熒光探針匯總

1、1. Fluo-3 AM （鈣離子熒光探針）原理 Fluo-3 AM是一種可以穿透細(xì)胞膜的熒光染料。Fluo-3 AM的熒光非常弱，進(jìn)入細(xì)胞后可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fluo-3，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)，和細(xì)胞內(nèi)游離的鈣離子結(jié)合，結(jié)合鈣離子后可以產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光。生理意義 細(xì)胞內(nèi)鈣離子增多是細(xì)胞損傷的結(jié)果，因此此探針能表征細(xì)胞損傷程度激發(fā)波長506nm 發(fā)射波長 526nm （綠色）備注 推薦使用2. Mag-fura-2 AM（鈣離子熒光探針）原理Fura-2 AM是一種可以穿透細(xì)胞膜的熒光染料。Fura-2AM進(jìn)入細(xì)胞后可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fura-2，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)。Fura-2可

2、以和鈣離子結(jié)合，結(jié)合鈣離子后在330-350nm激發(fā)光下可以產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光，而在380nm激發(fā)光下則會(huì)導(dǎo)致熒光減弱。這樣就可以使用340nm和380nm這兩個(gè)熒光的比值來檢測細(xì)胞內(nèi)的鈣離子濃度，可以消除不同細(xì)胞樣品間熒光探針裝載效率的差異，熒光探針的滲漏，細(xì)胞厚度差異等一些誤差因素。生理意義 細(xì)胞內(nèi)鈣離子增多是細(xì)胞損傷的結(jié)果，因此此探針能表征細(xì)胞損傷程度激發(fā)波長為340nm和380nm 發(fā)射波長 510nm （藍(lán)色）備注 儀器濾光片不適用 3 Fluo-4-AM （鈣離子熒光探針）原理Fluo 4 是一種將Fluo 3結(jié)構(gòu)中的Cl替換成F的鈣熒光探針。由于將Cl替換成了電子吸引力更強(qiáng)的F，它的

3、最大激發(fā)波長會(huì)向短波長處偏離10 nm左右。所以用氬激光器激發(fā)時(shí)，F(xiàn)luo 4的熒光強(qiáng)度比Fluo 3強(qiáng)1倍。由于Fluo 4與鈣離子的親和力和Fluo 3近似，所以使用上和Fluo 3也基本相同生理意義 細(xì)胞內(nèi)鈣離子增多是細(xì)胞損傷的結(jié)果，因此此探針能表征細(xì)胞損傷程度激發(fā)波長494nm 發(fā)射波長516nm （綠色）備注 用激光器激發(fā)時(shí)熒光強(qiáng)度強(qiáng)，因此不推薦4. DCFH-DA （活性氧熒光探針）原理DCFH-DA本身沒有熒光，可以自由穿過細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)后，被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細(xì)胞膜，從而使探針很容易被裝載到細(xì)胞內(nèi)。細(xì)胞內(nèi)的活性氧可以氧化無熒光的DCFH生成有熒

4、光的DCF。生理意義 檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧表征細(xì)胞損傷程度激發(fā)波長485nm 發(fā)射波長 520nm （綠色）備注 推薦使用5. DHR 123 （活性氧熒光探針） 原理 本身無熒光, 在超氧化酶存在時(shí)可被過氧化氫 (H2O2)氧化, 轉(zhuǎn)變成發(fā)射綠色熒光的羅丹明123 (Rhodamine 123), 因此廣泛應(yīng)用于檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS), 如過氧化物, 次氯酸和過氧亞硝基陰離子等。生理意義 檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧表征細(xì)胞損傷程度激發(fā)波長507nm 發(fā)射波長 529nm （綠色）備注 氧化后成羅丹明123，熒光強(qiáng)度可能受到線粒體膜電位的影響6. RhodamineI23 （線粒體膜電位熒光探針）原理

5、細(xì)胞膜通透的陰離子綠色熒光染料, 能夠迅速被活線粒體攝取, 而無細(xì)胞毒性。 生理意義 標(biāo)記線粒體膜電位激發(fā)波長488nm 發(fā)射波長515 575nm （綠色）生理意義 檢測線粒體膜電位備注 正在使用7. Hoechst 33342 （DNA熒光探針）原理 Hoechst 33342是一種可對DNA 染色的細(xì)胞核染色試劑，常用于細(xì)胞凋亡檢測。Hoechst染料可透過細(xì)胞膜在聚AT序列的富集區(qū)域的小溝處與DNA結(jié)合并對DNA染色而發(fā)出強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光。生理意義 標(biāo)記雙鏈DNA激發(fā)波長355nm 發(fā)射波長465nm （藍(lán)色）備注 正在使用8. FDA 原理 FDA可透過細(xì)胞膜并作為熒光素積蓄在活細(xì)胞內(nèi)

6、。生理意義 反映細(xì)胞膜完整性和細(xì)胞活力激發(fā)波長495nm 發(fā)射波長520nm （綠色）備注 正在使用9. PI （DNA熒光探針）原理 它不能透過完整的細(xì)胞膜，但能透過凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞的膜而將細(xì)胞核染紅，與細(xì)胞核中的DNA結(jié)合的PI發(fā)出的熒光，與未結(jié)合的PI相比，強(qiáng)度會(huì)增強(qiáng)20-30倍。生理意義 檢測死細(xì)胞及凋亡晚期細(xì)胞激發(fā)波長530nm 發(fā)射波長615nm （紅色）備注 嘗試過，但效果不好10. EB （核酸熒光探針）原理 EB，不能透過細(xì)胞完整的細(xì)胞膜。溴化乙錠含有一個(gè)可以嵌入DNA堆積堿基之間的一個(gè)三環(huán)平面基團(tuán)。它與DNA的結(jié)合幾乎沒有堿基序列特異性。在高離子強(qiáng)度的飽和溶液中，大

7、約每2.5個(gè)堿基插入一個(gè)溴化乙錠分子。當(dāng)染料分子插入后，其平面基團(tuán)與螺旋的軸線垂直并通過范德華力與上下堿基相互作用。這個(gè)基團(tuán)的固定位置及其與堿基的密切接近，導(dǎo)致與DNA結(jié)合的染料呈現(xiàn)熒光，其熒光產(chǎn)率比游離溶液中染料有所增加。生理意義 檢測死細(xì)胞激發(fā)波長545nm 發(fā)射波長605nm （紅色）備注 有強(qiáng)致癌性，不推薦11. DAPI （DNA熒光探針）原理 DAPI可以穿透細(xì)胞膜與細(xì)胞核中的雙鏈DNA結(jié)合而發(fā)揮標(biāo)記的作用，產(chǎn)生比自身強(qiáng)20多倍的熒光，且對活細(xì)胞無毒副作用。和EB相比，對雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。DAPI也常用于普通的細(xì)胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。生理意義

8、標(biāo)記凋亡和死細(xì)胞的DNA激發(fā)波長364nm 發(fā)射波長454nm （藍(lán)色）備注 與Hoechst功能相近，可以嘗試12. Calcein AM 原理 Calcein-AM由于在Calcein(鈣黃綠素)的基礎(chǔ)上加強(qiáng)了疏水性，因此能夠輕易穿透活細(xì)胞膜。當(dāng)其進(jìn)入到細(xì)胞質(zhì)后，酯酶會(huì)將其水解為Calcein(鈣黃綠素)留在細(xì)胞內(nèi),發(fā)出強(qiáng)綠色熒光，且細(xì)胞毒性很低，適合用于活細(xì)胞染色。生理意義 檢測細(xì)胞膜完整性激發(fā)波長494nm 發(fā)射波長517nm （綠色）備注 跟FDA功能類似，細(xì)胞毒性很低，可以長時(shí)間標(biāo)記細(xì)胞，但價(jià)格比較貴13. BCECF-AM (pH熒光探針)原理 BCECF-AM是一種可以穿透細(xì)胞

9、膜的熒光染料，BCECF-AM沒有熒光，進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解成BCECF，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)。BCECF在適當(dāng)?shù)膒H值情況下可以被激發(fā)形成綠色熒光。生理意義 檢測細(xì)胞內(nèi)pH激發(fā)波長490nm 發(fā)射波長526nm （綠色）備注 感覺意義不大14. Tubulin-Tracker Red (微管紅色熒光探針)原理Tubulin-TrackerRed探針為熒光染料Alexa Fluor 555標(biāo)記的抗-Tubulin小鼠單克隆抗體(克隆號(hào)為DM1A)，可以識(shí)別-Tubulin的425-450aa?？梢杂糜谌?、小鼠、大鼠、牛、豬、豚鼠和禽類(avian)樣品-Tubulin的檢測。生理意義 標(biāo)

10、記細(xì)胞內(nèi)微管激發(fā)波長555nm 發(fā)射波長565nm （紅色）備注 紅色熒光比較難拍，且價(jià)格較貴，作為篩選用可行性不大，可做機(jī)制研究用15. Lyso-Tracker Red (溶酶體紅色熒光探針)原理 Lyso-Tracker Red為采用Molecular Probes公司的DND 99進(jìn)行了熒光標(biāo)記的帶有弱堿性的熒光探針，可以選擇性地滯留在偏酸性的溶酶體中，從而實(shí)現(xiàn)對于溶酶體的特異性熒光標(biāo)記。中性紅(NeutralRed)和吖啶橙(Acridine Orange)也都可以對溶酶體進(jìn)行熒光染色，但中性紅和吖啶橙的染色缺乏特異性。生理意義 標(biāo)記細(xì)胞溶酶體激發(fā)波長577nm 發(fā)射波長590nm

11、（紅色）備注 紅色熒光比較難拍，且價(jià)格較貴，作為篩選用可行性不大，可做機(jī)制研究用16. Golgi-Tracker Red (高爾基體紅色熒光探針)原理 Golgi-TrackerRed為采用MolecularProbes公司的BODIPYTR進(jìn)行了熒光標(biāo)記的C5-ceramide。Ceramide或其類似物可以選擇性地和高爾基體結(jié)合，因此熒光標(biāo)記的ceramide可以用作高爾基體特異性的熒光探針。生理意義 標(biāo)記細(xì)胞高爾基體激發(fā)波長589nm 發(fā)射波長617nm (紅色)備注 紅色熒光比較難拍，且價(jià)格較貴，作為篩選用可行性不大，可做機(jī)制研究用17. ER-Tracker Red (內(nèi)質(zhì)網(wǎng)紅色熒

12、光探針)原理 ER-Tracker Red為采用Molecular Probes公司的BODIPY TR進(jìn)行了熒光標(biāo)記的glibenclamide。Glibenclamide即glyburide，中文名為格列苯脲，是一種2型糖尿病治療藥物，可以結(jié)合主要定位在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的sulphonylurea受體。因此熒光標(biāo)記的glibenclamide就可以用作內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特異性的熒光探針。ER-Tracker Red對于細(xì)胞的毒性極低。生理意義 標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激發(fā)波長587nm 發(fā)射波長615nm備注 紅色熒光比較難拍，且價(jià)格較貴，作為篩選用可行性不大，可做機(jī)制研究用18. Mito-Tracker Green (線粒體綠色熒光探針) (綠色)原理 Mito-TrackerGreen為采用MolecularProbes公司的carbocyanine進(jìn)行了熒光標(biāo)記的一種Mito-Tracker，可以用作線粒體特異性的熒光探針。和rhodamine123或JC-1相比，Mito-Tracker Green對于線粒體的染色不依賴于線粒體膜電位。生理意義 標(biāo)記細(xì)胞線粒體激發(fā)波長490nm 發(fā)射波長516nm備注 與羅丹明123不完全相同