TCACM1326.23-2019牛耳楓種子超低溫保存技術(shù)規(guī)程

ICSC T/CACM1326.23—TechnicalcodeofpracticeforcryopreservationofDaphniphyllumcalycinumBenth. 中華中醫(yī)藥學(xué)會T/CACMT/CACM1326.23—目前 活 附錄A（規(guī)范性附錄）試劑的配制和保存方 前——T/CACM1326.1——T/CACM1326.2——T/CACM1326.3——T/CACM1326.4——T/CACM1326.5——T/CACM1326.6——T/CACM1326.7——T/CACM1326.8——T/CACM1326.9——T/CACM1326.10GB/T1.1－2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫》給出的規(guī)則起草。T/CACMT/CACM1326.23—GB/T3543.6GB/T3543.7牛耳楓Daphniphyllumcalycinum牛耳楓果實DaphniphyllumcalycinumBenth牛耳楓種子DaphniphyllumcalycinumBenthseedof℃8～114（30d）牛耳楓種子活力以種子生活力為判別標(biāo)準(zhǔn)。按照GB/T3543.7中的2，3，5-三苯基氯化四氮唑(TTC)法檢測種子生活力。隨機抽取30粒種子，剝?nèi)ネ鈱臃N皮，沿種脊小心將種子分成2爿后放培養(yǎng)皿內(nèi)，內(nèi)側(cè)面向下，滴入TTC溶液浸沒種子，室溫(25℃)避光放置4h后觀察染色結(jié)果。TTCAA.1A.2≥90??

×100%?????????????????（1）用尼龍網(wǎng)袋包裹牛耳楓種子，置于盛有變色硅膠的干燥器內(nèi)，硅膠與種子的體積比為50：1，室20h～26h45％～50至13％～17％。

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×100%……….400牛耳楓種子超低溫保存的冷凍方式為玻璃化冷凍法，即將裝有種子的5mL（每管50種子）置于裝載液（LS）中并于25℃處理種子20min，再用玻璃化保護溶液（PVS2）冰浴處理種子30min，換上預(yù)冷新鮮的PVS2后迅速投入液氮中進行超低溫保存。LSPVS2AA.3A.4液氮中至少凍存24h后，取出1個凍存管，立即放入405min洗滌液（DS）15min3DSAA.5255.1子生活力≥75％時視為保存成功。將剩下25粒解凍后的牛耳楓種子，50℃溫水浸種24h后，播種到帶有無菌濾紙的帶蓋發(fā)芽盒中，溫度25℃～30℃，濕度70％～85％條件下培養(yǎng)。牛耳楓種子出芽周期大概35d。附錄TTC1.00g100mL1TTCpH6.5～7.54溶液I：9.08g磷酸二氫鉀溶于1L無菌水中。II：35.81g1LI﹕II2﹕313.7g11.9mLMSpH5.8100mL，高溫高壓滅菌，4℃冷藏。23.8mL13.6mL13.6mL13.7gMS中，調(diào)pH至5.8后，定容至100mL，高溫高壓滅菌，4℃冷藏。41.1gMSpH5.8100mL，高溫高壓滅菌，445(1)M].MingTien-lu,KlausKubitzki.Daphniphyllaceae[M]//FloraOfChinaBeijing:SciencePress/St.Louis:MissouriBotanicalGardenPress.2008.11: