代謝組學(xué)技術(shù)及其在中藥研究中的應(yīng)用.ppt

代謝組學(xué)技術(shù)及其在 中藥研究中的應(yīng)用,Wuhan university,武漢大學(xué) 周本宏,代謝組學(xué) 概 念,是生物體或細(xì)胞在外源性物質(zhì)或病理生理刺激和遺傳因素改變的條件下，內(nèi)源性代謝物會(huì)發(fā)生變化，利用現(xiàn)代分析方法對(duì)體液、細(xì)胞或組織中的所有低分子量?jī)?nèi)源性代謝物組（endogenousmetabolites）進(jìn)行定性、定量分析，定量檢測(cè)其代謝變化，通過(guò)測(cè)定整個(gè)機(jī)體的系統(tǒng)代謝圖譜來(lái)探討基因功能調(diào)控機(jī)制的學(xué)科,Wuhan university,吸收,分布,代謝,排泄,內(nèi)源性代謝物改變,藥物,外源性代謝產(chǎn)物,內(nèi)源性代謝產(chǎn)物是基因表達(dá)的終產(chǎn)物，代謝組學(xué)所關(guān)注的是相對(duì)分子質(zhì)量為1,000以下的小分子物質(zhì),Wuhan university,病理生理的變化,歷史沿革,英國(guó)帝國(guó)理工大學(xué)J.K Nicholson教授的研究小組利用核磁共振(NMR)技術(shù)分析大鼠的尿液, 并于1999年J.K Nicholson教授等3名科研人員共同發(fā)表了一篇“代謝組學(xué)”研究論文，一個(gè)新的學(xué)科從此誕生，Nicholson教授也由于其在代謝組學(xué)發(fā)展中的開(kāi)拓性的貢獻(xiàn)，而被譽(yù)為“國(guó)際代謝組學(xué)之父”,Wuhan university,歷史沿革,是繼基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄物組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)之后的一門新型學(xué)科，是系統(tǒng)生物學(xué)的重要組成部分 系統(tǒng)生物學(xué)（system biology）研究的四個(gè)層次：,Wuhan university,系 統(tǒng) 生 物 學(xué),基因與蛋白質(zhì)的表達(dá)緊密相連,代謝物則更多地反映了細(xì)胞所處的環(huán)境。正如Billy David所言:“基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)告訴你可能發(fā)生什么,而代謝組學(xué)則告訴你已經(jīng)發(fā)生了什么”,歷史沿革,Wuhan university,歷史沿革,1999年Nicholson首次提出了以NMR分析為主的代謝組學(xué)研究模式并聯(lián)合國(guó)際六大醫(yī)藥公司（Bristol-Meyers-Squibb,Eli lilly,Hoffmann-laRoche,NovoNordisk, Pfizer,Pharmacia）英國(guó)帝國(guó)學(xué)院（Imperial College,London）面對(duì)風(fēng)險(xiǎn)的挑戰(zhàn)，于2001年組織并公布了一個(gè)研究計(jì)劃COMET（Consortium for Metabonomic Toxicology）,應(yīng)用代謝物組學(xué)評(píng)價(jià)藥物毒性，進(jìn)行候選藥物的臨床前毒性篩選，進(jìn)而對(duì)廣泛模型化合物評(píng)價(jià)和安全性預(yù)測(cè)，以縮短藥物開(kāi)發(fā)的時(shí)間，減少損失.3年中對(duì)大鼠和小鼠的尿液用NMR分析研究了150個(gè)肝腎毒性模型,Wuhan university,歷史沿革,自2002年第一屆國(guó)際植物代謝組學(xué)大會(huì)在荷蘭瓦赫寧根召開(kāi)以來(lái)，植物代謝組學(xué)分析技術(shù)和方法發(fā)展迅速已開(kāi)始應(yīng)用于植物科學(xué)研究、生物安全性評(píng)價(jià)等多個(gè)領(lǐng)域，在基因功能研究、代謝途徑及代謝網(wǎng)絡(luò)調(diào)控機(jī)理的解析等方面發(fā)揮重要作用 我國(guó)植物代謝組學(xué)的研究于2005年前后開(kāi)始起步，目前已形成較好的發(fā)展趨勢(shì),Wuhan university,代謝組學(xué)研究的優(yōu)勢(shì),與研究蛋白組或基因組相比，研究代謝組具有許多優(yōu)勢(shì)： (1)生物體的小分子代謝產(chǎn)物所構(gòu)成的代謝組要比轉(zhuǎn)錄物組蛋白組簡(jiǎn)單得多(例如釀酒酵母有6 000多個(gè)基因，但代謝物僅有600個(gè))，那么分析代謝組就降低了樣本的復(fù)雜性； (2)對(duì)多數(shù)小分子內(nèi)源性代謝產(chǎn)物的作用及其所在代謝通路代謝調(diào)控已有相當(dāng)?shù)恼J(rèn)識(shí)，而目前對(duì)基因功能與調(diào)控的認(rèn)識(shí)仍相當(dāng)有限,Wuhan university,代謝組學(xué)研究的優(yōu)勢(shì),(3)代謝組是基因功能活動(dòng)的終點(diǎn)。代謝控制理論和實(shí)驗(yàn)證明在一個(gè)生化反應(yīng)中，雖然酶的濃度和代謝通量不會(huì)發(fā)生重大變化，但是代謝物的濃度會(huì)發(fā)生很大變化，因此針對(duì)代謝變化重大的代謝物進(jìn)行分析更加直觀，也更加敏感 代謝組是基因表達(dá)的下游產(chǎn)物，所以它更能正確地反映細(xì)胞的功能水平，與蛋白組或基因組相比，代謝組具有終點(diǎn)放大的特征。研究表明代謝通量不僅受基因表達(dá)控制，而且還受環(huán)境的調(diào)節(jié)，因此，測(cè)量下游產(chǎn)物代謝物較為合適從這一角度分析，代謝組包含的信息量要大于基因組、蛋白組學(xué),Wuhan university,代謝組學(xué)研究的優(yōu)勢(shì),(4)代謝組變化揭示的是系列關(guān)聯(lián)生物標(biāo)記物(biomarker)的綜合差異，要比傳統(tǒng)依賴單一標(biāo)志物的診斷方法具有更高的準(zhǔn)確性，而且其最小限度的侵入性以及時(shí)空動(dòng)態(tài)性，是基因組和蛋白組學(xué)研究所無(wú)法比擬的。 (5)代謝物譜在不同生物樣本中基本上都是一樣的，再加上其檢測(cè)技術(shù)的多樣性，代謝組學(xué)的研究具有較好的便利性,Wuhan university,代謝組學(xué)研究的特點(diǎn),代謝組學(xué)作為一門新興學(xué)科，概括起來(lái)具有以下特點(diǎn): 對(duì)機(jī)體損傷小，其檢測(cè)的體液主要是尿液與血液； 信息量大，代謝組學(xué)能夠提供整個(gè)機(jī)體功能統(tǒng)一性信息； 檢測(cè)更容易，基因和蛋白質(zhì)表達(dá)的有效的微量變化會(huì)在代謝物上得到放大； 無(wú)需特征化的數(shù)據(jù)庫(kù)； 檢測(cè)物種類少，代謝物的種類數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于基因和蛋白數(shù)目 代謝物產(chǎn)物具有通用性； 能夠反映生理病理狀態(tài),Wuhan university,研究方法,代謝組學(xué)研究步驟包括： 樣品采集與制備； 樣品分析與鑒定； 數(shù)據(jù)處理與分析； 生物標(biāo)志物（Markers）分析,Wuhan university,Wuhan university,研究方法,樣品采集與制備： 采集后的樣品需首先進(jìn)行預(yù)處理，而且整個(gè)預(yù)處理過(guò)程應(yīng)盡可能保留和體現(xiàn)樣品中完整的代謝物組分信息。 組織樣品取樣后，由于酶活性和氧化過(guò)程的繼續(xù)，會(huì)引起代謝物的生成和改變，故樣品需即時(shí)用液氮冷凍，低溫（-80）貯存。血和尿樣也應(yīng)在-80保存，尿樣中還要加疊氮化鈉抑菌,Wuhan university,研究方法,尿樣或稀釋的尿樣可直接進(jìn)樣，優(yōu)點(diǎn)是在樣品制備時(shí)，代謝物沒(méi)有損傷，高通量。缺點(diǎn)是直接用ESI/MS分析時(shí)，鹽類有抑制作用（代謝物之間也會(huì)相互抑制），在ESI過(guò)程中生成加合物，不揮發(fā)物的積累會(huì)降低儀器性能。 血液和尿樣常用甲醇、乙腈或混合溶劑沉淀蛋白，離心后取上清液進(jìn)行分析或除去溶劑后，用LC流動(dòng)相溶解后分析 溶劑萃取應(yīng)用得最早，冷凍的組織樣品常用溶劑萃取，樣品需要在冷凍情況下粉碎，選用極性與非極性溶劑的結(jié)合如甲醇/氯仿，可形成雙相，分別對(duì)水溶性及脂溶性相進(jìn)行分析,Wuhan university,研究方法,樣品分析與鑒定： 近年來(lái)，各種分離分析手段如色譜、質(zhì)譜、核磁共振（NMR）、毛細(xì)管電泳、紅外光譜等及其聯(lián)用技術(shù)都應(yīng)用于代謝組學(xué)的研究中，其中最常用的分析技術(shù)是NMR技術(shù)和GC-MS、LC-MS等各種聯(lián)用技術(shù)。NMR方法具有無(wú)損傷性，無(wú)偏向性等特點(diǎn)，但其靈敏度較低；GC-MS方法具有較高的分辨率和檢測(cè)靈敏度，并且有標(biāo)準(zhǔn)譜圖庫(kù)可以對(duì)照，但對(duì)于揮發(fā)性較低的代謝產(chǎn)物需要進(jìn)行衍生化處理，且預(yù)處理過(guò)程相對(duì)繁瑣；LC-MS方法具有良好的客觀性、選擇性和分辨率，避免了GC-MS中衍生化等繁瑣的預(yù)處理過(guò)程,Wuhan university,研究方法,數(shù)據(jù)處理與分析： 代謝組學(xué)是通過(guò)數(shù)據(jù)引導(dǎo)的一門學(xué)科，數(shù)據(jù)處理與分析技術(shù)在代謝組學(xué)研究中具有至關(guān)重要的作用。這就要求充分運(yùn)用化學(xué)計(jì)量學(xué)理論和多元統(tǒng)計(jì)分析新方法對(duì)采集的多維海量原始數(shù)據(jù)進(jìn)行壓縮降維和歸類以實(shí)現(xiàn)從大量的原始數(shù)據(jù)中挖掘出隱含其中的有效信息，最終實(shí)現(xiàn)代謝模式的正確識(shí)別,Wuhan university,研究方法,數(shù)據(jù)處理與分析 模式識(shí)別技術(shù)主要分為2大類：非監(jiān)督（un-supervised）學(xué)習(xí)方法和有監(jiān)督（supervised）學(xué)習(xí)方法。非監(jiān)督學(xué)習(xí)方法主要適用于在不具備任何相關(guān)背景知識(shí)的情況下，進(jìn)行生物樣本的類別判斷和生物標(biāo)志物識(shí)別。常用的方法有主成分分析法（PCA）、非線性映射（NLM）、簇類分析（HCA）等。其中以PCA方法最為常用，PCA的原理是將高維數(shù)據(jù)降維，并將數(shù)據(jù)投影變換到變異最大的主軸上，從而提取出數(shù)據(jù)集的特征，它對(duì)所用的數(shù)據(jù)進(jìn)行無(wú)歧視的分析，無(wú)論是內(nèi)源性物質(zhì)，還是外源性物質(zhì)的代謝產(chǎn)物峰都能進(jìn)行分析，是目前代謝組學(xué)數(shù)據(jù)處理的主要方法,Wuhan university,研究方法,數(shù)據(jù)處理與分析 有監(jiān)督學(xué)習(xí)方法用于建立類別間的數(shù)學(xué)模型，使各類樣品間達(dá)到最大的分離，并利用建立的多參數(shù)模型對(duì)未知的樣本進(jìn)行預(yù)測(cè)。常用的方法有偏最小二乘法（PLS）、軟獨(dú)立建模分類法（SIMCA）、偏最小二乘法顯著性分析（PLS-DA）和人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)（ANN）技術(shù)等其中最常用的也是最基礎(chǔ)的分析方法是PLS,Wuhan university,代謝組學(xué)各分析流程技術(shù),Wuhan university,代組學(xué)相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù),Wuhan university,在中醫(yī)藥研究中的應(yīng)用,評(píng)價(jià)藥物的毒性 藥物的安全性研究 中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制研究 中醫(yī)證候模型的研究 中藥質(zhì)量控制研究 中藥活性成分代謝產(chǎn)物研究 中藥及其復(fù)方的多靶點(diǎn)藥效作用機(jī)制研究等,Wuhan university,基于代謝組學(xué)的中藥整體藥效研究,代謝組是生物體整體功能狀態(tài)的“生化表型”，因而對(duì)于表征中藥“多組份、多靶點(diǎn)弱效應(yīng)協(xié)同、有機(jī)整合整體效應(yīng)”具有突出優(yōu)勢(shì),Wuhan university,不足之處,分析手段有限，尚無(wú)任何一個(gè)分析技術(shù)能夠同時(shí)對(duì)所有代謝物進(jìn)行分析。尚無(wú)有效數(shù)據(jù)分析手段將所得到的全部信息進(jìn)行分析和解釋 數(shù)據(jù)庫(kù)很不完善 缺乏代謝產(chǎn)物數(shù)據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)值 另外樣品之間的差異、儀器動(dòng)力學(xué)范圍的局限和分析誤差的存在也給代謝組學(xué)分析帶來(lái)巨大的挑戰(zhàn)。因此在取樣方法,新型分析儀器和分析技術(shù)等方面，都需要有很多進(jìn)一步深入的工作,Wuhan university,雄黃、朱砂 國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中收載含朱砂、雄黃的中成藥占收載的全部的中成方制劑的6.34% 應(yīng)用廣泛，歷史悠久 有效和有毒的雙重性 安全性倍受關(guān)注,Wuhan university,Wei等采用代謝組學(xué)的方法對(duì)雄黃、朱砂的毒性進(jìn)行了研究： 雄性Wistar大鼠灌胃給藥； 采集尿液； 1H NMR對(duì)代謝物進(jìn)行分析； 生物標(biāo)志物的分析；,Lai Wei, Peiqiu Liao,et al Toxicology and Applied Pharmacology 234 (2009) 314325,結(jié)果表明: 尿液中，三羧酸循環(huán)中間產(chǎn)物檸檬酸鹽(citrate)、琥珀酸鹽(succinate)、2酮戊二酸鹽(2-ketoglutarate)顯著增加；乙酸乙酯、?；撬?taurine)、丙酮顯著增加，并伴隨著二甲基甘氨酸(dimethylglycine)、丙酮酸(pylllvate)和腸道菌產(chǎn)物苯乙尿酸(phenylacetylglycine)、馬尿酸鹽(hippurate)等內(nèi)源性代謝產(chǎn)物的減少，且這些內(nèi)源性代謝產(chǎn)物的變化呈現(xiàn)時(shí)間和劑量依賴性。 二甲基甘氨酸為腎乳頭的毒性標(biāo)志物，丙酮為腎臟皮層S3段的毒性標(biāo)志物。?；撬釣楦闻K受損的指標(biāo)上述代謝產(chǎn)物分析表明，對(duì)肝腎具有一定的毒性,Schematic representation of the energy metabolic network,. Schematic representation of the degradation pathway of choline,朱砂主要成分為HgS，雄黃主要成分為As2S2 朱砂、雄黃在人體內(nèi)的毒性程度與以下因素相關(guān)： （1）在體內(nèi)產(chǎn)生的可溶性砷、汞量 （2）上述可溶性的砷、汞在體內(nèi)的存在價(jià)態(tài),Wuhan university,砷的不同價(jià)態(tài)及其毒性： 砷化氫（AsH3）亞砷酸(As)和砷酸(As) 甲基砷酸()和二甲基砷酸() 胂甜菜堿()和胂膽堿() 基本無(wú)毒 汞的不同價(jià)態(tài)及其毒性 ： 甲基汞乙基汞Hg2+Hg,Wuhan university,有研究表明，含朱砂、雄黃的中藥制劑經(jīng)口服后，其所含的砷或汞基本不被人體吸收。實(shí)驗(yàn)表明：在糞便中所檢測(cè)到的總砷、總汞，分別占給藥量的99和98.5 因此僅以砷、汞元素的總量作為判斷其是否安全是不科學(xué)的 研究雄黃中砷、朱砂中汞在體內(nèi)可溶性部分的含量及其可溶性的砷、汞在體內(nèi)的存在價(jià)態(tài)，合理評(píng)價(jià)該類藥物，保證含朱砂、雄黃中成藥的安全性和有效性,Wuhan university,復(fù)方黃黛片的主要成分,四硫化四砷雄黃 靛玉紅青黛 丹參酮II-A -丹參,四硫化四砷 Tetraarsenic tetrasulfide,靛玉紅 Indirubin,丹參酮II-A,治療急性早幼粒細(xì)胞白血病(APL)的現(xiàn)代中藥配方制劑,本課題組關(guān)于代謝組學(xué)的實(shí)驗(yàn)研究,基于代謝組學(xué)的天麻川芎 藥對(duì)配伍研究,Wuhan university,研究背景-天麻 川芎,Wuhan university,成分：酚類，甾醇類、有機(jī) 酸、氨基酸類 藥理作用：鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗驚厥,成分：揮發(fā)油、生物堿、酚性物質(zhì)、苯酞內(nèi)酯 藥理作用：鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛 、抗凝血,天麻,川芎,研究背景-天麻川芎 藥對(duì),配伍依據(jù)： 疾病特點(diǎn) 藥性及藥效,作用： 減少藥物毒性 增強(qiáng)藥效,藥對(duì),偏頭痛多屬于內(nèi)傷類頭痛，常和“風(fēng)”有關(guān) 天麻川芎藥對(duì)恰合偏頭痛的病機(jī),天麻能祛風(fēng)濕以 止痛、平肝熄風(fēng)以止痙,川芎具有活血、行氣、 祛風(fēng)、止痛的功效,Wuhan university,研究背景-天麻川芎 藥對(duì),藥對(duì)是古代醫(yī)家應(yīng)用在中藥復(fù)方中的一種特殊形式，是中藥復(fù)方的最小單位，其配伍的規(guī)律及作用機(jī)制是現(xiàn)代中藥研究的熱點(diǎn)之一。 天麻和川芎常作為藥對(duì)使用，是歷代醫(yī)家用于治療偏頭痛、眩暈的經(jīng)典藥對(duì)組合 ，不過(guò)不同時(shí)期各大醫(yī)家對(duì)其配伍比例卻不盡相同，用法也各異在本草綱目等古代本草書(shū)籍中，記載的天麻川芎用量之比最常見(jiàn)的比例為1:4和4:1 ，其中天麻川芎用量之比1:4最為常見(jiàn),Wuhan university,研究?jī)?nèi)容,Wuhan university,藥材分組： 天麻組 川芎組 天麻川芎A組（天麻：川芎=1:4） 天麻川芎B組（天麻：川芎=4:1） 提取方法： 10倍量70%乙醇 提取時(shí)間1h 提取3次,一、天麻川芎不同配伍比例對(duì)有效成分提取的影響,-天麻川芎不同配伍比例對(duì)有效成分提取的影響,Wuhan university,流動(dòng)相：甲醇-水( 50:50) 檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm； 柱溫：25； 流速：0.8mL.min-1,川芎嗪的含量測(cè)定,-天麻川芎不同配伍比例對(duì)有效成分提取的影響,Wuhan university,川芎嗪含量測(cè)定結(jié)果,-天麻川芎不同配伍比例對(duì)有效成分提取的影響,Wuhan university,流動(dòng)相:水:甲醇:冰乙酸(95：5：1) 流速: 0. 8mLmin-1 檢測(cè)波長(zhǎng): 270nm 柱溫：25,天麻素含量測(cè)定,-天麻川芎不同配伍比例對(duì)有效成分提取的影響,Wuhan university,天麻素含量測(cè)定結(jié)果,結(jié)論,天麻川芎配伍后有利于其有效成分的溶出 其中川芎嗪含量的提高比天麻素明顯,藥對(duì)配伍比例會(huì)影響到有效成分的溶出率其中天麻川芎用量之比1:4時(shí)其有效成分的溶出率相對(duì)較高,Wuhan university,二、天麻川芎藥對(duì)對(duì)大鼠尿液內(nèi)源性代謝時(shí)間軌跡分析,Wuhan university,正常對(duì)照組 川芎組 天麻組 天麻川芎 A組 天麻川芎B組,正常對(duì)照組： 給予生理鹽水 其余各組： 給予藥材提取液,代謝籠采集大鼠尿液 甲醇去蛋白，離心,1.動(dòng)物分組,2.灌胃給藥,3.尿樣采集,Wuhan university,流動(dòng)相：乙腈(A)、0.1甲酸(B)，流速：0.4 mLmin-1， 進(jìn)樣量：3L，柱溫：35，梯度洗脫條件如下表：,毛細(xì)管電壓為4000V；霧化器壓力為40 psi； 干燥氣流速：10Lmin-1，干燥氣溫度：350,4. LC-MS數(shù)據(jù)采集,Wuhan university,將LC-MS原始數(shù)據(jù)進(jìn)行轉(zhuǎn)化后 導(dǎo)入SIMCA-P軟件、MATLAB軟件進(jìn)行主成分分析,5. 數(shù)據(jù)分析,主成分分析法： 將許多相關(guān)的變量轉(zhuǎn)為少數(shù)幾個(gè)彼此獨(dú)立的綜合指標(biāo)的統(tǒng)計(jì)方法 它讓多個(gè)變量的復(fù)雜關(guān)系變得簡(jiǎn)單，有利于獲取其中最有效的數(shù)據(jù),在進(jìn)行主成分分析后，可在80以上的精度下，用2-3個(gè)新 變量取代原來(lái)的n個(gè)變量,單擊此處添加標(biāo)題,由原始變量的觀測(cè)數(shù)據(jù)計(jì)算前 k個(gè)主成分的得分，將其作為 主成分F1，F(xiàn)2，F(xiàn)k的觀 測(cè)值，來(lái)建立Y 與主成分 回歸方程,生成得分圖,生成載荷圖,分類信息,尋找生物標(biāo)志物,Wuhan university,單擊此處添加標(biāo)題,通過(guò)得分矩陣可得到得分圖 (Scores Plot) 在得分圖上，樣本得分點(diǎn)之間的距離越大表明樣本之間的差異越大，大鼠尿液的代謝物狀態(tài)差異越大 C0，C1，C2，C3，C4分別表示正常對(duì)照組大鼠在第1，8，15, 22, 29天收集的尿液樣本；A0，A1，A2，A3, A4分別表示給藥組大鼠在第1，8，15, 22, 29天收集的尿液樣本,Wuhan university,實(shí)驗(yàn)結(jié)果,Wuhan university,天麻組SIMCA-P平面得分圖,天麻組MATLAB平面得分圖,川芎組SIMCA-P平面得分圖,川芎組MATLAB平面得分圖,Wuhan university,天麻川芎A組SIMCA-P平面得分圖,天麻川芎A組MATLAB平面得分圖,天麻川芎B組MATLAB平面得分圖,天麻川芎B組SIMCA-P平面得分圖,小 結(jié),給藥時(shí)間為29天時(shí)， 各給藥組大鼠內(nèi)源性代謝整體變化最大,兩種軟件主成分分析得到的結(jié)果是一致的,SIMCA-P軟件比MATLAB軟件更適合 在醫(yī)藥學(xué)研究中使用,Wuhan university,三、天麻川芎藥對(duì)對(duì)偏頭痛模型大鼠內(nèi)源性物質(zhì)代謝影響,Wuhan university,正常對(duì)照組、模型組、 天麻組、川芎組 天麻川芎A組、天麻川芎B組 陽(yáng)性對(duì)照組 正常對(duì)照組、模型組給予生理鹽水 陽(yáng)性對(duì)組給予陽(yáng)性藥物 其余各組分別給予相應(yīng)的藥材提取液 除了正常對(duì)照組，各組大鼠均在給藥后于 右肩部注射硝酸甘油注射劑（10mg.kg-1） 尿液收集及數(shù)據(jù)采集方法同前,動(dòng)物分組,動(dòng)物給藥,動(dòng)物造模,尿液、數(shù)據(jù)采集,天麻川芎藥對(duì)對(duì)偏頭痛模型大鼠內(nèi)源性物質(zhì)代謝影響,偏最小二乘法-判別分析（PLS-DA） 與PCA分析相似，都是為了提取出主成分，簡(jiǎn)化數(shù)據(jù) 與主成分的不同點(diǎn)是加入啞變量（分組信息）來(lái)引導(dǎo)分類,天麻川芎藥對(duì)對(duì)偏頭痛模型大鼠內(nèi)源性物質(zhì)代謝的影響,Wuhan university,基于代謝組學(xué)的硝酸甘油致偏頭痛大鼠模型驗(yàn)證分析,正常對(duì)照組與偏頭痛模型的PLS-DA平面得分圖與三維得分圖,正常對(duì)照組與偏頭痛模型的PCA平面得分圖與三維得分圖,天麻川芎藥對(duì)對(duì)偏頭痛模型大鼠內(nèi)源性物質(zhì)代謝的影響,Wuhan university,不同配伍比例的天麻川芎藥對(duì)對(duì)偏頭痛大鼠尿液內(nèi)源性物質(zhì)的影響,1：正常對(duì)照組；2：陽(yáng)性對(duì)照組；3：天麻川芎A組； 4：天麻川芎B組；5：川芎組；:6：天麻組；:7：模型組,天麻川芎藥對(duì)對(duì)偏頭痛模型大鼠內(nèi)源性物質(zhì)代謝的影響,Wuhan university,1：正常對(duì)照組；2：陽(yáng)性對(duì)照組；3：天麻川芎A組； 4：天麻川芎B組；5：川芎組；:6：天麻組；:7：模型組,天麻川芎藥對(duì)對(duì)偏頭痛模型大鼠內(nèi)源性物質(zhì)代謝的影響,Wuhan university,天麻川芎A組對(duì)偏頭痛大鼠尿液內(nèi)源性物質(zhì)代謝途徑的影響,正常對(duì)照組（藍(lán)），陽(yáng)性對(duì)照組（綠），天麻川芎A組（橙）與模型組（紅） PCA平面得分圖與三維得分圖,天麻川芎藥對(duì)對(duì)偏頭痛模型大鼠內(nèi)源性物質(zhì)代謝的影響,Wuhan university,正常對(duì)照組，陽(yáng)性對(duì)照組，天麻川芎A組與模型組PCA載荷圖,5.生物標(biāo)志物的尋找與鑒定 載荷圖中距離原點(diǎn)越遠(yuǎn)的點(diǎn)，表示其代表的變量對(duì)分類的 貢獻(xiàn)越大，越有可能成為潛在的生物標(biāo)志物,天麻川芎藥對(duì)對(duì)偏頭痛模型大鼠內(nèi)源性物質(zhì)代謝的影響,Wuhan university,正常對(duì)照組，陽(yáng)性對(duì)照組，天麻川芎A組與模型組PLS-DA載荷圖,天麻川芎藥對(duì)對(duì)偏頭痛模型大鼠內(nèi)源性物質(zhì)代謝的影響,Wuhan university,正常對(duì)照組，陽(yáng)性對(duì)照組，天麻川芎A組與模型組PLS-DA的VIP柱狀圖,VIP值表,VIP值可評(píng)價(jià)PLS-DA模型中變量的重要程度， VIP值越大，顯示變量對(duì)模型越是重要 選取VIP值大于1的變量作為候選生物標(biāo)志物 隨后根據(jù)質(zhì)譜信息及數(shù)據(jù)庫(kù)等方法尋找生物標(biāo)志物,天麻川芎藥對(duì)對(duì)偏頭痛模型大鼠內(nèi)源性物質(zhì)代謝的影響,Wuhan university,硫辛酰胺質(zhì)譜圖,該化合物的分子量為205.0，根據(jù)氮元素規(guī)則可知，該化合物應(yīng)含有奇數(shù)個(gè)氮原子 通過(guò)質(zhì)譜分析其主要碎片離子為189.1,161.0,推測(cè)可能是分子離子峰先失去一個(gè)