藥品質(zhì)量標準中鑒別項目設置的幾點考慮

1、藥品質(zhì)量標準中鑒別項目設置的幾點考慮藥品質(zhì)量標準中鑒別是用以判定某已知藥品的真?zhèn)味皇菍ξ粗幬镞M行結(jié)構(gòu)確證，所以鑒別方法應以專屬性好、簡便易行為宜，尤其能將結(jié)構(gòu)相似的同類藥品加以區(qū)別為主要考慮因素。如新魚腥草素鈉及制劑標準中僅用化學法和 uv 法作鑒別，難以與結(jié)構(gòu)類似物魚腥草素鈉及制劑相區(qū)分，質(zhì)量標準不具備應有的專屬性，可能給此后的市場監(jiān)督造成混亂。常用的鑒別方法包括色譜法、光譜法、化學法和生物學方法等，可根據(jù)藥品具體特點加以選用。色譜法（ tlc 法或 hplc 法）利用不同物質(zhì)在不同色譜條件下，各自色譜行為（比移值或保留時間）的不同，與對照品在相同色譜條件下進行色譜分離，比較其色譜行為的

2、一致性，來鑒別藥品的真?zhèn)?。這類方法的運用使得結(jié)構(gòu)相似化合物、同系物等的區(qū)分變得簡單易行。hplc 法雖然主要用于定量，但如果運用得當，尤其在含量測定或有關(guān)物質(zhì)項下已采用本法的情況下，利用對照品與供試品保留時間相同的特性作為鑒別依據(jù)，不必專門增加實驗以提高鑒別的專屬性，是非常可取的。值得注意的是色譜系統(tǒng)的穩(wěn)定性要好，同一物質(zhì)不同進樣時保留時間的重現(xiàn)性必須有保證。這就要求流動相與固定相相匹配， c18 鏈在水相環(huán)境中不易保持伸展狀態(tài)，故在 c18 柱的反相色譜系統(tǒng)中，流動相有機溶劑比例通常不應低于5 ，否則 c18 鏈的隨機卷曲將造成色譜系統(tǒng)不穩(wěn)定導致組份保留值波動，不利于此種鑒別。即便如此，在實

3、際操作中有時依然能遇到同一物質(zhì)在完全相同的色譜系統(tǒng)中保留時間不一致的情況，尤其梯度洗脫時此種現(xiàn)象更為常見。藥典中對保留時間的一致性未予具體規(guī)定，此時，操作中可增加1 / 5供試品溶液與對照品溶液等量混合，進樣后出現(xiàn)單一色譜峰作為鑒別依據(jù)，可以彌補該法之不足，此操作可列入質(zhì)量標準。在含量和有關(guān)物質(zhì)未采用 hplc 法的情況下，一般不單獨采用本法作鑒別。tlc 法除色譜行為外，還可將斑點顏色作為鑒別依據(jù)，可由兩個因素把握供試品與對照品的同一性，而且簡便易行，堪稱一個很好的鑒別方法。但由于薄層板質(zhì)量、邊緣效應等因素的影響，實際操作中有時也會遇到同一物質(zhì)在同一塊薄層板上的rf 值不一的情況，可比照hp

4、lc 的情況，操作中增加供試品溶液與對照品溶液等量混合，點樣后出現(xiàn)單一斑點作為鑒別依據(jù)，此點在2005年版藥典中已有體現(xiàn)。也有人提議明確rf 值偏差不超過 5%, 作為鑒別要求， 但其可行性有待考察。單獨使用tlc 鑒別時，要有色譜系統(tǒng)適應性試驗內(nèi)容，如要求幾種結(jié)構(gòu)相似化合物的混合溶液色譜展開后應顯示相應的幾個斑點或最難分離物質(zhì)對能夠分開的情況下，供試品溶液與對照品溶液主斑點的顏色與位置應一致。在中國藥典 2005 年版中，對 tlc 鑒別法在斑點的顏色與位置明確規(guī)定的基礎上對斑點大小也做出明確要求：供試品與同濃度對照品溶液顏色與位置應一致，斑點大小應大致相同；或供試品與對照品等體積混合，應顯

5、示單一，斑點緊密；或供試品溶液的主斑點與上述混合溶液的主斑點的顏色與位置一致，大小相似；或選用與供試品化學結(jié)構(gòu)相似藥物對照品，兩者的比移植應不同（例如芬布芬與酮洛芬，地塞米松磷酸鈉與潑尼松龍磷酸鈉，醋酸氫化可的松與醋酸可的松，潑尼松龍與氫化可的松，甲睪酮與睪酮，左旋多巴與酪氨酸） ；或上述兩種溶液等體積混合，應顯示兩個清晰分離的斑點。2 / 5光譜法中ir 法因可反映較多的結(jié)構(gòu)信息，在組份單一、結(jié)構(gòu)明確的原料藥鑒別中作為首選，藥物存在多晶型現(xiàn)象又無可重復轉(zhuǎn)晶方法時一般不采用此法， 但如果藥物存在多晶型現(xiàn)象，且需鑒別其有效晶型，ir 圖譜可以反映其有效晶型特點時，本法又是一種有效而簡便易行的鑒別

6、方法。制劑中則因輔料影響、提取過程可能導致晶型變化而一般不采用ir 法，而采用所受影響因素較少的uv 法。常用的 uv 鑒別方法有： 測定最大吸收波長， 或同時測定最小吸收波長；規(guī)定一定濃度的供試液在特定吸收波長（最大吸收或最小吸收）處的吸收度；經(jīng)化學處理后，測定其反應產(chǎn)物的吸收光譜特征；規(guī)定幾個特定吸收波長及其吸收度比值（峰- 峰、峰 - 谷、谷 - 谷）；規(guī)定幾個特定吸收波長及其吸收系數(shù)。因末端吸收所受影響因素較多，uv 法鑒別時，一般不宜用220nm以下波長的吸收特性作鑒別；因反映的結(jié)構(gòu)信息少，一般也盡量不用單一吸收峰作鑒別依據(jù)；為提高專屬性，可將上述幾個方法結(jié)合起來使用?；瘜W鑒別法一般

7、是特定官能團或特定結(jié)構(gòu)化合物的特性反應，與其它鑒別方法結(jié)合使用，可以使得鑒別的專屬性更加突出?；瘜W鑒別法具有專屬性較強、反應迅速、現(xiàn)象明顯的特點才有使用價值。包括在適當條件下產(chǎn)生顏色、熒光，發(fā)生沉淀反應或產(chǎn)生氣體等現(xiàn)象。1. 呈色反應：即向供試品溶液中加入適當試劑，在一定條件下發(fā)生化學反應，生成易于觀測的有色產(chǎn)物。常見的反應類型有：茚三酮呈色反應多為含脂肪氨基結(jié)構(gòu)的藥物；異羥肟酸鐵反應多為含芳酸及其酯類和酰胺類結(jié)構(gòu)的藥物；3 / 5三氯化鐵呈色反應多為含酚羥基或水解后產(chǎn)生酚羥基的藥物；重氮化偶合呈色反應多為芳伯氨基或能產(chǎn)生芳伯氨基結(jié)構(gòu)的藥物；氧化還原呈色反應或其它顏色反應。2. 沉淀反應：供試

8、品溶液中加入適當試劑，在一定條件下發(fā)生化學反應，生成不同顏色的沉淀物，有的具有特殊的沉淀形狀。常見的反應類型有：與硫氰化鉻胺（雷氏鹽）的沉淀反應多為生物堿及其鹽類藥物和具有芳香環(huán)的有機堿及其鹽類藥物。與重金屬離子的沉淀反應在一定條件下，藥物和重金屬離子反應，生成沉淀物。其它沉淀反應。3. 氣體生成反應：供試品溶液中加入適當試劑，在一定條件下發(fā)生化學反應，生成氣體。常見的反應類型有：產(chǎn)生氨氣，利用其特殊的氣味鑒別多為胺（銨）類藥物、酰胺類藥物經(jīng)強堿處理后，加熱，產(chǎn)生氨氣；產(chǎn)生硫化氫氣體，利用其特殊的氣味鑒別多為化學結(jié)構(gòu)中含硫的藥物，經(jīng)強堿處理后，加熱，產(chǎn)生硫化氫氣體；另外，含碘有機藥物，直火加熱后，可產(chǎn)生紫色碘蒸汽；含醋酸酯和乙酰胺類藥物，經(jīng)硫酸水解后可產(chǎn)生醋酸乙酯的香味。4. 熒光鑒別：常見的熒光發(fā)射形式有以下類型：藥物本身在可見光下發(fā)射熒光；藥物溶液加硫酸呈酸性后，在可見光下發(fā)射熒光；藥物和溴反應4 / 5后，在可見光下發(fā)射熒光；藥物和間苯二酚反應后以及經(jīng)其它反應后，發(fā)射熒光。5. 測定生成物的熔點：因操作煩瑣、費時，現(xiàn)已較少應用。質(zhì)量標準的鑒別項目一般選用不同原理的方法相結(jié)合以起到互補作用，同類試驗原理（如uv 與 ir 法、 hplc 與 tlc 法）或相同官能團的化學鑒別法盡量不同時出現(xiàn)在同一標準中