《痰液脫落細胞檢查》PPT課件.ppt

1、第六章 細胞病理學(xué)診斷工作相關(guān)技術(shù)指南,第一節(jié) 痰液脫落細胞病理學(xué)檢查,一、目的,是通過檢查痰液中脫落的細胞形態(tài)學(xué)改變來檢查呼吸道及肺部病變的一種細胞病理學(xué)方法。 檢查具有非損傷性、非介入性且經(jīng)濟、方便、特異性高等優(yōu)點，與其它部位的細胞病理學(xué)檢查不同的是痰液細胞病理學(xué)檢查主要是檢出惡性腫瘤細胞（癌細胞），而對癌前病變檢查無意義。,采集痰液的方法和質(zhì)量直接影響痰檢查陽性率，采集痰液分析基本要求是： 痰液必須是從肺部咳出； 痰液必須新鮮； 對首次痰檢查患者，應(yīng)親自指導(dǎo)和觀察患者咳痰。,痰液檢查,來源： 肺泡、支氣管、氣管所產(chǎn)生的分泌物 目的: 輔助診斷：支氣管哮喘、支氣管擴張 確診：肺結(jié)核、肺癌

2、觀察療效和預(yù)后判斷,對原發(fā)肺癌的敏感性可達60%-80%，特異性達到100%。,二、方法學(xué),（一）標本準備 1、咳痰 建議用晨痰，涮牙、嗽口后進行，深咳。 有條件者可采用霧化吸入后誘咳采痰。 纖維支氣管鏡檢后咳取痰液能提高陽性率。,2、采集 一次咳痰建議留取3-5口痰液。 存放標本的容器必須是無吸水性的干燥塑料或玻璃器皿,須有蓋子密封,標簽明確，標簽應(yīng)記錄相關(guān)內(nèi)容,包括姓名、門診號（住院號）、送檢時間等。 二種標準的送檢方法： 每日一次，連續(xù)三天送檢，每天制片。 每日一次，連續(xù)三天，每天收集后先預(yù)固定，一次性提取細胞成份后離心沉渣涂片或制成細胞蠟塊（CB）。,3、送檢：原則上留取后立即送檢，保

3、持標本新鮮；一般夏天存放時間應(yīng)2小時，冬天4小時，如確有困難或須做沉渣切片則可以預(yù)固定后放置冰箱內(nèi)冷藏，但不宜5天。 4、接收：核對送檢單與樣本盒（瓶）上的相關(guān)信息，一致后簽收標本，若信息不一致則需重新與相關(guān)人員、科室核對，標本的簽收制度必須嚴格按規(guī)定執(zhí)行。,注意事項：,留痰：先漱口，取深部痰液。 查24小時痰量和分層檢查：無色廣口瓶。 細菌學(xué)檢查：無菌容器，及時送檢。 細胞學(xué)檢查：3-5口（約5ml）,或上午9-10時新鮮痰液。 無痰或痰少患者：化痰藥(霧化吸入法)。 昏迷患者：清理口腔，負壓吸引法吸痰。 幼兒：棉拭刺激喉部，棉拭刮取。 纖維支氣管鏡檢查：直接病灶采集。,痰標本應(yīng)盡快涂片，在

4、室溫下，可以保存24小時，在冰箱內(nèi)可保存兩天；痰液量一般以3ml-5ml(3-5口痰)為宜； 采痰時應(yīng)采用內(nèi)面涂蠟的痰盒，可防止痰液被吸收而難于挑痰制片； 采集痰標本沒有禁忌證，但如果病人在行支氣管鏡檢查之后，立即進行痰細胞學(xué)檢查，往往會混有一些嗜酸性的細胞碎片和炎性細胞，而誤認為高分化鱗癌。最好在支氣管鏡檢查510天后再行痰細胞學(xué)檢查。,（二）制片,1、標本取樣 （1）大體觀察： 量：無或少量，呼吸道粘膜和肺泡受刺激時增多。 顏色: 正常：無色或灰白色， 病理情況有以下變化： 水樣痰：黏液少，呈水樣，常有泡沫。 灰白色黏液痰：黏液豐富，膠樣。 紅色或棕紅色：含血液或血紅蛋白 血性痰:血液量多

5、，肺癌、肺結(jié)核、支氣管擴張 粉紅色泡沫樣:急性肺水腫 鐵銹色:大葉性肺炎,肺梗死 黃色膿痰:呼吸道化膿性感染，化膿性支氣管炎,肺結(jié)核; 黃綠色:綠膿桿菌,干酪性肺炎 爛桃樣灰黃色:肺吸蟲病; 棕褐色:阿米巴肺膿腫、慢性充血性心衰肺淤血 黑色:煤礦,鍋爐工人或大量吸煙者,性狀: 粘液痰：多見于慢性支氣管炎的緩解期、支氣管哮喘或肺癌病例。痰液透明、無色、粘稠，用鑷子牽拉時，往往可拉成很長的細絲。如果其中有乳白色的顆粒狀物，往往提示有肺癌的可能，必須取這部分痰液做涂片檢查。 粘液膿性痰：是在粘液痰的基礎(chǔ)上混有一部分膿液。檢查時必須仔細挑選粘液絲的部分做細胞學(xué)檢查，以提高癌細胞檢查的陽性率。 膿性痰：

6、為黃色或黃綠色的粘痰，因細菌種類的不同，痰的粘稠度和顏色可有不同。常見于氣管、支氣管和肺化膿性感染。其中有大量中性粒細胞和核碎片。對這種痰最好經(jīng)抗感染治療后再送檢，以取得較好的結(jié)果。 泡沫痰：即痰呈泡沫狀，此種痰應(yīng)在除去泡沫后，采取其中的粘液絲做涂片檢查。 血絲痰：即痰內(nèi)帶有少量的血液，這是支氣管黏膜某個局部小血管破裂出血或肺泡內(nèi)出血所致。常見于肺癌或支氣管結(jié)核，有時也見于支氣管炎。為了明確出血的原因，應(yīng)將帶血絲的及其附近部分的痰全部制成涂片，進行檢查。 氣味:正常無特殊氣味, 血腥味(血性痰),惡臭(合并厭氧感染)， 特殊臭味(晚期肺癌),（2）取樣：選擇性取有價值的部分 用鑷子、竹簽等無吸

7、水性材料夾取,不主張用玻璃制品、棉簽等取樣。 原則上優(yōu)先選取以下部位： 含血絲粘液痰。 灰白色豆渣樣痰絲（形似白色細線）。 透明粘液絲豐富處。 血液與粘液交界處痰液。 黏液豐富的樣本與水樣樣本應(yīng)注意區(qū)別取樣的痰液量，一般情況下后者的取樣量應(yīng)多于前者。,2、制片 普通涂片： 直接涂片：用鑷子或竹簽直接涂抹在玻片上，盡量分開粘液絲及血性部份，做到相對均勻，涂片面積應(yīng)超過玻片空白部位的三分之二，其優(yōu)點是粘液絲分布明顯，病變細胞相對集中，缺點是涂片厚薄不勻、重疊現(xiàn)象多見而影響觀察及封片，一般一次制片二張以上。 壓拉涂片：將取樣的標本置于一張玻片上后另一張玻片正面朝下壓拉下一張玻片，多次推拉、擠壓均勻后

8、二邊分開得到二張涂片；優(yōu)點是相對厚薄均勻，但可能細胞擠壓分散，鏡下沿粘液絲查找的線索相對不明顯。,液基制片：是指通過標本的預(yù)處理后先把痰液的粘液溶解、液化且細胞固定后再通過一定的技術(shù)手段把細胞成分轉(zhuǎn)移到玻片上的制片方法，制作過程等同一般的液基片，然應(yīng)注意標本預(yù)處理中以下方面。 選取的痰液樣本量通常為一張普通制片痰液量的3-5倍。 在清洗、固定作用的保存液內(nèi)存放15分鐘以上，保存液各廠家不盡相同，但主要的成份類似：酒精、甲醛、甲醇等。 1，4-二硫蘇糖醇（DTT）液消化粘液：用清洗液加10%的DTT粉劑配制成DTT液加入到保存液中1-2ml,震蕩10分鐘以上，即可完全溶解保存液中的粘液，使標本完

9、全液體化。,沉渣涂片或細胞蠟塊制作： 需要較大的樣本量，通常是用三天的咳痰量混合在一起制作取樣，須注意標本的預(yù)固定及適當?shù)谋４妗?標本需作液化、離心沉淀預(yù)處理（同前）。 沉淀后細胞量少作涂片用，3-5張；沉淀后細胞豐富者作細胞蠟塊。 普查、科研等情況下應(yīng)用較多，因其樣本量大也可進一步應(yīng)用分子、免疫等新技術(shù)。,3、制片的質(zhì)量控制 樣本的選?。褐苯雨P(guān)系到檢查的陽性率，多次檢查多張涂片結(jié)果的前后一致性應(yīng)大于80%以上。 涂片應(yīng)相對均勻，重疊部份面積20%，涂片部分面積應(yīng)大于玻片面積三分之二以上，合格涂片比例應(yīng)80%。,（三）固定,必須采用濕固定，即制片后立即固定，一旦固定不及時，涂片在空氣中干燥后，

10、細胞的形態(tài)特征將明顯受損，所以及時的固定非常重要。 一般要求制片后立即固定，通常5秒鐘。 固定時間涂片15分鐘，細胞蠟塊30分鐘。 固定液：為常規(guī)固定液。 垂直快速放入或自由落體放入固定液，否則會出現(xiàn)細胞堆積而引起皺折現(xiàn)象。 必須注意固定液的及時更換。 固定槽內(nèi)多個樣本同時放置要杜絕相互間的交叉污染。,（四）染色痰液脫落細胞病理學(xué)檢查的常規(guī)染色方法是H.E染色和巴氏染色,特殊需要時也可使用抗酸染色， （五）透明及封片為保存痰液中細胞結(jié)構(gòu)清晰，涂片染色脫水后必須經(jīng)二甲苯透明及中性樹膠封固。,（六）痰液標本的安全管理與院感控制,痰液樣本因常常伴隨特異性感染，并且需開放性處理，因此其實驗室的安全管理

11、及院感控制必須引起重視。 必須使用密閉性器皿來存放標本。 制片操作人員必須帶口罩、帽子等隔離措施。 有條件單位對痰液樣本在制片前可進行預(yù)消毒固定處理,常用預(yù)固定液為2%聚乙二醇和50%乙醇混合。 每日一次空氣、環(huán)境的紫外線消毒，并記錄時間，定期檢測紫外燈管的紫外線強度。 殘留樣本及盛具統(tǒng)一1%過氧乙酸液消毒處理,統(tǒng)一存放專用醫(yī)療垃圾袋后處理，處理標本過程中產(chǎn)生的相關(guān)污染液體經(jīng)專用醫(yī)用污水管道排放。,其配制方法： 10g聚乙二醇(熔點為43-46)在50-100的溫箱中溶化后倒入500ml 50%乙醇液中混勻成聚乙二醇溶解液備用(此液不會凝固).。 1升2%聚乙二醇和50%乙醇溶解混合液組成配方

12、為： 水 437ml 95%乙醇液 526ml 聚乙二醇乙醇液 40ml,（七）分子病理學(xué)技術(shù)在痰液樣本中的應(yīng)用,痰液細胞學(xué)樣本分子病理學(xué)檢測盡管臨床應(yīng)用較少，但在科研、專項普查等領(lǐng)域則經(jīng)常開展，應(yīng)用最多的是通過PCR或原位雜交技術(shù)檢測上皮細胞的以下項目： 端粒及端粒酶檢測 P16基因甲基化檢測 異源核糖核蛋白A2及其異構(gòu)體 P53基因 EGFR相關(guān)基因等,痰液檢查,鏡檢： 觀察有形成分的種類、數(shù)量、形態(tài)變化 1、白細胞：正常少量 2、中性粒細胞/膿細胞：化膿性炎癥或有混合感染 3、嗜酸性粒細胞：支氣管哮喘、過敏性支氣管炎、 肺吸蟲病等 4、淋巴細胞：肺結(jié)核病 5、紅細胞：正常無 6、呼吸道疾

13、病、出血性疾?。ㄧR檢/隱血試驗）,痰液檢查,7、上皮細胞：正常少量 炎癥/其它呼吸系統(tǒng)疾病時大量增加 8、肺泡巨噬細胞： 炭末細胞：吞噬炭粒（炭末沉著癥及大量煙塵吸入者） 含鐵血黃素細胞/心力衰竭細胞：吞噬含鐵血黃素 心力衰竭引起的肺淤血、肺梗死、肺出血 9、硫磺樣顆粒：黃色小顆粒，放線菌病 壓平可見菌絲放射狀排列呈菊花形(放線菌) 10、寄生蟲及蟲卵 肺吸蟲卵：肺吸蟲病 溶組織阿米巴滋養(yǎng)體：阿米巴肺膿腫/阿米巴肝膿腫入肺,痰液檢查,鏡檢 染色: 脫落細胞：肺部咳出，標本新鮮，一小時內(nèi)固定 巴氏(papanicolaou)染色、 蘇木素-伊紅(H-E)染色 細菌學(xué)涂片檢查： 革蘭(Gram)染

14、色：檢測細菌、真菌 抗酸染色：檢測結(jié)核桿菌 熒光染色：檢測真菌、支原體, 鏡檢前的準備及鏡檢規(guī)范： 鏡檢內(nèi)容 1、標本滿意度評估： 在滿意標本的前提下檢查的樣本才具有可信性，才可保證檢查的敏感性與特異性。 滿意樣本的要求： 合格的申請單，有詳細的臨床資料和病史提供，咳痰方法已經(jīng)過指導(dǎo)，方法正確。 涂片面積大于玻片面積的三分之二以上，分布均勻，厚薄相對一致，可見粘液絲（普通涂片）。 鏡下見到以下成份表明此樣本合格： 吞噬反應(yīng)的組織細胞（塵細胞）。 柱狀上皮細胞（伴或不伴退變）。 支氣管形成的粘液絲（枯絲曼氏螺旋體）。,三、痰液涂片的脫落細胞病理學(xué)的診斷,不滿意樣本：不能作出診斷意見，建議重新取樣

15、制片。 申請單內(nèi)容不全，咳痰時未經(jīng)專業(yè)指導(dǎo)。 不能確認標本與申請單的一致性。 涂片面積少于二分之一的陰性標本。 缺乏滿意樣本應(yīng)有的三種成份的陰性標本。 固定、染色效果差，細胞嚴重變形。 以上評估可寫入報告單內(nèi)容中，以將標本滿意度信息反饋給臨床醫(yī)師及患者。,2020/8/21,27,脫落細胞檢查的基本知識,第一節(jié) 細胞診斷學(xué)的基本概念 一、細胞增生活躍 細胞體積增大，核明顯增大，核染色質(zhì)增多，顆粒 增粗，核仁增大增多，核漿比例失常，胞漿藍染（ 巴氏），可伴核分裂像。 二、組織修復(fù)細胞 組織損傷或修復(fù)過程中從新生上皮脫落下來的細胞。 特征：細胞多成片出現(xiàn)，似合體細胞，排列規(guī)則；細胞稍增大，胞核也增

16、大，核不深染，胞漿尚豐富，深染；核仁明顯增大或增多；可能出現(xiàn)核分裂像 。,組織修復(fù)細胞,三、細胞化生 1、未成熟的鱗狀上皮化生細胞的特征： 似正常上皮外底層細胞大??；多成群出現(xiàn)，可呈鋪磚式排列；細胞呈圓或卵圓形，邊緣有小突起；胞漿常有小空泡使胞漿透亮。 2、成熟的鱗狀上皮化生細胞的特征： 細胞似正常鱗狀上皮中層細胞大??；多成群出現(xiàn)，細胞呈多邊形，有銳角突起，形態(tài)多樣；胞漿中常見小空泡。胞漿少，排列緊密，無細胞間橋。,鱗狀化生,四、儲備細胞增生 儲備細胞是柱狀上皮細胞下的一層具有分化潛能的幼稚細胞（或未分化細胞）。 形態(tài)特征： 細胞小，似鱗狀上皮內(nèi)底層細胞大??； 圓或卵圓形，胞漿有小突起； 胞漿

17、淡染可見小空泡； 核偏位，可能大小稍不一致； 核染色質(zhì)勻細，可見核仁和幾個大小一致的核粒； 細胞常成群，有時彼此相連；其周圍常伴化生細胞。,成團增生的基底細胞,支氣管黏膜,五、細胞增生 細胞分裂增強，數(shù)目增多，體積可增大，形態(tài)可出現(xiàn)異常。 細胞大，核大，核染色質(zhì)增多、增粗，雙核或多核，核仁明顯，核膜增厚，甚至輕度不規(guī)則。可分為輕度和重度增生。 六、細胞分化 從幼稚細胞發(fā)育成具有完備結(jié)構(gòu)和功能的成熟細胞的過程。 上皮細胞分化的形態(tài)表現(xiàn)： 1 細胞體積由小到大 2 胞漿量由少到多 3 核漿比由大到小 4 飽和由大到小 5 染色質(zhì)排列由疏松到致密 6 核仁由大到小，由多到少,七、細胞核分裂像 病理性

18、分裂像應(yīng)與核碎裂鑒別（核染色質(zhì)呈大小不 等的塊狀） 八、細胞退行性變 細胞退變包括變性和壞死，涂片中二者鑒別較困難， 統(tǒng)稱退變。 1 人工引起的退變 原因：標本放置過久，細胞自溶；細胞置于高滲或 低滲溶液中；固定液濃度或時間不適合，過濕或過干 形態(tài)特征：細胞呈大片結(jié)構(gòu)不清，細胞均增大或均縮 小，胞漿多呈紅染，各種類型細胞退變形式一致。,2 細胞自然退變 原因：細胞脫落過久，細胞營養(yǎng)不良，炎癥、放療、化療的影響，腫瘤表面供血不足，細胞生理性衰老 類型： （1）腫脹性退變細胞及胞核腫大，染色質(zhì)模糊、斷裂并淡染，核內(nèi)有空泡。胞漿空泡狀、蜂窩狀或網(wǎng)孔狀，胞界不清胞膜消失。 （2）固縮性退變細胞及胞核縮小，胞漿紅染、橘黃、淡黃或多彩，常出現(xiàn)核周暈，核固縮，染色質(zhì)致密，核碎裂核膜消失。,脫落細胞腫脹性退變過程,細胞退行性變,細胞退行性變,2020/8/21,41,第二節(jié) 正常脫落細胞形態(tài),一、上皮細胞 （一）復(fù)層鱗狀上皮 痰液涂片中占80%-90% 由底層到表層分為：基底層、中層、表層 1.基底