金湯匙中黃酮的提取和抗氧化性研究畢業(yè)論文

楚雄師范學(xué)院本科論文（設(shè)計(jì)）楚 雄 師 范 學(xué) 院本 科 生 畢 業(yè) 論 文題 目：金湯匙中黃酮的提取及抗氧化活性研究專 業(yè)： 化 學(xué) 學(xué) 號(hào)： 20091051236 學(xué)生姓名： 畢先琴 指導(dǎo)教師： 鄒 艷 麗 職稱： 講師 論文字?jǐn)?shù)： 7136 字 完成日期 ： 2013 年 5 月教 務(wù) 處 印 制楚雄師范學(xué)院本科論文（設(shè)計(jì)）目錄摘要 I關(guān)鍵詞 IAbstract . 錯(cuò)誤！未定義書簽。Key words . 錯(cuò)誤！未定義書簽。前言 11 實(shí)驗(yàn)部分 . 11.1 原料、試劑與儀器 11.1.1 原料 11.1.2 試劑 11.1.3 儀器 11.2 實(shí)驗(yàn)部分 11.2.1 原料處理 11.2.2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 21.2.3 最大吸收波長的選擇 21.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 21.2.5 黃酮的提取 21.2.6 提取液定性實(shí)驗(yàn) 2楚雄師范學(xué)院本科論文（設(shè)計(jì)）1.2.7 黃酮含量的測定 21.3 單因素實(shí)驗(yàn) 21.3.1 回流時(shí)間對(duì)金湯匙中黃酮提取率的影響 21.3.2 提取溫度對(duì)金湯匙中黃酮提取率的影響 21.3.3 料液比對(duì)金湯匙中黃酮提取率的影響 21.3.4 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)金湯匙中黃酮提取率的影響 31.4 正交試驗(yàn) 31.5 清除羥基自由基實(shí)驗(yàn) 32 結(jié)果與分析 32.1 最大吸收波長的選擇結(jié)果 32.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制結(jié)果 42.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制結(jié)果與分析 42.3 提取液定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果 42.4 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析 52.4.1 回流時(shí)間對(duì)金湯匙中黃酮提取率的影響 52.4.2 提取溫度對(duì)金湯匙中黃酮提取率的影響 62.4.3 料液比對(duì)金湯匙中黃酮提取率的影響 72.4.4 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)金湯匙中黃酮提取率的影響 82.5 正交試驗(yàn)結(jié)果與分析 82.5.1 正交試驗(yàn) 82.5.2 正交試驗(yàn)結(jié)果與分析 82.5.3 平行三次實(shí)驗(yàn) 92.6 清除羥基自由基實(shí)驗(yàn)與結(jié)果 92.6.1 清除羥基自由基實(shí)驗(yàn) 92.6.1 清除能力分析 9楚雄師范學(xué)院本科論文（設(shè)計(jì)）3 結(jié)論 10參考文獻(xiàn) 11致謝 12楚雄師范學(xué)院本科論文（設(shè)計(jì)）I金湯匙中黃酮的提取及抗氧化活性研究摘要：用索氏回流法從金湯匙中提取黃酮類化合物，采用乙醇水溶液作為溶劑，通過單因素實(shí)驗(yàn)，正交試驗(yàn)確定最佳提取條件，以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品，采用分光光度法測定金湯匙中總黃酮的含量；結(jié)果顯示，金湯匙提取液中含黃酮類化合物，最佳提取條件為：提取時(shí)間 2h、提取溫度80、料液比為 1：40、乙醇體積分?jǐn)?shù) 60%。在該提取條件下，測得金湯匙中的黃酮含量為7.09%。 黃酮提取液對(duì)羥基自由基的清除率作用實(shí)驗(yàn)。通過實(shí)驗(yàn)證明黃酮類化合物具有一定的抗氧化性。關(guān)鍵詞：金湯匙；黃酮；提取；含量測定；抗氧化性楚雄師范學(xué)院本科論文（設(shè)計(jì)）IIThe studies on exeraction of flavonoids and antioxidant activity in folium pyrrosiaeSummary: with return law from gold spoon in the extraction yellow ketone class compounds, used ethanol water solution as solvent, through single factors experiment, orthogonal test determines best extraction conditions, to Reed d for standard against products, used points light photometric law determination gold spoon in the total yellow ketone of content; results displayed, gold spoon extraction liquid in the with yellow ketone class compounds, best extraction conditions for: extraction time 2H, and extraction temperature 80 , and material liquid than for 1:40, and ethanol volume score 60%. In the extract under conditions measured in breeding for flavonoid content of 7,013%. Brass extracts on hydroxyl radical scavenging rate effects. Experimentally demonstrate flavonoids have antioxidantKey words: folium pyrrosiae; extract; content; antioxidant楚雄師范學(xué)院本科論文（設(shè)計(jì)）1金湯匙中黃酮的提取及抗氧化活性研究前言蕨類植物是植物中主要的一類，分布廣泛，種類豐富，約有 12000 種，我國是世界上蕨類資源最豐富的國家之一，約有 2 600 種，其中我國的華南、西南地區(qū)的蕨類植物蘊(yùn)藏量較大,僅云南省就有 1 000 余種，被譽(yù)為“蕨類植物王國”，此外有幾百種蕨類植物中含有黃酮化合物，具有多種生物活性的多酚類化合物，具有多種生理和藥理活性，如抗炎抑菌,降血糖,抗氧化,抗腫瘤以及增強(qiáng)免疫能力等藥理作用，民間常用其治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎, 腸胃病, 腳扭傷等。金湯匙是蕨類植物中的一種，主要分布于安徽,浙江 ,福建 ,臺(tái)灣 ,四川, 云南 ,貴州等地 1。根據(jù)所查閱的資料，目前提取黃酮的主要方法有超聲波法 , 有機(jī)溶劑提取法, 微波法 , 酶解法 , 大孔樹脂吸收法等 2，但超聲波提取法器設(shè)備要求和生產(chǎn)成本都較高且方法單一，大孔樹脂吸附法使有機(jī)溶劑難以收回,損耗大,成本高,易燃易爆,對(duì)環(huán)境污染嚴(yán)重。本文擬采用有機(jī)溶劑法從金湯匙中提取黃酮類化合物。經(jīng)查閱文獻(xiàn)，目前對(duì)金湯匙中黃酮的研究并不深入，為了開發(fā)和利用金湯匙中的黃酮物質(zhì)，本文對(duì)金湯匙中黃酮的提取優(yōu)選及抗氧化活性進(jìn)行初步研究，為其黃酮的活性及開發(fā)利用的深入研究提供基礎(chǔ)性資料 。1 實(shí)驗(yàn)部分1.1 原料、試劑與儀器1.1.1 原料：金湯匙（采于昭通威信縣）1.1.2 試劑：無水乙醇（AR） 、蘆丁(標(biāo)準(zhǔn)品) 、亞硝酸鈉(AR) 、氫氧化鈉(AR) 、硝酸鋁(AR) 三氯化鐵(AR) 、鋅粉 (AR)。1.1.3 儀器：722 型光柵分光光度計(jì)（上海青華科技儀器有限公司） ；HH-S2S 恒溫水浴鍋（金壇市大地自動(dòng)化儀器廠） ；CP214C 電子天平（奧豪斯儀器上海有限公司） ；電熱鼓風(fēng)干燥箱（浙江寧波檢測儀表廠） ；搖擺式植物粉碎機(jī)。1.2 實(shí)驗(yàn)部分1.2.1 原料處理將金湯匙根葉洗干凈 ，置于陰涼處晾干，粉碎備用。1.2.2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 3將蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品置于干燥潔凈的稱量瓶中，置于干燥箱中。在 120下恒重 1.5h，取出置于干燥器中冷卻，冷卻后準(zhǔn)確稱取 0.0133g 蘆丁置于燒杯中，用 70%的乙醇溶解后移入 50mL 容量瓶中，定容，搖勻備用。1.2.3 最大吸收波長的選擇 3準(zhǔn)確移取 1.5mL 標(biāo)準(zhǔn)液于 25mL 比色管中，加入 0.80mL 5%亞硝酸鈉溶液，放置 6min 后，加入 0.80mL10%硝酸鋁溶液，放置 6min 后，加入 5mL4%氫氧化鈉溶液，用 70%乙醇稀釋至 10mL，再放置 10min，以試劑為參比，在 460-530m 波長范圍測定吸光度。1.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 3分別準(zhǔn)確移取 0.266mg/ml 蘆丁對(duì)照液 0.00 mL ，1.00mL，2.00 mL，3.00 mL，4.00 mL, 5.00mL 于 25mL 比色管中，加入 0.80mL5%亞硝酸鈉溶液，放置 6min 后，加入 0.80mL10%硝酸鋁楚雄師范學(xué)院本科論文（設(shè)計(jì)）2溶液，放置 6min 后，加入 5mL4%氫氧化鈉溶液，用 70%乙醇定容至 10mL，再放置 10min，以試劑為參比，在最大吸收波長下分別測其吸光度。1.2.5 黃酮的提取 4稱取 1.0g 粉碎后的金湯匙粉末，在提取時(shí)間 2 h、提取溫度 80、料液比為 1：40、乙醇體積分?jǐn)?shù) 60%的條件下水浴加熱回流提取 ，待冷卻后，移入 50mL 容量瓶中，洗滌液一并移入，用乙醇稀釋定容至 10mL，搖勻，得黃酮提取液。1.2.6 提取液定性實(shí)驗(yàn) 5鋁鹽反應(yīng)：取提取液 1mL 于試管中，加幾滴硝酸鋁溶液，振蕩。若溶液呈黃色，說明含有黃酮。氫氧化鈉反應(yīng)：取提取液 1mL 于試管，加氫氧化鈉溶液，振蕩。若溶液呈亮黃色，說明含黃酮。鐵離子反應(yīng)：取提取液 1mL 于試管中，加鐵離子溶液，振蕩。若溶液呈墨綠色，說明含黃酮。鹽酸-鋅反應(yīng)：取提取液 1mL 于試管中，先加少量鋅粉，再加幾滴濃鹽酸溶液，微熱。若溶液呈橙黃色，說明含有黃酮。1.2.7 黃酮含量的測定 5準(zhǔn)確移取 0.5mL 稀釋后的提取液于 25mL 比色管中，加入 0.80mL5%亞硝酸鈉溶液，放置 6min后，加入 0.80mL10%硝酸鋁溶液，放置 6min 后，加入 5mL4%氫氧化鈉溶液，用乙醇定容至10mL，再放置 10min，以試劑為參比，在實(shí)驗(yàn) 1.2.3 所確定的 最大吸收波長下測定吸光度，平行測定三次，結(jié)果取平均值。按公式（1）計(jì)算金湯匙中黃酮的含量。黃酮提取率= 100% （1） 23105VMCV1=10mL ；V 2=0.50mL；C測量液中黃酮的濃度(g/mL)；M金湯匙粉末的質(zhì)量(g)1.3 單因素實(shí)驗(yàn)1.3.1 回流時(shí)間對(duì)中金湯匙黃酮提取率的影響 5取 1.0g 金湯匙粉末，按料液比 1:20、乙醇體積分?jǐn)?shù) 80%、溫度 80，分別在時(shí)間1.5h，2.0h，2.5h，3.0h，3.5h 下水浴加熱回流提取金湯匙中的黃酮，測定黃酮提取率，以確定最佳回流時(shí)間。1.3.2 提取溫度對(duì)金湯匙中黃酮提取率的影響 6取 1.0g 金湯匙粉末，按料液比 1:20、乙醇體積分?jǐn)?shù) 80%，用 1.3.1 所確定的最佳回流時(shí)間，分別在 50，60，70，80，90下，水浴加熱回流提取金湯匙中的黃酮，測定黃酮提取率，以確定最佳的提取溫度。1.3.3 料液比對(duì)金湯匙中黃酮提取率的影響 6取 1.0g 金湯匙粉末，用 1.3.1 和 1.3.2 所確定的最佳回流時(shí)間和提取溫度，乙醇體積分?jǐn)?shù)楚雄師范學(xué)院本科論文（設(shè)計(jì)）380%，分別在料液比（g/mL）1:10 ，1:20 ，1:30，1:40，1:50 下水浴加熱回流提取金湯匙中黃酮，測定黃酮提取率，以確定最佳的料液比。1.3.4 乙醇體積分?jǐn)?shù)金湯匙中黃酮提取率的影響 7取 1.0g 金湯匙粉末，用 1.3.1、1.3.2 和 1.3.3 所確定的最佳回流時(shí)間、提取溫度和料液比，分別在乙醇體積分?jǐn)?shù)為 40%，50%，60%，70% ，80%下水浴加熱回流提取金湯匙中的黃酮，測定黃酮提取率，以確定最佳的乙醇體積分?jǐn)?shù)。1.4 正交試驗(yàn) 8在上述單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，結(jié)合金湯匙中黃酮提取工藝的實(shí)際情況，選定提取溫度（70，80,90） ，提取時(shí)間（2h,2.5h,3h） ，料液比（1:30,1:40，1:50） ，乙醇濃度（40%，50%，60%）四因素三水平進(jìn)行正交試驗(yàn)，以黃酮提取率為指標(biāo)，優(yōu)化工藝條件。1.5 總黃酮提取液對(duì)羥基自由基（OH）的清除作用 9-10參照 fenton 反應(yīng)的方法建立反應(yīng)體系模型，利用 H2O2 與 Fe2+混合后長生存活時(shí)間短，具有很高反應(yīng)活性的OH 這一性質(zhì)，在反應(yīng)體系中加入水楊酸后，就能有效地捕捉 OH,并產(chǎn)生有色產(chǎn)物，該產(chǎn)物在 510nm 波長處有強(qiáng)吸收。若加入具有清除 OH 功能的黃酮類化合物時(shí)，黃酮類化合物便會(huì)與水楊酸競爭OH，從而使有色產(chǎn)物生成量減少。采用固定反應(yīng)時(shí)間法，在 500nm 波長處測定量含被測物反應(yīng)液的吸光度，并與空白液比較，便能測定被測物對(duì)OH 的清除作用。反應(yīng)體系為：在 10ml 比色管中加入 9mmol/LFeSO4 溶液 2.00mL， 9mmol/L 水楊酸- 乙醇溶液2.00mL,不同體積的金湯匙總黃酮提取液，在最后加入 8.8mmol/LH2O22.00mL 啟動(dòng)反應(yīng)，加蒸餾水定容至 10mL，讓反應(yīng)體系在 37的水浴中反應(yīng) 30min，以蒸餾水為參比，以試劑空白作比較，在500nm 處測定吸光度?？紤]到提取液本身的吸光度，在 10mL 比色管中加入 9mmol/LFeSO4 溶液2.00mL，9mmol/L 水楊酸-乙醇溶液 2.00mL，不同體積的金湯匙總黃酮提取液，加蒸餾水定容至10mL，讓反應(yīng)體系在 37的水浴中反應(yīng) 30min，作為提取液的本底吸收，按下式計(jì)算樣品液對(duì)羥基自由基的清除率：OH 清除率（%）=A 0-(AX-AX0)/A0100%式中：A 0為空白對(duì)照溶液吸光度； AX 為提取液吸光度；A X0 為不加 H2O2 提取液的本底吸光度。2 結(jié)果與分析2.1 最大吸收波長的選擇結(jié)果根據(jù)實(shí)驗(yàn) 1.2.3，在 440550nm 范圍內(nèi)對(duì)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行吸光度測定。以波長為橫坐標(biāo)，吸光度 A 為縱坐標(biāo)作圖，結(jié)果見圖 1。表 1 460530nm 范圍內(nèi)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度波長/nm 460 470 480 490 500 510 520 530吸光度 0.361 0.379 0.402 0.418 0.423 0.415 0.393 0.351楚雄師范學(xué)院本科論文（設(shè)計(jì)）4圖 1