2D-DIGE(熒光差異雙向電泳)

1、,楊 華 麗,November 12th, 2015,2-D DIGE,Contents,1. 2-DE,1. 2-DE,1. 2-DE,2. 2-D DIGE,熒光差異雙向電泳技術(shù)（two dimension difference gel electrophoresis, 2D-DIGE）,2D-DIGE技術(shù)是一種新出現(xiàn)的熒光標(biāo)記的定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，它比經(jīng)典的2-DE具有更高的動(dòng)力學(xué)范圍和靈敏性，是2-DE技術(shù)的成熟與完善。它通過(guò)三色熒光染料分別對(duì)內(nèi)標(biāo)和生物樣本進(jìn)行標(biāo)記，能夠在一張2D膠上對(duì)兩個(gè)樣本的多種蛋白質(zhì)進(jìn)行分離，并分別單獨(dú)成像，應(yīng)用DeCyder 2D軟件分析圖像，得到蛋白表達(dá)量的

2、豐度變化，根據(jù)數(shù)據(jù)分析結(jié)果準(zhǔn)確地發(fā)現(xiàn)差異蛋白。常規(guī)可檢測(cè)到小于10%的蛋白表達(dá)差異而同時(shí)統(tǒng)計(jì)學(xué)可信度達(dá)到95%。,2. 2-D DIGE,2. 2-D DIGE,2. 2-D DIGE,2. 2-D DIGE,2. 2-D DIGE,2. 2-D DIGE,2. 2-D DIGE,2. 2-D DIGE,Virtual elimination of gel:gel variation is induced biological change with statistical accuracy capable of revealing differences in abundance of le

3、ss than 10% between samples.,2. 2-D DIGE,2. 2-D DIGE,2. 2-D DIGE,每個(gè)標(biāo)記蛋白只攜帶一個(gè)染料標(biāo)記，呈現(xiàn)一個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn),2. 2-D DIGE,2. 2-D DIGE,2. 2-D DIGE,2. 2-D DIGE,2. 2-D DIGE,2. 2-D DIGE,2. 2-D DIGE,2. 2-D DIGE,2. 2-D DIGE,2. 2-D DIGE,2. 2-D DIGE,2. 2-D DIGE,2. 2-D DIGE,2. 2-D DIGE,2. 2-D DIGE,2. 2-D DIGE,2. 2-D DIGE,2. 2-D

4、 DIGE,1,2. 2-D DIGE,3. experiment,3. experiment,3. experiment,3. experiment,3. experiment,3. experiment,3. experiment,3. experiment,3. experiment,3. experiment,4. video,2-D DIGE video,5.question,1. 用三色熒光染料標(biāo)記樣品是否會(huì)改變蛋白質(zhì)的分子質(zhì)量和等電點(diǎn)。 答：不會(huì)。這三種熒光染料是電荷和分子量匹配的，并且都是帶一價(jià)正電荷，標(biāo)記的是蛋白質(zhì)賴(lài)氨酸的-氨基。由于-氨基上帶有一價(jià)正電荷，當(dāng)染料與蛋白質(zhì)發(fā)生反應(yīng)時(shí)就可以發(fā)生電荷取代，所以不會(huì)改變各蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。雖然被標(biāo)記蛋白質(zhì)的分子質(zhì)量有所改變，但樣品中所有蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量都等量增加了，所以依舊不會(huì)影響蛋白質(zhì)的電泳結(jié)果 2、在第14張PPT中，很明顯可以看出樣品4的量要遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于樣品2，但為什么又說(shuō)它們的量是一樣的呢？ 答：因?yàn)樵谀zA中樣品1與2的量相對(duì)于內(nèi)標(biāo)幾乎是沒(méi)有變化的，我們可以粗略的認(rèn)為它們