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人力資源管理論文-自體和異體血液在全血分離實(shí)驗(yàn)體系中對(duì)免疫細(xì)胞因子的影響作者:夏曉峰郭峰錢(qián)寶華花美仙【摘要】目的:運(yùn)用系統(tǒng)血液免疫反應(yīng)分離實(shí)驗(yàn)體系,探討在抗原激活的情況下異體血細(xì)胞對(duì)反應(yīng)體系中細(xì)胞因子含量水平影響的變化規(guī)律。方法:以S180作為激活抗原,加異體血細(xì)胞與自體血細(xì)胞對(duì)比,37孵育1h,取上清液用ELISA法測(cè)定IL-8、TNF-、IFN-的分泌量。結(jié)果:IL-8的分泌量異體紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組(133.92135.85)%與自體紅細(xì)胞對(duì)照組(37.9327.74)%相比明顯上升(P0.05);TNF-的分泌量異體紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組(8.313.57)%與自體紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組(16.5510.38)%相比明顯下降(P0.05);IFN-分泌量無(wú)明顯差異。結(jié)論:異體紅細(xì)胞對(duì)自體血液免疫反應(yīng)細(xì)胞因子的分泌具有雙向調(diào)控作用,提示異體輸血對(duì)受者的血液免疫反應(yīng)具有干擾和失平衡的不良影響?!娟P(guān)鍵詞】淋巴細(xì)胞;紅細(xì)胞;抗原;免疫調(diào)控;細(xì)胞因子EffectsofAutogeneticandAllogenousBloodonCytokinesbyMeansofNaturalIsolatedExperimentalSystemAbstractObjectiveAutogeneticandallogenouserythrocytesregulatetheimmunologicalreactionsactivatedbyantigensbymeansofnaturalisolatedexperimentalsystem,toobservethechangesofcytokines.MethodsUsinginactivatedS180asactivatingantigenandautologousplasmaasreactionsubstratum,Afterincubationanhourin37,supernatefluidissuspendedanddetectedthechangeofIL-8、TNF-andIFN-byELISAassay.ResultsThesecretionofIL-8ofallogenouserythrocytesexperimentalgroup(133.92135.85)%ismuchhigherthanthatofautogeneicerythrocytescontrolgroup(37.9327.74)%(P0.05),ThelevelofTNF-ofallogenouserythrocytesexperimentalgroup(8.313.57)%ismuchlowerthanthatofautogeneicerythrocytesexperimentalgroup(16.5510.38)%(P0.05);theexpressionofIFN-紅細(xì)胞在天然免疫防御網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮著重要作用,紅細(xì)胞在補(bǔ)體系統(tǒng)天然免疫反應(yīng)的參與下有黏附和調(diào)理抗原、清除循環(huán)免疫復(fù)合物、調(diào)控淋巴細(xì)胞表達(dá)免疫分子和細(xì)胞因子等作用。有實(shí)驗(yàn)證明在庫(kù)存血中有多達(dá)14種以上炎性細(xì)胞因子,中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶和TNF-濃度的增加在臨床的異體輸血時(shí)都可造成免疫功能的不利影響1。結(jié)合了補(bǔ)體的病原體可以被紅細(xì)胞補(bǔ)體受體免疫分子黏附,激發(fā)對(duì)致病原發(fā)生連鎖的系統(tǒng)血液天然免疫反應(yīng),同時(shí)紅細(xì)胞還可參與相關(guān)免疫細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)。本實(shí)驗(yàn)研究是運(yùn)用全血分離實(shí)驗(yàn)體系2,通過(guò)ELISA的方法測(cè)定上清液中相關(guān)細(xì)胞因子IL-8、TNF-、IFN-分泌量在實(shí)驗(yàn)體系反應(yīng)中的變化,探討其可能存在的臨床意義。1材料與方法1.1材料1.1.1酸性枸櫞酸鈉葡萄糖溶液(acidcitratedextrose,ACD)抗凝的健康成人新鮮全血由解放軍上海血站提供。1.1.2磷酸鹽緩沖溶液(phosphatebufferedsolution,PBS)和癌細(xì)胞懸液(S180)由解放軍上海血站血液免疫研究室自行制備。1.1.3紅細(xì)胞裂解液(10)購(gòu)于深圳晶美生物公司。1.1.4IL-8、TNF-、IFN-酶聯(lián)免疫反應(yīng)試劑盒(ELISA法)購(gòu)于法國(guó)DIACLONE公司。1.2方法1.2.1血漿的分離制備采集新鮮的健康成人ACD抗凝全血10mL,室溫下2000r/min離心5min,吸取上層血漿至另一試管備用。1.2.2紅細(xì)胞懸液(RBC)的制備小心吸取沉底紅細(xì)胞100L,加入2mL生理鹽水溶液中洗滌,2000r/min離心5min,棄上清,全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù),光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察證實(shí)不含白細(xì)胞和血小板后,調(diào)整紅細(xì)胞懸液濃度為1108/mL。1.2.3白細(xì)胞懸液(WBC)的制備取全血細(xì)胞懸液1.6mL加4mL蒸餾水在冰水中輕輕混勻作用不超過(guò)1min,立即加4mL1.8%氯化鈉液混勻,2500r/min離心5min,棄上清,調(diào)整白細(xì)胞懸液濃度為1106/mL。1.3分離實(shí)驗(yàn)體系的設(shè)計(jì)和建立實(shí)驗(yàn)共分6只試管,以自體或異體血漿作為反應(yīng)基質(zhì),分離實(shí)驗(yàn)組以滅活腹水癌細(xì)胞S180作為激活抗原,其對(duì)照組加NS作為對(duì)照,即(注:*為加異體血漿組):0.1mL異體RBC+0.1mLS180+0.2mL自體WBC+0.3mL異體血漿*(加異體血漿)。0.1mL異體RBC+0.1mLS180+0.2mL自體WBC+0.3mL自體血漿(加自體血漿)。0.1mL異體RBC+0.1mLNS+0.2mL自體WBC+0.3mL異體血漿*(加異體血漿)。0.1mL異體RBC+0.1mLNS+0.2mL自體WBC+0.3mL自體血漿(加自體血漿)。0.1mL自體RBC+0.1mLS180+0.2mL自體WBC+0.3mL自體血漿(加自體血漿)。0.1mL自體RBC+0.1mLNS+0.2mL自體WBC+0.3mL自體血漿(加自體血漿)。將上述6只試管置于37水浴箱中溫育1h,加蓋,中間搖勻2次,間隔20min;完成后,2000r/min離心5min;小心取出上清液約400L裝入安瓿管中,編號(hào),置于-20冰箱中冷藏待測(cè)。1.4上清液細(xì)胞因子IL-8、TNF-、IFN-的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)前20min從冰箱中取出試劑盒和待測(cè)樣品,平衡至室溫(25),96孔板用包被緩沖液稀釋的試劑,每孔加100L,4過(guò)夜,洗板3次;加100L待檢樣品上清液于已包被的反應(yīng)孔中(同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照),37孵育1h,洗板3次;于反應(yīng)孔中加入新鮮稀釋的streptavidin-HRP100L,室溫下孵育20min,洗板3次;于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液100L,避光反應(yīng)20min使其顯色;于各反應(yīng)孔中加入2mol/L硫酸100L終止反應(yīng);在ELISA酶標(biāo)檢測(cè)儀上,于450nm處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔A值,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),并比較各孔實(shí)測(cè)值。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)以xs表示,統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用t檢驗(yàn)或方差分析,P0.05為差異顯著。2結(jié)果2.1IL-8、TNF-、IFN-分泌量(pg/mL)的變化在S180激活情況下,異體紅細(xì)胞能夠?qū)ψ泽w血液免疫反應(yīng)的細(xì)胞因
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