列數(shù)反映病原體擴(kuò)增信號(hào)強(qiáng)度，引物是PCR關(guān)鍵，庫(kù)是高通量測(cè)序準(zhǔn)備樣本，質(zhì)控確保數(shù)據(jù)質(zhì)量，陰性對(duì)照排污染，內(nèi)參監(jiān)控實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性。包含患者、送檢機(jī)構(gòu)信息，檢測(cè)方法、范圍、結(jié)果，質(zhì)控措施，專業(yè)格式，結(jié)論、建議及參考文獻(xiàn)，確保報(bào)告完整性與準(zhǔn)確性。陰性結(jié)果綜合判斷陰性結(jié)果綜合判斷質(zhì)控品與結(jié)果判定質(zhì)控品陰性質(zhì)控陰性有效排除污染，陽(yáng)性質(zhì)控正確檢出病原體，綜合臨床特征和其他檢測(cè)指標(biāo)判定結(jié)果，確保tNGS檢測(cè)準(zhǔn)確性。測(cè)序后質(zhì)控流程病原微生物檢出標(biāo)準(zhǔn)測(cè)序完成后，全面質(zhì)控樣本、實(shí)驗(yàn)流程、文庫(kù)、數(shù)據(jù)及污染，合格后分析；查看結(jié)果文件，質(zhì)控后比對(duì)數(shù)據(jù)庫(kù)，注釋檢出物種。理論上SDSMRN高于閾值視為檢出，但需結(jié)合微生物特點(diǎn)及患者臨床實(shí)際；細(xì)菌分革蘭陽(yáng)性/陰性，病毒分DNA/RNA，綜合判斷。123胞內(nèi)菌/厚壁菌低序列數(shù)可能因破壁技術(shù)不足，DNA釋放少；需結(jié)合臨床癥狀、影像學(xué)、培養(yǎng)等其他檢測(cè)綜合分析，以準(zhǔn)確診斷。陰性結(jié)果綜合判斷低序列數(shù)綜合判斷tNGS陰性結(jié)果需結(jié)合整體檢出情況判斷，不能作為唯一排除感染標(biāo)準(zhǔn)，因靶標(biāo)有限，可能存在非靶標(biāo)感染，受多種因素影響。陰性結(jié)果綜合判斷tNGS陰性結(jié)果需結(jié)合臨床和其他實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法綜合判斷，因可能受病原體類型、采樣時(shí)間等因素影響，不能單獨(dú)作為排除依據(jù)。陰性結(jié)果綜合考量陰性結(jié)果綜合判斷01耐藥基因驗(yàn)證必要tNGS鑒定耐藥/毒力基因時(shí)，需明確基因型與表型不一，結(jié)合實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果驗(yàn)證，特別是高一致性病原體如結(jié)核分枝桿菌。02耐藥基因輔助治療tNGS可鑒定病原體及耐藥/毒力基因，但結(jié)果需結(jié)合實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)和臨床判斷，因表達(dá)受多種因素影響，最終耐藥性評(píng)估需綜合考量。耐藥基因鑒定與驗(yàn)證tNGS能夠精準(zhǔn)識(shí)別多種病原體，包括細(xì)菌、病毒、真菌及寄生蟲等，適用于復(fù)雜或混合感染的情況。精準(zhǔn)識(shí)別病原體檢測(cè)耐藥基因研究耐藥機(jī)制tNGS能夠檢測(cè)病原體的耐藥基因，對(duì)于與表型一致性較高的病原體如結(jié)核分枝桿菌，能夠及時(shí)提供用藥指導(dǎo)。對(duì)于基因型與表型之間的關(guān)系尚未完全明確的病原體，耐藥基因的檢測(cè)與臨床表現(xiàn)可能存在不一致情況。耐藥基因鑒定與驗(yàn)證通過(guò)整合多個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)并深入研究耐藥機(jī)制，通過(guò)對(duì)耐藥基因相關(guān)耐藥性狀進(jìn)行分級(jí)，生成更直觀的耐藥檢測(cè)結(jié)果。分級(jí)耐藥性狀技術(shù)實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)讀長(zhǎng)測(cè)序，提升拼接準(zhǔn)確性，用于病原體識(shí)別與追蹤，助力研究傳播路徑、基因型變異及地域性流行病。靶向長(zhǎng)讀長(zhǎng)測(cè)序通過(guò)特異性捕獲技術(shù)，對(duì)臨床標(biāo)本中微生物的核酸進(jìn)行靶向富集，從而獲得更多的檢測(cè)數(shù)據(jù)信息。富集檢測(cè)數(shù)據(jù)耐藥基因鑒定與驗(yàn)證高效檢測(cè)應(yīng)用以其便攜高效、長(zhǎng)讀長(zhǎng)等特性，能夠在微生物的種類鑒定及發(fā)現(xiàn)新型（未知）耐藥突變方面發(fā)揮關(guān)鍵作用。01控制檢測(cè)成本長(zhǎng)讀長(zhǎng)測(cè)序在敏感度和特異度上有優(yōu)勢(shì)，但目前其成本較高，尤其是在大規(guī)模流行病學(xué)調(diào)查和常規(guī)臨床應(yīng)用中。0206總結(jié)與展望PARTtNGS技術(shù)潛力與進(jìn)展tNGS精準(zhǔn)識(shí)別病原體tNGS能夠精準(zhǔn)識(shí)別多種病原體，包括細(xì)菌、病毒、真菌及寄生蟲等，適用于復(fù)雜或混合感染的情況。檢測(cè)耐藥基因助精準(zhǔn)tNGS能夠檢測(cè)病原體的耐藥基因，對(duì)于與表型一致性較高的