實驗五醋酸纖維素膜電泳_第1頁
實驗五醋酸纖維素膜電泳_第2頁
實驗五醋酸纖維素膜電泳_第3頁
實驗五醋酸纖維素膜電泳_第4頁
實驗五醋酸纖維素膜電泳_第5頁
免費預(yù)覽已結(jié)束，剩余1頁可下載查看

下載本文檔

版權(quán)說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內(nèi)容提供方，若內(nèi)容存在侵權(quán)，請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、實驗五 血清蛋白的醋酸纖維薄膜電泳,一、基本原理,（一）電泳的定義 帶電顆粒在電場的作用下向著與其電性相反的電極方向移動，這種現(xiàn)象稱之為電泳(electrophoresis，簡稱EP)。 （二）基本原理 帶電粒子在電場中運動，是物質(zhì)的一種運動現(xiàn)象。電泳技術(shù)就是根據(jù)各種帶電粒子在電場中遷移速度的不同而對物質(zhì)進行分離的實驗技術(shù)。 生物大分子在電場中移動的速度決定于它的分子形狀、相對分子質(zhì)量大小、分子的帶電性質(zhì)及數(shù)目，還與分離介質(zhì)的阻力、溶液粘度及電場強度等因素有關(guān)。,蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)，其在等電點時呈電中性狀態(tài)，在電場中既不向負極移動，也不向正極移動。 血清中各種蛋白質(zhì)的等電點多低于pH7.4，因

2、此在pH比其等電點高的緩沖液(pH8.6)中，它們都解離成負離子，在電場中向正極移動。因為各種血清蛋白等電點不同(故而在同樣pH值下帶電荷數(shù)不同)以及分子量不同，因而在電場中的移動速度不同。 蛋白質(zhì)分子小而帶電荷多者，移動速度較快；分子大而帶電荷少者泳動速度較慢。 據(jù)此原理可利用醋酸纖維薄膜電泳將血清蛋白分為清蛋白、1-球蛋白、2-球蛋白、-球蛋白及-球蛋白等5條區(qū)帶。,（一）電泳準備 1.將醋酸纖維薄膜切成2cm寬、8cm長的小條。 2.浸泡：將薄膜有光澤面向下漂浮于緩沖液中，浸泡510min，待膜完全浸透后，取出輕輕夾于濾紙中，吸去多余的溶液。 3.點樣：在無光澤面距一端約1cm處，用點樣器(或較細而尖端光滑的微量吸管)取血清約23l，進行點樣。 4.上槽：待血清吸入膜后，以無光澤面向下、兩端緊貼在濾紙橋上(加血清的一端貼在電泳槽陰極端，切勿使點樣處與電泳槽接觸)，加蓋，平衡23min，然后通電。,二、基本操作,（二）電泳 電壓約100160V，時間3060min （三）染色及漂洗 電泳完畢后，關(guān)閉電源，將膜取出，直接浸于氨基黑染色液中23min。然后取出用漂洗液浸洗脫色，至背景完全無色為止。,1電泳圖譜不齊：點樣時血清滴加不均； 2電泳圖譜出現(xiàn)條痕：點樣后薄膜過干，或由于電泳槽密閉性不良，或電流過大造成水分蒸發(fā)，薄膜干燥； 3分離不良：標本滴加過多； 4區(qū)帶拖尾

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽，若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容，請與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論