10組織培養(yǎng)第十章常見植物脫毒與快繁.ppt

1、第十章 常見植物脫毒與快繁技術(shù)宜職院08.9,目的與要求 了解農(nóng)作物、果樹、花卉、藥用植物的脫毒和快繁的生產(chǎn)意義與基本技術(shù)，根據(jù)地方特點(diǎn)和組培技術(shù)現(xiàn)狀，例舉部分植物進(jìn)行講授，并結(jié)合學(xué)生查閱資料共同探討。 具有農(nóng)作物、果樹、花卉、藥用植物快繁基本技術(shù)，具備馬鈴薯、草莓等植脫毒技術(shù)，進(jìn)行微型薯生產(chǎn)基本知能，有利用圖書及網(wǎng)絡(luò)資源收集相關(guān)資料，了解相關(guān)行業(yè)信息的能力，并具備一定交流探討能力。,第一節(jié) 農(nóng)作物的脫毒與快繁 植物組織培養(yǎng)技術(shù)已廣泛運(yùn)用于農(nóng)作物育種和良種繁育，尤其是許多無性繁殖類農(nóng)作物脫毒及良種快繁，對(duì)提高農(nóng)作物生產(chǎn)的產(chǎn)量和品質(zhì)發(fā)揮了極其重要的作用。,一、馬鈴薯的脫毒和快繁（一）莖尖培養(yǎng)脫毒

2、1、取材 生產(chǎn)大田頂芽，或塊莖，預(yù)培養(yǎng)抽生的枝條污染較少。供試材料存在病毒可結(jié)合熱處理脫毒。2、消毒 自來水沖洗1h，70%酒精30s，10%漂白粉溶液510min，無菌水沖洗23次。 3、接種 解剖鏡下，解剖刀切取0.10.3mm帶有12個(gè)葉原基的莖尖，接種到培養(yǎng)基上。 4、培養(yǎng)條件 MS、Miller，252， 1000lx，4周后增至20003000 lx，光照16h。5、病毒鑒定 目測法和指示植物鑒定法。,（二）微型薯生產(chǎn)技術(shù) 由試管苗生產(chǎn)的重130g的微小馬鈴薯被稱為微型薯。不帶病毒，增產(chǎn)效果一般在40%以上。 1、試管生產(chǎn) 微型薯一般只有15g。用組織培養(yǎng)方法生產(chǎn)微型薯分以下兩個(gè)步

3、驟：（1）單莖段擴(kuò)大繁殖（2）微型薯的誘導(dǎo)。 2、溫室多層架盤工廠化生產(chǎn) 3、低網(wǎng)畦生產(chǎn),二、甘薯的脫毒與快繁,（一）莖尖培養(yǎng) 1、莖尖培養(yǎng)脫毒 取高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)母株枝條，切成帶1芽小段。自來水流水沖洗， 70%酒精10s， 0.1%的升汞10min，無菌水45次，或2%次氯酸鈉5min，無菌水34次。 2、莖尖剝離和培養(yǎng) 解剖鏡下剝?nèi)パ可陷^大幼葉，切取0.30.5mm含12個(gè)葉原基的莖尖分生組織，迅速接種到制備好的培養(yǎng)基上。,3、病毒檢測 目測法和指示植物鑒定法。 （二）脫毒苗擴(kuò)繁和種薯的生產(chǎn) 通過病毒檢測的脫毒苗先在試管內(nèi)進(jìn)行切段快繁。30d左右長成有68片展開葉的試管苗。待試管苗繁殖到一定數(shù)

4、量后，即可在防蟲條件下于無菌基質(zhì)中進(jìn)行栽培繁殖。所結(jié)小薯即為原原種薯。以原原種（苗）為種植材料，在防蟲條件下的無病毒土壤上培育出的薯塊即為原種。以原種苗在大田條件下生產(chǎn)所結(jié)薯塊即為生產(chǎn)用種薯（良種）。,紅薯原原種煉苗,第二節(jié) 果樹脫毒快繁,利用組織培養(yǎng)方法繁殖果樹植株具有占地面積小，繁殖周期短，全年都能進(jìn)行繁殖，繁殖系數(shù)高等特點(diǎn)。還可以消除果樹的某些病毒病，適應(yīng)果樹向品種更新快、矮化密植以及無病毒栽培方向發(fā)展的需要。,一、草莓 （一）草莓離體快繁技術(shù) 1、外植體 67月份匍匐莖1520cm長時(shí)取材。 2、培養(yǎng)基 初代MS+6-BA0.5mg/L+GA30.1mg/L+IBA 0.2mg/L 增

5、殖MS+6-BA0.51.0mg/L。 3、生根和馴化 1/2MS+IBA0.21.0mg/L 根23cm時(shí)煉苗，一周后發(fā)新根，四周后可移栽。,（二）花藥培養(yǎng)脫毒,1、花藥培養(yǎng)脫毒技術(shù) 春季取單核期花蕾（直徑約4mm），45低溫處理24h。浸入70%酒精30s，漂白粉或0.1%氯化汞1015min。剝?nèi)』ㄋ幏旁谂囵B(yǎng)基上。 誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA1.0mg/L +NAA0.2 mg/L +IBA0.2 mg/L， 繼代培養(yǎng)基為MS+6-BA1.0mg/L+ IBA0.05mg/L 2、脫毒苗的檢測 指示植物小葉嫁接鑒定法和電子顯微鏡鑒定法。,草莓小葉嫁接法,二、柑橘,1、莖尖微芽嫁接 砧木種

6、子45溫水浸泡5min5556熱水處理50min取出吸干消毒剝?nèi)シN皮種子接種于MS培養(yǎng)基271暗培養(yǎng)2周后萌發(fā)芽苗可作砧木。 接穗材料強(qiáng)健新梢 熱空氣處理45min (50)取lcm長芽條消毒處理切取0.140.18mm微莖尖。 砧木苗切去長根和子葉，上胚軸留11.5cm切除頂部，垂直于莖，切開一個(gè)倒T字形切口，將微莖尖放置于砧木切口內(nèi)，莖尖底部和砧木切口形成層緊密貼合。,嫁接苗轉(zhuǎn)植于新鮮培養(yǎng)基上， 271、16h光照，24周后抽生新芽，成活率可達(dá)20%50%。58周可移植。,柑橘花藥培養(yǎng)示意圖,2、無病毒苗的繁殖 經(jīng)無病毒苗鑒定后選出無病毒良種苗木，可建立原種母本園。在隔離區(qū)，按無病苗的栽培

7、要求建成無病良種母本園，供繁殖無病苗木采穗用。,三、香蕉 （一）花序軸切片培養(yǎng) 1、花序軸切片 香蕉果穗已完全抽出時(shí)采上部末結(jié)實(shí)花序，無菌下剝?nèi)“プ臃?。取頂?015cm長的花序軸段，滅菌后橫切成23cm厚的薄片，再縱切成數(shù)片。 2、培養(yǎng)過程 常用MS培養(yǎng)基，也可用SM或改良MS，繼代也可用Knudson培養(yǎng)基。,香蕉雄花序外植體誘幼苗過程,（二）影響試管育苗的關(guān)鍵技術(shù) 芽的反復(fù)增殖是香蕉試管育苗的技術(shù)關(guān)鍵。芽的增殖效果如何，較重要的衡量指標(biāo)是增殖率和代期（次繼代培養(yǎng)的時(shí)間），均與生長調(diào)節(jié)劑關(guān)系最為密切。細(xì)胞分裂素以6-BA 34mgL為宜，增殖率可達(dá)到4以上，代期為34周，因而增殖效率

8、高。,第三節(jié) 蔬菜組織培養(yǎng)一、番茄1、花藥培養(yǎng)取花藥37mm長、單核中期的花蕾。將花蕾用0.1吐溫40溶液浸泡5min70酒精15s3的漂白粉10 min無菌水沖洗接種從花蕾中取出花藥，接種在DBMII2.0mg/L NAA1.0mg/LKIN的培養(yǎng)基上，27、24h光照后黑暗下培養(yǎng)。,2、葉培養(yǎng)取無菌幼嫩葉片，切成55mm的小塊。MS0.2mg/LIAA2mg/L BA 27、光。25天后，愈傷組織分化芽。一個(gè)月后每切塊長出25個(gè)芽。芽轉(zhuǎn)到無激素的MS培養(yǎng)基上，510d后形成根。,3、胚培養(yǎng) 外植體的制備授粉后3040d果實(shí)95%乙醇消毒5%NaCl中5min無菌蒸餾水充分淋洗除去種子上的膠

9、狀復(fù)被。 培養(yǎng)基MS附加硫胺素3.0um。pH6.0。附加2.4D9.05um,IiP4.92um和椰乳100ml/L的MS用做愈傷組織啟動(dòng)和保存培養(yǎng)基。 培養(yǎng)條件愈傷組織啟動(dòng)和保存暗培，27。再生生根2030、16h/d，熒光下進(jìn)行,二、甘藍(lán) 1、取材和處理 剝?nèi)ト~球的葉片，留下中心柱和腋芽，70%酒精1-2分鐘0.2%升汞10-15分鐘剝離腋芽接種在繁芽培養(yǎng)基上（MS+IAA0.2-0.5mg/L+6BA1.0-3.0mg/L） 2、培養(yǎng) 光照1000-3000lx, 12-13h/d, 202，濕度50%-60%。 3、擴(kuò)大繁殖 重復(fù)進(jìn)行擴(kuò)繁，直到達(dá)到要求繁殖數(shù)量為止。,第四節(jié) 觀賞植物

10、的組織培養(yǎng) 蘭花 蘭花系蘭科植物，在自然條件下主要靠分株繁殖，繁殖率一年只有幾倍，所以無法大量繁殖生產(chǎn)，而且由于長期進(jìn)行無性繁殖，帶病毒株增多，逐漸使種性降低，影響生長。,1、取材和處理 切取lOcm長生長健壯的莖尖，去苞葉洗凈75酒精5的漂白粉10min無菌水沖洗接種。 在蘭花葉片組織培養(yǎng)中，應(yīng)選擇帶有嫩葉的花梗，以后的處理方法同莖尖。,2、原球莖的誘導(dǎo)培養(yǎng) 莖尖生長點(diǎn)或葉片接種在原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。因蘭花種類而異，可以用固體培養(yǎng)基或液體培養(yǎng)基(液體培養(yǎng)基中應(yīng)加比較多的蔗糖)。凡原球莖切口處不變褐或變褐物質(zhì)排出量較少的種類，可用固體培養(yǎng)基，而易變褐的種類，最好用液體培養(yǎng)基，誘導(dǎo)溫度應(yīng)于23，

11、光照強(qiáng)度1 500-20001x。,原球莖的增殖,3、苗的分化培養(yǎng) 蘭科植物與其他草本花卉不同，它不易受生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的影響，一般是將原球莖轉(zhuǎn)入離子濃度較低的培養(yǎng)基中，加入一些如椰子汁等天然提取物質(zhì)，效果會(huì)更好，原球莖很快再生成植株。 lcm高的幼苗轉(zhuǎn)移到壯苗培養(yǎng)基上培養(yǎng)36個(gè)月，使其長34片葉、34條根、310cm高，可移栽在泥炭和蛭石中，保濕弱光施肥。,原球莖再分化,蝴蝶蘭,第五節(jié) 藥用植物離體培養(yǎng) 蘆薈 蘆薈不能自花授粉結(jié)實(shí)，因此，用種子繁殖非常困難。目前的繁殖方法主要是分株和分蘗，但難以快速、大量地繁殖種苗，這也是當(dāng)前蘆薈種苗昂貴的重要原因之一。,（一）材料和培養(yǎng)基 取l0-l5cm高的

12、蘆薈幼苗誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+(1-6mg/ L)BA+(0.1-0.5mg/L)NAA分化培養(yǎng)基為MS+(2-4mg/L)BA+ (0.1-0.5mg/L)NAA生根培養(yǎng)基為MS+(0.1-0.5mg/L)IBA+(2-5mg/L)PP333,（二）繁殖方法1、愈傷組織培養(yǎng) 莖尖部分75%乙醇30-60s升汞5-l0min無菌水沖洗數(shù)次解剖刀取出組織切塊接種 培養(yǎng)條件:光照 10-12h，1000一2000Lx， (25士)2。15-25d后，可膨大成愈傷組織，1周后，就可將愈傷組織轉(zhuǎn)管進(jìn)行繼代培養(yǎng)或分化培養(yǎng)。,2、繼代、分化培養(yǎng) 同誘導(dǎo) 3、生根培養(yǎng) 培養(yǎng)條件同分化，半個(gè)月后即可生根。 4、煉

13、苗 清水噴濕，在15-25、濕度60%- 80%的條件下煉苗24h，也可視情況縮短為l2h。 5、移栽 將幼苗移栽入由蛭石組成的馴化苗圃中馴化，定期噴施馴化培養(yǎng)液和清水，15-20d后，即可移栽。,第六節(jié) 樹木的離體培養(yǎng) 銀杏 是園林綠化的珍貴樹種，亦有較高的藥用價(jià)值，以葉及種皮入藥，它的葉的制劑能顯著擴(kuò)張腦血管，可治療腦血栓、冠心病、心肌梗塞及大動(dòng)脈炎等。種仁、有小毒、性平、有斂肺、定喘等功能。因此可說全身都是寶。但常規(guī)繁殖較難，因此組織培養(yǎng)有很大應(yīng)用價(jià)值。,胚培養(yǎng) （一）取材：選擇生長飽滿的銀杏種子。 （二）操作： 1、升汞進(jìn)行表面消毒，無菌條件下剝除外皮和胚乳。接種在MS 培養(yǎng)基上。培養(yǎng)條件：光照1500LX ，溫度25度。 2、愈傷組織的誘導(dǎo)：1/2MS+IBA濃度梯度（1、3、5、7、10PPM）誘導(dǎo)愈傷組織。將培養(yǎng)3天后的銀杏胚接種在此培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)出大量的愈傷組織。,3、愈傷組織繼代培養(yǎng)： MS+1.0mg/LNAA+0