10-凝血分析儀校準規(guī)范（報批稿）

1、江蘇省地方計量技術(shù)規(guī)范JJF （蘇）20凝血分析儀校準規(guī)范Calibration Specification for Blood Coagulation Analyzer 20 X X-XX-XX發(fā)布 20 X X-XX-XX實施江蘇省市場監(jiān)督管理局發(fā)布JJF 凝血分析儀校準規(guī)范Calibration Specification for Blood Coagulation Analyzer JJF（蘇）XX-20XX 本規(guī)范經(jīng)江蘇省市場監(jiān)督管理局于20xx年xx月xx日批準，并自20xx年xx月xx日起施行。歸 口 單 位：江蘇省醫(yī)學計量專業(yè)技術(shù)委員會主要起草單位：江蘇省計量科學研究院參加起草

2、單位：鎮(zhèn)江市計量檢定測試中心泰康仙林鼓樓醫(yī)院南京醫(yī)科大學附屬逸夫醫(yī)院南京市第二醫(yī)院本規(guī)范委托江蘇省醫(yī)學計量專業(yè)技術(shù)委員會負責解釋本規(guī)范主要起草人：崔宏恩（江蘇省計量科學研究院）張 超（江蘇省計量科學研究院）李朝暉（鎮(zhèn)江市計量檢定測試中心）劉 宏（泰康仙林鼓樓醫(yī)院）本規(guī)范參與起草人：潘強龍（南京醫(yī)科大學附屬逸夫醫(yī)院）劉 娟（南京市第二醫(yī)院）顧加雨（江蘇省計量科學研究院）目 錄引言 （）1 范圍 （1）2 引用文件 （1）3 術(shù)語與計量單位（1）3.1 樣本（1）3.2 反應(yīng)體系（1）3.3 半自動（1）3.4 全自動（1）3.5 通道（2）3.6 凝固法（2）3.7 發(fā)色底物法（2）3.8 免疫

3、比濁法（2）4 概述 （2）5 計量特性 （3）6 校準條件 （3）6.1 環(huán)境條件 （3）6.2 校準設(shè)備和試劑 （3）7 校準項目和校準方法（4）7.1 溫度控制 （4）7.2 通道差（適用于半自動凝血分析儀） （5）7.3 攜帶污染率（適用于全自動凝血分析儀）（5）7.4 測量重復(fù)性（5）7.5 FIB示值誤差（6）7.6 FIB線性相關(guān)性（6）8 校準結(jié)果表達 （7）8.1 校準結(jié)果處理（7）8.2 校準結(jié)果的測量不確定度（7）9 復(fù)校時間間隔（7）附錄A校準原始記錄（參考）格式（8）附錄B校準證書結(jié)果頁（參考）格式（10）附錄C溫度和FIB測量結(jié)果的不確定度評定示例（11）引 言本規(guī)

4、范依據(jù)JJF 1001-2011通用計量術(shù)語及定義和JJF 1071-2010國家計量校準規(guī)范編寫規(guī)則的要求編寫。校準方法及計量特性等主要參考了醫(yī)療行業(yè)標準YY/T 0659-2017凝血分析儀。本規(guī)范依據(jù)JJF 1059.1-2012測量不確定度評定與表示給出了相對示值誤差的校準結(jié)果測量不確定度及評定示例。本規(guī)范為首次發(fā)布。III凝血分析儀校準規(guī)范1 范圍本規(guī)范適用于臨床上用于對患者的血液進行凝血和抗凝、纖溶和抗纖溶功能分析的凝血分析儀。本規(guī)范不適用于血小板聚集功能和血流變功能檢測、即時檢測（POCT）的儀器。2 引用文件本規(guī)范引用下列文件：JJF 1001-2011 通用計量術(shù)語及定義JJ

5、F 1071-2010 國家計量校準規(guī)范編寫規(guī)則JJF 1101-2003 環(huán)境試驗設(shè)備溫度、濕度校準規(guī)范YY/T 0659-2017 凝血分析儀CLSI H30-A2 測定血漿中纖維蛋白原的方法。批準的指南第二版（Procedure for the determination of fibrinogen in plasma. Approved guideline-second edition）注：凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本規(guī)范；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本規(guī)范。3 術(shù)語與計量單位JJF 1001-2011、YY/T 0659-2017和CL

6、SI H30-A2中界定的及以下術(shù)語和定義適用于本規(guī)范。3.1 樣本 sample可用于檢測系統(tǒng)測定的待測液體，主要包括校準品、質(zhì)控品、新鮮血漿或全血等。3.2 反應(yīng)體系 reaction system包括樣本和所加入試劑所組成的液相系統(tǒng)，可獲得測定結(jié)果相關(guān)參數(shù)。3.3 半自動 semi-automated儀器或測試系統(tǒng)的某些分析步驟實現(xiàn)了自動化，其他步驟仍需操作者參與。3.4 全自動 full-automated儀器或測試系統(tǒng)的所有分析步驟都實現(xiàn)了自動化，包括樣本和試劑添加、樣本/試劑互相反應(yīng)、化學/生物學分析、結(jié)果計算和結(jié)果讀出。3.5 通道 channel在一個測量周期內(nèi),能檢測反應(yīng)體系

7、并獲得檢測結(jié)果的通路。3.6 凝固法 coagulation method模擬生理血液凝固條件，加入某種試劑，啟動血液凝集反應(yīng)，使樣本中的纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為交聯(lián)纖維蛋白，使樣本發(fā)生凝固。通過連續(xù)監(jiān)測此過程中反應(yīng)體系所發(fā)生的光學（例如吸光度）、物理學（例如黏度）或電學（例如電流）特性變化確定反應(yīng)終點，并作為纖維蛋白原的轉(zhuǎn)化時間，利用這種原理測定血液樣本凝固特性或纖溶特性的方法。3.7 發(fā)色底物法chromgenic substrate assay以人工合成具有某種裂解位點的化合物（如苯丙氨酸-纈氨酸-精氨酰胺，Phe-Val-Arg）與產(chǎn)色物質(zhì)結(jié)合（如對硝基苯胺PNA）連接形成酶的特異性底物，由于

8、待測樣本中存在或反應(yīng)過程中產(chǎn)生了有活性的酶，底物被水解并釋放產(chǎn)色物質(zhì)，使反應(yīng)體系發(fā)生顏色變化，通過比色的方法檢測其顏色變化程度，并與酶活性或待測物含量成一定的比例關(guān)系。3.8 免疫比濁法immuno-nephelometry利用抗原與抗體之間特異性結(jié)合的特點，使待測物與標記有其特異性抗體的微粒結(jié)合，使得反應(yīng)體系的濁度發(fā)生變化，通過檢測其光強度的變化定量待測物的方法。4 概述凝血分析儀（以下簡稱儀器）是用于凝血、抗凝、纖維蛋白原溶解系統(tǒng)檢測的一類儀器，儀器的檢測項目至少應(yīng)該包括血漿凝血酶原時間（PT）、活化部分凝血活酶時間（APTT）、纖維蛋白原（FIB）、凝血酶時間（TT）測定，可為出血性和血

9、栓性疾病的診斷及鑒別診斷、抗凝及溶栓治療的監(jiān)測及療效觀察提供有價值的指標。儀器依據(jù)測試方法分為凝固法、發(fā)色底物法和免疫比濁法，按照不同的自動化程度分為半自動凝血分析儀和全自動凝血分析儀，半自動凝血分析儀根據(jù)可同時檢測樣本的數(shù)量分為單通道和多通道。半自動凝血分析儀一般由檢測單元、控制單元、數(shù)據(jù)處理、顯示與打印單元等組成。全自動凝血分析儀一般由自動進樣單元、檢測單元、控制單元、數(shù)據(jù)處理、顯示與打印單元等組成。5 計量特性凝血分析儀各項計量性能指標見表1。表1 凝血分析儀的主要計量性能指標計量性能計量性能指標溫度控制溫育部和溫育位恒溫裝置部（37.0）溫度示值誤差1.0試劑冷卻位溫度20通道差（半自

10、動凝血分析儀）10FIB攜帶污染率（全自動凝血分析儀）10測量重復(fù)性半自動凝血分析儀PT正常樣本(樣本要求:11s14s)5.0%異常樣本10.0%APTT正常樣本(樣本要求:25s37s)5.0%異常樣本10.0%FIB正常樣本(樣本要求:2g/L4 g/L)10.0%異常樣本20.0%TT正常樣本(樣本要求:12s16s)15.0%異常樣本20.0%全自動凝血分析儀PT正常樣本(樣本要求:11s14s)3.0%異常樣本8.0%APTT正常樣本(樣本要求:25s37s)4.0%異常樣本8.0%FIB正常樣本(樣本要求:2g/L4 g/L)8.0%異常樣本15.0%TT正常樣本(樣本要求:12

11、s16s)10.0%異常樣本15.0%FIB示值誤差10.0%FIB線性相關(guān)性r0.980注：以上技術(shù)指標不用于合格性判別，僅供參考。6 校準條件6.1 環(huán)境條件6.1.1 環(huán)境溫度：1825；6.1.2 相對濕度：80%；6.2 校準設(shè)備和試劑6.2.1 溫度測試儀，測量端可經(jīng)任意彎曲折疊放入半封閉儀器內(nèi)部溫場，測量范圍：（050），最大允許誤差：0.1。6.2.2 血漿纖維蛋白原標準物質(zhì)，相對擴展不確定度一般應(yīng)不大于5%（k=2），或根據(jù)用戶及儀器的技術(shù)要求選擇國際參考物質(zhì)。6.2.3 校準過程中需要的儀器配套診斷試劑和臨床質(zhì)控血漿樣本。試劑應(yīng)按照說明書要求的條件儲存并在有效期內(nèi)。7 校準

12、項目和校準方法7.1 溫度控制7.1.1 溫育部和溫育位恒溫裝置部溫度示值誤差開機后按照廠家要求進行預(yù)熱，將溫度測試儀的測量端通過彎曲折疊后放入儀器溫育部和溫育位恒溫裝置部中心點，待儀器顯示溫度達到設(shè)定溫度37穩(wěn)定后，每2min記錄測試點的溫度一次，在30min內(nèi)共測試15次，根據(jù)公式（1）計算溫育部和溫育位恒溫裝置部溫度示值誤差： （1）式中：溫育部和溫育位恒溫裝置部溫度示值誤差，； 儀器顯示溫度設(shè)定值，； 中心點溫度15次測量的平均值，。7.1.2 試劑冷卻位溫度（適用于全自動凝血分析儀）儀器開機預(yù)熱后，將溫度測試儀的測量端放入儀器試劑冷卻位，待儀器顯示溫度達到設(shè)定溫度穩(wěn)定后，每2min記

13、錄測試點的溫度一次，在30min內(nèi)共測試15次，根據(jù)公式（2）計算15次溫度測量平均值表征試劑冷卻位溫度： （2）式中：試劑冷卻位溫度15次測量的平均值，；溫度測試儀單次測量的溫度值，。7.2 通道差（適用于半自動凝血分析儀）正常條件下，在至少3個以上通道中連續(xù)測定同一正常標本PT、APTT、TT、FIB各三次。分別計算各通道測定值的算術(shù)平均值（）及所有通道測定值的總算術(shù)平均值（），然后按式（3）計算通道差（R）。 （3） 式中：通道差；各通道測定值的算術(shù)平均值中最大值；各通道測定值的算術(shù)平均值中最小值；所有通道測定值的總算術(shù)平均值。7.3 FIB攜帶污染率（適用于全自動凝血分析儀）取一份高濃

14、度的臨床質(zhì)控樣本，混合均勻后連續(xù)測定3次，再取一份低濃度的臨床質(zhì)控樣本，混合均勻后連續(xù)測定3次，按式（4）計算攜帶污染率。 （4）式中：攜帶污染率，%；低值臨床質(zhì)控樣本第1次測定值，g/L；低值臨床質(zhì)控樣本第3次測定值，g/L； 高值臨床質(zhì)控樣本第3次測定值，g/L；注：高濃度樣本測定值應(yīng)大于低濃度樣本測定值的2倍。7.4 測量重復(fù)性采用凝血分析儀配套的試劑、校準品及相應(yīng)的測定程序，對計量特性中規(guī)定的項目和樣本，每個項目重復(fù)測定至少6次，并根據(jù)公式（5）計算相對標準偏差RSD作為重復(fù)性的表征。 （5）式中：RSD 相對標準偏差； 第次的測量值； 測定平均值；n 測定次數(shù)，n6。7.5 FIB示

15、值誤差用儀器測定血漿纖維蛋白原標準物質(zhì)或參考物質(zhì)，重復(fù)測量3次，計算3次測量結(jié)果的平均值。根據(jù)公式（6）計算FIB示值誤差： （6）式中：示值誤差，%；標準物質(zhì)或參考物質(zhì)3次測量結(jié)果的平均值，g/L；標準物質(zhì)的標準值或參考物質(zhì)的參考值，g/L。7.6 FIB線性相關(guān)性將FIB高濃度樣本至少稀釋為5個濃度（涵蓋測試范圍的上、下限和中間值），再將各濃度的樣本上機測定，每份樣本測定3次，取其平均值。將測量結(jié)果的平均值與樣本的標準值進行線性回歸，按公式（7）計算線性相關(guān)系數(shù)r作為線性相關(guān)性的表征。 （7）式中：r 線性相關(guān)系數(shù)； 各個濃度水平樣本的標準值，g/L； 各個濃度水平樣本的平均值，g/L；各

16、個濃度水平樣本的測量值，g/L；各個濃度水平樣本的測量值平均值，g/L。8 校準結(jié)果表達8.1 校準結(jié)果處理經(jīng)校準后的凝血分析儀應(yīng)填發(fā)校準證書，校準證書應(yīng)符合JJF 10712010中5.12的要求，并給出各校準項目名稱和測量結(jié)果以及擴展不確定度。校準原始記錄參考格式見附錄A，校準證書結(jié)果頁參考格式見附錄B。8.2 校準結(jié)果的測量不確定度凝血分析儀校準結(jié)果的不確定度按JJF 1059.12012的要求評定，溫度和FIB示值誤差的不確定度評定示例見附錄C。9 復(fù)校時間間隔由于復(fù)校時間間隔的長短是由儀器的使用情況、使用者、儀器本身質(zhì)量等諸因素所決定的，因此，送校單位可根據(jù)實際使用情況自主決定復(fù)校時

17、間間隔，建議不超過1年。附錄A校準原始記錄（參考）格式儀器名稱型號制造廠商出廠編號委托單位名稱聯(lián)系人地址電話溫度濕度記錄編號試劑批號校準員核驗員一、 溫度控制時間/min24681012141618202224262830控制溫育部和溫育位恒溫裝置部測量值/設(shè)定值/溫度示值誤差/試劑冷卻位溫度測量值/平均值/二、 通道差（適用于半自動凝血分析儀）項目RPT（s）APTT（s）FIB（g/L）TT（s）三、 FIB攜帶污染率（適用于全自動凝血分析儀）項目低值高值FIB攜帶污染率FIB（g/L）四、 測量重復(fù)性項目樣本類型測定值RSDPT(s)APTT(s)FIB(g/L)TT(s)五、 FIB示

18、值誤差項目標準值測量值平均值示值誤差FIB（g/L）六、 FIB線性相關(guān)性樣本測定值平均值標準值線性相關(guān)系數(shù)12345校準證書結(jié)果頁（參考）格式溫度控制溫育部和溫育位恒溫裝置部（37.0）溫度示值誤差試劑冷卻位溫度通道差（半自動凝血分析儀）FIB攜帶污染率（全自動凝血分析儀）測量重復(fù)性半自動凝血分析儀PT正常樣本異常樣本APTT正常樣本異常樣本FIB正常樣本異常樣本TT正常樣本異常樣本全自動凝血分析儀PT正常樣本異常樣本APTT正常樣本異常樣本FIB正常樣本異常樣本TT正常樣本異常樣本FIB示值誤差FIB線性相關(guān)性溫度測量結(jié)果的擴展不確定度：FIB測量結(jié)果的擴展不確定度：校準員： 核驗員： 附

19、錄B附錄C溫度和FIB測量結(jié)果的不確定度評定示例C.1 溫度測量結(jié)果不確定度評定C.1.1 測量方法開機后按照廠家要求進行預(yù)熱，將溫度測試儀的測量端通過彎曲折疊后放入儀器溫育部和溫育位恒溫裝置部中心點，待儀器顯示溫度達到設(shè)定溫度37穩(wěn)定后，每2min記錄測試點的溫度一次，在30min內(nèi)共測試15次。C.1.2 測量模型示值誤差可由公式（C.1.1）給出： （C.1.1）式中：溫育部和溫育位恒溫裝置部溫度示值誤差，； 儀器顯示溫度設(shè)定值，； 中心點15次測量的平均值，。C.1.3 方差和靈敏系數(shù)依據(jù)，有，則由公式(C.1.1)得：，由于與完全不相關(guān)，故輸出量估計方差的完整表達式應(yīng)為： （C. 1

20、.2） 由公式（C.1.2）得： （C.1.3） C.1.4 不確定度來源不確定度來源包括：a）測量重復(fù)性引入的標準不確定度；b）分辨力引入的標準不確定度；c）溫度測試儀引入的標準不確定度；C.1.5 標準不確定度分量計算C.1.5.1 測量重復(fù)性引入的標準不確定度分量選定一臺全自動凝血分析儀，使用溫度測試儀對溫育部和溫育位恒溫裝置部連續(xù)測量10次，得到一組測量值：36.8，36.9，37.2，37.4，37.3，37.1，37.3，37.1，36.9，37.0。則單次測量結(jié)果的標準差：實際校準時在重復(fù)性條件下連續(xù)測量15次，以15次測量的算術(shù)平均值作為結(jié)果，則由測量重復(fù)性引入的標準不確定度分

21、量為：C.1.5.2分辨力引入的標準不確定度分量儀器的最小分辨力為0.1，區(qū)間半寬a=0.05，按均勻分布，包含因子取k=，由此引起的標準不確定度為：從以上計算可以看出，由于重復(fù)測量引入的標準不確定度分量大于分辨力引入的標準不確定度分量，由JJF 1033-2016計量標準考核規(guī)范可知，當重復(fù)性引入的標準不確定度分量大于分辨力引入的標準不確定度分量時，可不考慮分辨力引入的不確定度分量，故分辨力引入的不確定度分量在標準不確定度合成時不列入。C.1.5.3 溫度測試儀引入的標準不確定度分量由溫度測試儀引入的不確定度分量可以根據(jù)其最大允許誤差假設(shè)服從均勻分布，k=，根據(jù)公式（C.1.4）計算： （C

22、.1.4）溫度測試儀的最大允許誤差為0.1，則由溫度測試儀引入的標準不確定度分量： C.1.6 標準不確定度一覽表標準不確定度一覽表見表C.1.1。表C.1.1全自動凝血分析儀溫度測定結(jié)果標準不確定度一覽表不確定度來源標準不確定度分量測量重復(fù)性0.052溫度測試儀0.058C.1.7 合成標準不確定度由公式（C.1.3）可得：C.1.8 擴展不確定度取k=2，則：C.2 FIB測量結(jié)果不確定度評定C.2.1 測量方法采用凝血分析儀測定血漿纖維蛋白原參考物質(zhì)，重復(fù)測量3次，計算3次測量結(jié)果的平均值，并與參考物質(zhì)參考值進行比較。C.2.2 測量模型相對示值誤差可由公式（C.2.1）給出： （C.2.1）式中：示值誤差，g/L；參考物質(zhì)3次測量結(jié)果的平均值，g/L；參考物質(zhì)的參考值，g/L。C.2.3 方差和靈敏系數(shù)依據(jù)，有，則由公式（C.2.1）得：，由于與完全不相關(guān)，故輸出量估計方差的完整表達式應(yīng)為： （C.2.2）由公式（C.2.2）得： （C.2.3）C.2.4 不確定度來源不確定度來源包括：a）凝血分析儀測量重復(fù)性引入的標準不確定度；b）分辨