標(biāo)準(zhǔn)解讀

《DB32/T 3681-2019 小麥產(chǎn)毒鐮刀菌種群分子分型技術(shù)規(guī)范》是一項針對小麥中產(chǎn)毒鐮刀菌進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定與分類的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)。該標(biāo)準(zhǔn)主要適用于從事小麥病害研究、植物保護(hù)以及食品安全檢測等領(lǐng)域的專業(yè)人員。其核心內(nèi)容涵蓋了從樣品采集到最終分析結(jié)果報告的全過程指導(dǎo)，具體包括以下幾個方面：

首先，在樣品處理上，標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)規(guī)定了如何正確采集和保存疑似含有產(chǎn)毒鐮刀菌的小麥樣本，確保后續(xù)實驗?zāi)軌蚧跍?zhǔn)確無誤的基礎(chǔ)材料展開。

其次，對于DNA提取，明確了推薦使用的方法和技術(shù)參數(shù)，旨在獲得高質(zhì)量的遺傳物質(zhì)用于下一步操作。

再者，PCR擴增是整個流程中的關(guān)鍵步驟之一，本標(biāo)準(zhǔn)不僅列舉了幾種常用的引物序列，還對反應(yīng)條件如退火溫度、循環(huán)次數(shù)等進(jìn)行了具體說明，以保證目標(biāo)片段可以被有效擴增出來。

此外，關(guān)于電泳檢測部分，描述了如何通過凝膠電泳或毛細(xì)管電泳來分離并觀察PCR產(chǎn)物，進(jìn)而根據(jù)條帶位置判斷是否存在特定類型的鐮刀菌DNA。

最后，在數(shù)據(jù)分析階段，介紹了如何利用軟件工具對測序數(shù)據(jù)進(jìn)行比對分析，從而確定所檢測到的鐮刀菌種類及其可能產(chǎn)生的毒素類型。

此標(biāo)準(zhǔn)為相關(guān)領(lǐng)域內(nèi)的研究人員提供了一套系統(tǒng)化的操作指南，有助于提高小麥產(chǎn)毒鐮刀菌監(jiān)測工作的效率與準(zhǔn)確性。


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  • 正在執(zhí)行有效
  • 2019-12-03 頒布
  • 2019-12-25 實施
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文檔簡介

ICS6502001

B16..

江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB32/T3681—2019

小麥產(chǎn)毒鐮刀菌種群分子分型技術(shù)規(guī)范

Technicalspecificationformoleculartypingoftoxin-producing

fusariumspeciesinwheat

2019-12-03發(fā)布2019-12-25實施

江蘇省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB32/T3681—2019

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院提出并歸口

。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院

:。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人邢宇俊仇劍波董飛徐劍宏史建榮吳季榮陸丹丹

:、、、、、、。

Ⅰ

DB32/T3681—2019

小麥產(chǎn)毒鐮刀菌種群分子分型技術(shù)規(guī)范

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了小麥產(chǎn)毒鐮刀菌種群以及產(chǎn)毒素化學(xué)型區(qū)分中鐮刀菌的提取擴增電泳

DNA、PCR、

檢測及結(jié)果判定方法和操作規(guī)范

。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于產(chǎn)毒鐮刀菌種群及產(chǎn)毒化學(xué)型的定性檢測

PCR。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗霉菌和酵母計數(shù)

GB4789.15

分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

GB/T6682—2008

3原理

產(chǎn)毒鐮刀菌經(jīng)過提取后利用特異性區(qū)分引物通過普通判斷該樣品是否為禾谷鐮刀

DNA,,PCR

菌或亞洲鐮刀菌根據(jù)關(guān)鍵特異基因來區(qū)分該樣品是否產(chǎn)生乙酰脫氧雪腐鐮刀菌烯醇

。Tri113

乙酰脫氧雪腐鐮刀菌烯醇或者雪腐鐮刀菌烯醇化學(xué)型

(3ADON)、15(15ADON)(NIV)。

4試劑和材料

41水應(yīng)符合中一級水的規(guī)定

.:GB/T6682—2008。

42培養(yǎng)基符合的規(guī)定

.PDA:GB4789.15。

43緩沖液

.CTAB:55mmol/LCTAB、1400mmol/LNaCl、20mmol/LEDTA、100mmol/LTris-

高壓滅菌儲存于冷暗處備用

HCl(pH8),121℃20min,2℃~8℃。

44緩沖液

.TE。

45酶溶液

.RNA(5μg/μL)。

46蛋白酶

.K(20mg/mL)。

47飽和酚

.Tri。

48酚三氯甲烷異丙醇三者比例為三氯甲烷異戊醇兩者比例為

.、、25∶24∶1;、24∶1。

49異丙醇

.。

410區(qū)分亞洲鐮刀菌和禾谷鐮刀菌引物

.

Fg16F:5'-CTCCGGATATGTTGCGTCAA-3'

Fg16R:5'-GGTAGGTATCCGACATGGCAA-3'

預(yù)期亞洲鐮刀菌擴增片段大小為預(yù)期禾谷鐮刀菌擴增片段大小為

497bp,410bp。

411區(qū)分和化學(xué)型引物

.3ADON、5ADONNIV

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