人力資源管理論文-自體和異體血液在全血分離實驗體系中對免疫細胞因子的影響.doc

人力資源管理論文-自體和異體血液在全血分離實驗體系中對免疫細胞因子的影響作者：夏曉峰郭峰錢寶華花美仙【摘要】目的：運用系統(tǒng)血液免疫反應分離實驗體系，探討在抗原激活的情況下異體血細胞對反應體系中細胞因子含量水平影響的變化規(guī)律。方法：以S180作為激活抗原，加異體血細胞與自體血細胞對比，37孵育1h，取上清液用ELISA法測定IL-8、TNF-、IFN-的分泌量。結果：IL-8的分泌量異體紅細胞實驗組（133.92135.85）%與自體紅細胞對照組（37.9327.74）%相比明顯上升（P0.05）；TNF-的分泌量異體紅細胞實驗組（8.313.57）%與自體紅細胞實驗組（16.5510.38）%相比明顯下降（P0.05）；IFN-分泌量無明顯差異。結論：異體紅細胞對自體血液免疫反應細胞因子的分泌具有雙向調(diào)控作用，提示異體輸血對受者的血液免疫反應具有干擾和失平衡的不良影響。【關鍵詞】淋巴細胞；紅細胞；抗原；免疫調(diào)控；細胞因子EffectsofAutogeneticandAllogenousBloodonCytokinesbyMeansofNaturalIsolatedExperimentalSystemAbstractObjectiveAutogeneticandallogenouserythrocytesregulatetheimmunologicalreactionsactivatedbyantigensbymeansofnaturalisolatedexperimentalsystem,toobservethechangesofcytokines.MethodsUsinginactivatedS180asactivatingantigenandautologousplasmaasreactionsubstratum,Afterincubationanhourin37,supernatefluidissuspendedanddetectedthechangeofIL-8、TNF-andIFN-byELISAassay.ResultsThesecretionofIL-8ofallogenouserythrocytesexperimentalgroup(133.92135.85)%ismuchhigherthanthatofautogeneicerythrocytescontrolgroup(37.9327.74)%(P0.05),ThelevelofTNF-ofallogenouserythrocytesexperimentalgroup(8.313.57)%ismuchlowerthanthatofautogeneicerythrocytesexperimentalgroup(16.5510.38)%(P0.05)；theexpressionofIFN-紅細胞在天然免疫防御網(wǎng)絡中發(fā)揮著重要作用，紅細胞在補體系統(tǒng)天然免疫反應的參與下有黏附和調(diào)理抗原、清除循環(huán)免疫復合物、調(diào)控淋巴細胞表達免疫分子和細胞因子等作用。有實驗證明在庫存血中有多達14種以上炎性細胞因子，中性粒細胞彈性蛋白酶和TNF-濃度的增加在臨床的異體輸血時都可造成免疫功能的不利影響1。結合了補體的病原體可以被紅細胞補體受體免疫分子黏附，激發(fā)對致病原發(fā)生連鎖的系統(tǒng)血液天然免疫反應，同時紅細胞還可參與相關免疫細胞分泌細胞因子的調(diào)節(jié)。本實驗研究是運用全血分離實驗體系2，通過ELISA的方法測定上清液中相關細胞因子IL-8、TNF-、IFN-分泌量在實驗體系反應中的變化，探討其可能存在的臨床意義。1材料與方法1.1材料1.1.1酸性枸櫞酸鈉葡萄糖溶液（acidcitratedextrose,ACD）抗凝的健康成人新鮮全血由解放軍上海血站提供。1.1.2磷酸鹽緩沖溶液（phosphatebufferedsolution,PBS）和癌細胞懸液（S180）由解放軍上海血站血液免疫研究室自行制備。1.1.3紅細胞裂解液（10）購于深圳晶美生物公司。1.1.4IL-8、TNF-、IFN-酶聯(lián)免疫反應試劑盒（ELISA法）購于法國DIACLONE公司。1.2方法1.2.1血漿的分離制備采集新鮮的健康成人ACD抗凝全血10mL，室溫下2000r/min離心5min，吸取上層血漿至另一試管備用。1.2.2紅細胞懸液（RBC）的制備小心吸取沉底紅細胞100L，加入2mL生理鹽水溶液中洗滌，2000r/min離心5min，棄上清，全自動血細胞分析儀計數(shù)，光學顯微鏡下觀察證實不含白細胞和血小板后，調(diào)整紅細胞懸液濃度為1108/mL。1.2.3白細胞懸液（WBC）的制備取全血細胞懸液1.6mL加4mL蒸餾水在冰水中輕輕混勻作用不超過1min，立即加4mL1.8%氯化鈉液混勻，2500r/min離心5min，棄上清，調(diào)整白細胞懸液濃度為1106/mL。1.3分離實驗體系的設計和建立實驗共分6只試管，以自體或異體血漿作為反應基質(zhì)，分離實驗組以滅活腹水癌細胞S180作為激活抗原，其對照組加NS作為對照，即（注：*為加異體血漿組）：0.1mL異體RBC+0.1mLS180+0.2mL自體WBC+0.3mL異體血漿*（加異體血漿）。0.1mL異體RBC+0.1mLS180+0.2mL自體WBC+0.3mL自體血漿（加自體血漿）。0.1mL異體RBC+0.1mLNS+0.2mL自體WBC+0.3mL異體血漿*（加異體血漿）。0.1mL異體RBC+0.1mLNS+0.2mL自體WBC+0.3mL自體血漿（加自體血漿）。0.1mL自體RBC+0.1mLS180+0.2mL自體WBC+0.3mL自體血漿（加自體血漿）。0.1mL自體RBC+0.1mLNS+0.2mL自體WBC+0.3mL自體血漿（加自體血漿）。將上述6只試管置于37水浴箱中溫育1h，加蓋，中間搖勻2次，間隔20min；完成后，2000r/min離心5min；小心取出上清液約400L裝入安瓿管中，編號，置于-20冰箱中冷藏待測。1.4上清液細胞因子IL-8、TNF-、IFN-的檢測實驗前20min從冰箱中取出試劑盒和待測樣品，平衡至室溫（25），96孔板用包被緩沖液稀釋的試劑，每孔加100L，4過夜，洗板3次；加100L待檢樣品上清液于已包被的反應孔中（同時做空白、陰性及陽性孔對照），37孵育1h，洗板3次；于反應孔中加入新鮮稀釋的streptavidin-HRP100L，室溫下孵育20min，洗板3次；于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液100L，避光反應20min使其顯色；于各反應孔中加入2mol/L硫酸100L終止反應；在ELISA酶標檢測儀上，于450nm處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔A值，繪制標準曲線，并比較各孔實測值。1.5統(tǒng)計學處理數(shù)據(jù)以xs表示，統(tǒng)計學處理采用t檢驗或方差分析，P0.05為差異顯著。2結果2.1IL-8、TNF-、IFN-分泌量（pg/mL）的變化在S180激活情況下，異體紅細胞能夠?qū)ψ泽w血液免疫反應的細胞因