DB1310∕T 272-2022 蛋禽H7亞型禽流感免疫抗體卵黃檢測(cè)技術(shù)規(guī)程

ICS11.220CCSB411310IDB1310/T272—2022本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由廊坊市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出。本文件起草單位：三河市金源禽業(yè)有限公司、三河市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局。本文件主要起草人：劉佳、張海燕、張凌鳳、陳雪梅、李玉瑩、張軍英、馬振剛、司文輝、王萃、于明輝。DB1310/T272—20221蛋禽H7亞型禽流感免疫抗體卵黃檢測(cè)技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了蛋禽H7亞型禽流感免疫抗體卵黃檢測(cè)技術(shù)中的術(shù)語(yǔ)和定義、樣本抽取、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備、實(shí)驗(yàn)方法、結(jié)果判定和免疫抗體合格判定等內(nèi)容。本文件適用于廊坊市轄區(qū)內(nèi)采用卵黃進(jìn)行蛋禽（雞、鴨、鵝）H7亞型禽流感滅活疫苗免疫抗體檢測(cè)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T18936高致病性禽流感診斷技術(shù)GB/T30642食品抽樣檢驗(yàn)通用導(dǎo)則DB13/T946-2008蛋禽H5亞型禽流感免疫抗體卵黃檢測(cè)技術(shù)規(guī)程3術(shù)語(yǔ)和定義DB13/T946—2008界定的術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。4樣本抽取人員要求抽樣人員不少于2人，并經(jīng)過(guò)專業(yè)培訓(xùn)，掌握抽樣程序和技術(shù)要求。抽樣時(shí)需穿工作服、一次性鞋套、口罩、手套，做好人員防護(hù)。樣本要求抽取的禽蛋要具有代表性，以一棟禽舍或同一批次禽群為抽樣單元，隨機(jī)抽取蛋禽免疫接種H5+H7亞型禽流感滅活疫苗21d后所產(chǎn)的新鮮禽蛋。抽樣方式4.3.1籠養(yǎng)蛋禽禽舍的首端、中端、尾端，雞籠的每一層多點(diǎn)抽樣。4.3.2非籠養(yǎng)蛋禽和蛋庫(kù)抽樣按照GB/T30642規(guī)定的程序和方法執(zhí)行，確保抽樣的公正性、真實(shí)性。2將抽取的樣品放置蛋托內(nèi)避免樣品破損，應(yīng)貯藏在陰涼、干燥、通風(fēng)、良好的場(chǎng)所。不得與有毒、滴頭、微量振蕩器、低速離心機(jī)、液體快速混合器、1.5ml離心管、30ml容量瓶、60ml容量瓶。0.9%生理鹽水、SPF雞紅細(xì)胞混懸劑(1%)、禽流感病毒H7亞型HI抗原、禽流感病毒H7亞型陽(yáng)在樣品管中加入0.5ml生理鹽水(0.9%),再吸取0.5ml卵黃做1:1稀釋，混勻制成卵黃檢樣備用。min,3000r/min離心5min,取上清液備用。操作方法按GB/T18936執(zhí)行。用536.2.2卵黃氯仿萃取測(cè)定法6.2.2.1適用范圍在卵黃直接稀釋測(cè)定法檢測(cè)出現(xiàn)跳管或測(cè)不出抗體時(shí)，采用卵黃氯仿萃取法檢測(cè)。操作方法按GB/T18936執(zhí)行。用5.2.2中制備的檢樣代替血清進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)時(shí)設(shè)標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清和陰性血清對(duì)照。7結(jié)果判定7.1試驗(yàn)結(jié)果成立條件只有陰性對(duì)照孔血清滴度不大于22,陽(yáng)性對(duì)照孔血清誤差不超過(guò)1個(gè)滴度，試驗(yàn)結(jié)果才有效。7.2HI滴度的計(jì)算方法以完全抑制4個(gè)HAU抗原的樣本最高稀釋倍數(shù)作為HI滴度。樣本制備過(guò)程中卵黃的稀釋倍數(shù)和加入氯仿量都計(jì)入該樣本的稀釋倍數(shù)。7.3判定方法7.3.1卵黃直接稀釋測(cè)定法結(jié)果判定將“檢樣制備”過(guò)程中樣本的稀釋倍數(shù)計(jì)入終點(diǎn)滴度判定，即：微最反應(yīng)板上血凝抑制的終點(diǎn)滴度加一個(gè)滴度為該樣本的HI抗體效價(jià)，終點(diǎn)滴度為零時(shí)則不再加。舉例：微量反應(yīng)板上血凝抑制的終點(diǎn)滴度是2?,則該樣本HI抗體效價(jià)為2?。7.3.2卵黃氯仿萃取測(cè)定法結(jié)果判定將“檢樣制備”過(guò)程中樣本的稀釋倍數(shù)計(jì)入終點(diǎn)滴度判定，即：微量反應(yīng)板上血凝抑制的終點(diǎn)滴度加兩個(gè)滴度為該樣本的HI抗體效價(jià)，終點(diǎn)滴度為零時(shí)則不再加。舉例：微量反應(yīng)板上血凝抑制的終點(diǎn)滴度是2?,則該樣本HI