富血小板血漿的臨床應用課件

1、富血小板血漿的臨床應用,唐 都 醫(yī) 院 穆 士 杰,1,學習交流PPT,目 錄,2,學習交流PPT,概 念,富血小板血漿,富血小板血漿凝膠, Platelet-rich plasma,PRP, Platelet-rich plasma gel,PRG,全血通過梯度離心分層后得到的富含血小板的血漿部分，它含有多種較豐富的生物活性因子。,PRP被凝血酶等激活物激活后形成的膠凍狀物，它具有完整的三維結構和良好的組織相容性的纖維蛋白支架。,3,學習交流PPT,PRP發(fā)展歷史,Harkedeng 首次分離制備出PRP，將其用于 心外科手術后患者，取得良好的療效。,Okuda等發(fā)現(xiàn)血漿中提取的富血小板血漿

2、含 多種生長因子。,Hood等在PRP中加入凝血酶和鈣離子，提出了 PG概念，將其所形成的凝膠狀物質用于組織修復。,Whitman率先將自體PRP用于口腔頜面外科 手術修補骨組織。,4,學習交流PPT,PRP制備方法,原理 根據(jù)血液成分在離心過程中的沉降速率不同來提取。 制備方法 無統(tǒng)一標準，都需兩次離心。 全自動制備法、手工制備法。,影 響 PRP 血小板,抗凝劑 離心力 離心時間 離心次數(shù) 凝膠激活劑,5,學習交流PPT,PRP制備方法,全自動法（血漿分離置換法） 利用血成分分離耗材分離制備得到血小板血漿。 特點 自動化程度高、血小板純度濃度高,6,學習交流PPT,PRP制備方法,手工制備

3、法 都為兩步法，但離心力、離心時間略有不同。 一般認為 初次200g離心10min,二次1200g離心10min,制備PRP中血小板計數(shù)約為全血6.17倍，效果較好。 （血液離心后分3層：由下至上-紅細胞層、血小板濃縮物層、貧血小板血漿層） 用中間層再次分離。,7,學習交流PPT,PRP成分特點,PRP,纖維蛋白,白細胞,高濃度血小板,其它,8,學習交流PPT,PRP成分特點,血小板 成人：平均195*109/L，PRP約為全血3-17倍。 血小板結構圖 作用 生理性止血-通過黏附反應作用起到初期止血功能。 組織修復-通過黏附于血管壁和插入內皮細胞之間來修復血管內皮，保持其完整性。 調控炎癥和

4、免疫反應-通過調節(jié)其表面粘附及表面受體的表達來實現(xiàn)，如介導白細胞作用。,9,學習交流PPT,PRP成分特點-血小板,凝血酶,血小板源性生長因子,轉化生長因子,胰島素樣生長因子,表皮生長因子,血管內皮細胞生長因子,成纖維細胞生長因子,血小板,10,學習交流PPT,PRP成分特點-血小板,血小板源性生長因子（PDGF） 一種促細胞分裂蛋白，第一個被發(fā)現(xiàn)存在于血小板中，是趨化作用最強的骨生長因子之一。 作用 可促進血管生成、活化巨噬細胞，刺激成纖維細胞、血管平滑肌細胞、神經(jīng)膠質細胞等中胚層細胞的增殖和活性，,11,學習交流PPT,PRP成分特點-血小板,轉化生長因子- （TGF-） 以旁分泌或自分泌

5、方式作用于成纖維細胞、骨髓干細胞、成骨前體細胞和破骨細胞。 TGF免疫染色圖 作用： 參與體內多種炎癥反應和組織修復，促進細胞外基質分泌，提高成纖維細胞增殖能力，刺激膠原蛋白1和纖維連接蛋白的生物合成以及骨基質的沉積，抑制破骨細胞形成和骨吸收發(fā)生。,12,學習交流PPT,PRP成分特點-血小板,胰島素樣生長因子（IGF） 作用： 趨化成纖維細胞，刺激蛋白質合成。 刺激骨細胞增殖、分化，促進軟骨和骨基質生成。,13,學習交流PPT,PRP成分特點-血小板,表皮生長因子（EGF） 作用： 新生血管重要的誘導因子。 可促進創(chuàng)口愈合、參與血管生成。 刺激內皮細胞有絲分裂和細胞遷移。 還可增加血管通透性

6、。,14,學習交流PPT,PRP成分特點-血小板,血管內皮細胞生長因子（VEGF） 是高度保守的同源二聚體糖蛋白。二條分子量各為24kDa的單鏈以二硫鍵組成二聚體。 作用： 能直接作用于血管內皮細胞促進血管內皮細胞增殖，增加血管通透性。 誘導內皮細胞的增生和遷移，啟動血管生成反應。,15,學習交流PPT,PRP成分特點-血小板,成纖維細胞生長因子（FGFs） 作用： 參與血管形成、損傷愈合和胚胎發(fā)育等過程，是關節(jié)軟骨細胞最具顯著效應的有絲分裂刺激原和形態(tài)原之一。,16,學習交流PPT,PRP成分特點-白細胞,白細胞：參與機體免疫和防御功能 幫助機體清除局部病原體、增強抗感染能力；幫助機體清除局

7、部壞死組織，加快組織修復。 受血小板分泌生長因子趨化，本身可分泌生長因子直接參與組織修復。,17,學習交流PPT,PRP成分特點-其它,其它成分如： 纖維連接蛋白（FN） 血小板反應蛋白（TSP） 骨連接蛋白（ON） 玻璃體連接蛋白（VN） 作用： 對傷口感染、促進組織修復及增加新生血管內膜的形成發(fā)揮重要作用。,18,學習交流PPT,PRP,優(yōu)點一,優(yōu)點二,來源豐富、取材方便、操作簡單、價格低廉,具有自源性，不會出現(xiàn)免疫排斥反應，沒有異體移植 傳播疾病風險,19,學習交流PPT,PRP,優(yōu)點三,優(yōu)點四,含高濃度多種生長因子，且比例接近正常人，具備最佳 協(xié)同效應，（避免單一因子不能良好誘導創(chuàng)面愈

8、合）,PRP凝膠具有極好粘附性，使用時可較好的黏附在創(chuàng)面 上而不流失，避免損失，保證局部較高的生長因子濃度。,20,學習交流PPT,PRP,優(yōu)點五,優(yōu)點六,因含有較多的白細胞和單核細胞，可起到防止感染作用。,避免了異體和人工合成組織的致畸危險，同時各種因子 表達良好，避免了誘導腫瘤形成的可能。,21,學習交流PPT,PRP臨床應用及研究,骨缺損修復 軟骨損傷修復 預防骨感染,急性創(chuàng)面 慢性難愈合傷口 皮膚脂肪組織液化,急性運動損傷 慢性運動損傷,頜骨相關疾病 牙周病 上頜竇手術,燒傷創(chuàng)面 脂肪移植 皮膚組織再生,骨科,運動 損傷,普外科,口腔頜 面外科,22,學習交流PPT,23,學習交流PP

9、T,實驗方法： 將患者因正畸拔出的患牙傳代培養(yǎng)，取第5代細胞作為試驗用牙周膜成纖維細胞來源； 人病牙制成1mm厚根片；2次離心法制備PRP；觀察不同濃度PRP（A組10%、B組15%、C組20%、D組30%、對照組無PRP） 對人牙周膜成纖維細胞在脫礦的病變牙根表面附著情況及膠原形成情況。,研究一,24,學習交流PPT,研究一,結論： PRP可促進牙周細胞在病變牙根表面的附著，其中20%濃度最佳。 PRP可促進牙周細胞外基質膠原的形成。,25,學習交流PPT,口腔頜面外科相關研究,Whitman用PRP聯(lián)合骨移植治療骨缺損獲得成功。 Suba等應用磷酸三鈣復合PRP治療犬牙槽骨缺損，發(fā)現(xiàn)PRP

10、可明顯促進骨再生。,Lekovic研究發(fā)現(xiàn)PRP能促進牙槽骨再生。 張麗等的研究證實PRP聯(lián)合植骨術治療牙周鄰面骨缺損效果優(yōu)于單純植骨術。,Philippart等將PRP混合物充填于上頜竇中，6個月組織學觀察顯示有活躍的骨新生活動。 Rodrignez等在上頜竇區(qū)植入PRP及種植體，移植成功率達92.9%，表明PRP可加快骨再生速度，提高骨再生質量。,頜骨相關 研究,牙周病,上頜竇 手術,26,學習交流PPT,27,學習交流PPT,研究二,方法： 選擇股骨干骨不連、骨缺損2需行骨移植治療的40例患者，隨機分為實驗組(脫蛋白牛松質骨+PRP)及對照組(脫蛋白牛松質骨)，每組20例。 術后7和1、

11、2、3、6、12個月定期攝線片檢查，參照Lane-Sandhu的線評分標準評分,并比較兩組骨痂灰度、愈合情況及愈合速度。,28,學習交流PPT,研究二,結果： 如表1（線評分標準）評分，在傷口愈合天數(shù)及傷口引流量上，實驗組明顯少于對照組。 如表2、3在術后實驗組的成骨率、成骨速率明顯高于對照組，說明PRP有較好的促進骨缺損修復的作用。,29,學習交流PPT,骨科相關研究,Marx等發(fā)現(xiàn)復合PRP的移植骨修復速度比單純用移植骨修復快1.62-2.16倍。 Bielecki等用PRP經(jīng)皮注射治療骨不連取得良好療效。,Drengk等研究顯示PRG作為細胞支架能明顯促進軟骨細胞遇見充質干細胞的增生和向

12、軟骨細胞分化。 Wu等認為PRP可以作為軟骨細胞的載體，治療關節(jié)軟骨缺損。,Bielecki的研究顯示血小板-白細胞凝膠在體外可抑制金葡、大腸桿菌生長，提示PRP可作為“生物抗菌制劑”。,骨缺損 修復,軟骨損傷 修復,預防骨 感染,30,學習交流PPT,運動醫(yī)學,31,學習交流PPT,研究三,方法： 患者11例跟腱有炎癥19處，每次制備患者自體PRP2ml行跟鍵周圍注射。 每周1次，5次為1個療程，治療期間患者停用一切藥物及其他的藥物輔助治療。 患者隨訪3一8個月，平均6個月，觀察療效。,結果： 跟腱有炎癥的地方19處，治療后痊愈5處，顯效13處，治療有效率94.74%。 結論： PRP對跟腱

13、炎療效肯定，是一種安全有效的方法。,32,學習交流PPT,運動損傷相關研究,33,學習交流PPT,運動損傷相關研究,34,學習交流PPT,普外科,35,學習交流PPT,研究四,方法： 抽取難愈合傷口患者靜脈血，與氯化鈣、凝血酶混合后制成PRP凝膠敷于患者創(chuàng)面，凡士林紗布填塞。 每7天換1次，3次一療程。 評估治療后傷口變化情況。,36,學習交流PPT,研究四,結果： 29例患者在三次使用PRP后傷口明顯縮小，大部分壞死組織清除，組織色澤紅潤血供良好，無明顯滲液和膿液。3例效果不明顯。 治療3個月：10例傷口完全愈合，形成瘢痕組織；11例創(chuàng)面覆蓋率75%，9例50%-75%，2例50%；治愈率3

14、1.2%，顯效率93.8%。 結論： PRP修復慢性難愈合傷口是一種有效、實用的治療方法。,37,學習交流PPT,普外科相關研究,Bhanot S的研究指出，PRP可加速表皮化生長，減輕創(chuàng)傷后局部腫脹和疼痛，減少術后傷口滲出。 Man D將PRP凝膠用于皮瓣移植術，發(fā)現(xiàn)血管創(chuàng)出血被凝膠封閉，提高了手術成功率。,Carter CA等用PRP修復馬小腿傷口發(fā)現(xiàn)，PRP加快上皮細胞增殖，促進傷口膠原合成以及血管再生。 郭彥杰等應用PRP創(chuàng)面內注射治療下肢慢性難愈合傷口，療效顯著。 夏江霓等對慢性潰瘍患者應用PRP凝膠治療，發(fā)現(xiàn)PRP能更好的促進傷口處肉芽組織形成。,Giorgio研究認為PRP可激發(fā)

15、細胞增殖分化和微血管的形成，增強局部組織自我修復能力，從而有利于切口愈合。 劉曉韜的研究顯示，應用PRP注入脂肪液化切口深部的患者愈合時間明顯減少，提示PRP可以減輕疼痛、術后出血，減少術后并發(fā)癥。,急性創(chuàng)面,慢性難 愈合傷口,手術切口脂肪液化,38,學習交流PPT,燒傷整形科,39,學習交流PPT,研究五,方法： 10只裸鼠隨機選擇一側背部皮下組織作為PRP組(0.5 mL人顆粒脂肪+0.1 mLPRP)受區(qū)，一側作為對照組(0.5 mL 人顆粒脂肪+0.1 mL 磷酸鹽緩沖液)受區(qū)。 于植入后10、90d處死后取出移植物進行大體形態(tài)觀察、體積測定及組織學檢測。,40,學習交流PPT,研究五

16、,結果： 術后90dPRP組移植物存留量明顯多于對照組，且周圍血供更豐富，觸之質地較柔軟，更接近正常脂肪組織。 在術后10、90d，PRP組存留體積均大于對照組。,41,學習交流PPT,研究五,脂肪移植物組織結構觀察（蘇木精-伊紅染色，X100） 對照組 PRP組,10d,90d,結果： 術后10、90d PRP組脂肪細胞均維持較好形態(tài)，細胞間隙保持較好，僅有少量脂肪空泡形成。 對照組移植90d后組織結構較混亂，大量結締組織及脂肪空泡形成，部分出現(xiàn)壞死，僅少量細胞能夠維持正常的形態(tài)。,42,學習交流PPT,研究五,結果：定量比較發(fā)現(xiàn)，在各時間點，PRP組均比對照組具有更多正常脂肪細胞面積及微血

17、管數(shù)量，比對照組具有更少脂肪空泡面積，說明PRP明顯改善了移植脂肪組織的組織學質量。,43,學習交流PPT,44,學習交流PPT,其它,45,學習交流PPT,研究六,方法： 健康大耳白兔10只雙側面神經(jīng)上頰支橫斷后置入硅膠神經(jīng)再生導管(自制) ，采用雙側自身對照，隨機分為實驗側和對照側。 實驗側注入PRP，對照側注入生理鹽水；8周后進行相關檢測分析評價面神經(jīng)恢復再生情況。,46,學習交流PPT,研究六,47,學習交流PPT,結果：面神經(jīng)損傷后8周兔實驗側及對照側均能引出清晰穩(wěn)定的面神經(jīng)復合動作電位，面神經(jīng)損傷兔實驗側動作電位潛伏期明顯短于對照側，而波幅則高于對對照側，說明PRP能促進面神經(jīng)功能

18、的恢復。,研究六,48,學習交流PPT,研究六,結果： 顯微圖像分析也表明，面神經(jīng)損傷后8周實驗組有髓軸突數(shù)目，直徑及面積明顯高于對照組。表明發(fā)生面神經(jīng)損傷后，早期應用PRP有利于面神經(jīng)的修復和再生。,49,學習交流PPT,研究七,方法： 離心法分離兔全血獲得PRP。 采用5%PRP作用于兔角膜基質細胞，CCK-8 ( 細胞增殖-毒性檢測試劑盒) 法檢測 PRP促角膜基質細胞增殖的作用。 PRP與凝血酶激活劑以 9:1的比例制備富血小板凝膠，對制備的富血小板凝膠進行組織形態(tài)學、對角膜基質細胞的作用、黏附性、生物相容性等多方面觀察與評價。,50,學習交流PPT,結果： 培養(yǎng)后測定3組細胞吸光度OD值可見，對照組OD值隨培養(yǎng)時間延長而不增加，增殖基本停滯; PRP組增加速度較FBS組及對照組快。表明，PRP與 FBS一樣具有促角膜基質細胞增殖的作用。,研究七,51,學習交流PPT,結果：組織學切片HE染色發(fā)現(xiàn)，制備的富血小板凝膠呈典型的多孔性結構，凝膠內大量的纖維交織，呈有序排列，形成支架，角膜基質細胞接種在富血