專題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用

專題2 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)目標(biāo)聚焦1知道培養(yǎng)基的種類、營養(yǎng)要素、配制原則2掌握消毒滅菌的原理和方法3嘗試用牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基進(jìn)行大腸桿菌的純化培養(yǎng)精例點(diǎn)撥【例1】關(guān)微生物營養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的是A是碳源的物質(zhì)不可能同時(shí)是氮源B凡碳源都提供能量C除水以外的無機(jī)物只提供無機(jī)鹽D無機(jī)氮源也能提供能量【解析】不同的微生物，所需營養(yǎng)物質(zhì)有較大差別，要針對微生物的具體情況分析。對于A、B選項(xiàng)，它的表達(dá)是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同時(shí)是氮源，如NH4HCO3；有的碳源同時(shí)是能源，如葡萄糖；有的碳源同時(shí)是氮源，也是能源，如蛋白胨。對于C選項(xiàng)，除水以外的無機(jī)物種類繁多，功能也多樣。如二氧化碳，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源；NaHCO3，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源和無機(jī)鹽；而NaCl則只能提供無機(jī)鹽。對于D選項(xiàng)，無機(jī)氮源提供能量的情況還是存在的，如NH3可為硝化細(xì)菌提供能量和氮源。答案：D【例】培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實(shí)驗(yàn)操作者的雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌、消毒方法依次是 ( )化學(xué)消毒 灼燒滅菌 干熱滅菌 紫外線滅菌 高壓蒸汽滅菌 巴氏消毒法 A B C D【解析】培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌；培養(yǎng)皿能耐高溫，需用干熱滅菌；接種環(huán)可用灼燒滅菌達(dá)到迅速徹底的滅菌效果；實(shí)驗(yàn)操作者的雙手可用化學(xué)藥劑進(jìn)行消毒，如用酒精擦拭雙手；空氣可用紫外線消毒；牛奶為不破壞其營養(yǎng)成分可采用巴氏消毒法。答案：A?！纠筷P(guān)于制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的敘述，錯(cuò)誤的是 ( )A操作順序?yàn)橛?jì)算、稱量、溶化、倒平板、滅菌B將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放人燒杯C待培養(yǎng)基冷卻至50左右時(shí)進(jìn)行倒平板D待平板冷卻凝固約510min后將平板倒過來放置 -【解析】制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的步驟是計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板，不能顛倒；牛肉膏容易吸潮，所以當(dāng)牛肉膏溶化并與稱量紙分離后，用玻璃棒取出稱量紙；待培養(yǎng)基冷卻至50，用手觸摸錐形瓶剛剛不燙手，并且培養(yǎng)基處于溶化狀態(tài)；平板冷卻幾分鐘后還需倒置。答案：A。【例】為了檢測飲用水中是否含有某種細(xì)菌，配制了如下表培養(yǎng)基配方：蛋白胨乳糖蔗糖K2HPO4伊紅 Y莢藍(lán)蒸餾水PH10g5g5g2g04g0.065 g100 mL72(1)該培養(yǎng)基所含的碳源有 ，其功能是 。(2)該培養(yǎng)基所含的氮源有 ，其功能是 。(3)該培養(yǎng)基除含碳源、氮源外，還有微生物需要的營養(yǎng)物質(zhì)是 。(4)該細(xì)菌的同化作用類型是 。(5)該培養(yǎng)基可用來鑒別哪種細(xì)菌?( )A霉菌 B大腸桿菌C母菌 D乳酸菌【解析】對于異養(yǎng)型微生物來說，含C、H、O、N的物質(zhì)，既是碳源，也是氮源。各類微生物的最適PH不同，酵母菌、霉菌適宜在偏酸(pH為4560)環(huán)境中生長。伊紅、美藍(lán)是鑒別大腸桿菌的物質(zhì)。答案，(1)乳糖、蔗糖、蛋白胨；主要用于構(gòu)成細(xì)胞物質(zhì)和代謝產(chǎn)物。(2)蛋白胨；主要用于合成蛋白質(zhì)、核酸以及含氮的代謝產(chǎn)物。(3)水、無機(jī)鹽。(4)異養(yǎng)型。(5)B?！纠肯旅鎸Πl(fā)酵工程中滅菌的理解不正確的是A防止雜菌污染 B消滅雜菌C培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備都必須滅菌 D滅菌必須在接種前【解析】滅菌是微生物發(fā)酵過程的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。A說的是滅菌的目的，因?yàn)榘l(fā)酵所用的菌種大多是單一的純種，整個(gè)發(fā)酵過程不能混入其他微生物（雜菌），所以是正確的；B是錯(cuò)誤的，因?yàn)闇缇哪康氖欠乐闺s菌污染，但實(shí)際操作中不可能只消滅雜菌，而是消滅全部微生物。C是正確的，因?yàn)榕c發(fā)酵有關(guān)的所有設(shè)備和物質(zhì)都要滅菌；發(fā)酵所用的微生物是滅菌后專門接種的，滅菌必須在接種前，如果接種后再滅菌就會(huì)把所接菌種也殺死。答案：B基礎(chǔ)過關(guān)1關(guān)于微生物的營養(yǎng)，說法正確的是()A同一種物質(zhì)不可能既作碳源又作氮源除水以外的無機(jī)物僅提供無機(jī)鹽C凡是碳源都能提供能量D無機(jī)氮源也能提供能量關(guān)于配置培養(yǎng)液的敘述正確的是制作固體培養(yǎng)基必須加入瓊脂發(fā)酵工程一般用半固體培養(yǎng)基培養(yǎng)自生固氮菌不需要氮源加入青霉素可得到放線菌下表為牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的成分表成分千肉膏蛋白胨NaClH2O含量05g1g05g100mL其中的牛肉膏和蛋白胨能夠提供 ( ) 碳源 B生長因子 氮源 D包括ABC 獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是 ( ) 將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具、培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌 接種純種細(xì)菌 適宜環(huán)境條件下培養(yǎng) 防止外來雜菌的入侵 下列操作與滅菌無關(guān)的是 ( ) 接種前用火焰灼燒接種環(huán) 接種前用酒精擦拭雙手 將平板倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 接種要在酒精燈的火焰旁完成 將接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的培養(yǎng)良人37恒溫箱的目的是 ( ) 對比觀察培養(yǎng)基有沒有被微生物利用第比分析培養(yǎng)基上是否生有雜菌沒必要放入媒介中的培養(yǎng)基為了下次接種是在使用菌種保存應(yīng)控制的條件是濕度低溫?zé)┰暧泄飧艚^空氣適當(dāng)有氧外科手術(shù)器械和罐頭食品的消毒，都要以能夠殺死什么為標(biāo)準(zhǔn)？球菌桿菌螺旋菌芽孢有關(guān)平板劃線的正確操作是是用已滅菌的接種環(huán)、培養(yǎng)皿、操作過程中不再殺菌打開含菌種的試管需通過火燃滅菌取出菌種后要馬上賽上棉塞將沾有菌種的接種環(huán)迅速深入平板內(nèi)，劃三至五條平行線即可最后將平版倒置放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10有關(guān)稀釋涂布平板法，敘述錯(cuò)誤的是( )A首先將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋B然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面適宜條件下培養(yǎng)D結(jié)果都可在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落11若大腸桿菌和圓褐固氮菌混合在一起，采用下列哪組培養(yǎng)基可將它們分離? ( ) A加食鹽的培養(yǎng)基和蛋白胨培養(yǎng)基 B伊紅一美藍(lán)培養(yǎng)基和無氮培養(yǎng)基 C加青霉素的培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基 D斜面培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基12細(xì)菌培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，在試管口加的棉塞，既要能防止雜菌的污染，又要保證通氣良好。圖中正確的棉塞位置是 ( )13金黃色葡萄球菌有很強(qiáng)的致病力，還可能引起食物中毒。下述實(shí)驗(yàn)結(jié)束后的做法錯(cuò)誤的是 ( )A對接種環(huán)進(jìn)行灼燒處理帶菌培養(yǎng)基須經(jīng)加熱后才能倒掉C帶菌培養(yǎng)基須經(jīng)高壓蒸汽滅菌鍋滅菌后才能倒掉D接種后雙手須經(jīng)肥皂洗凈，再用75的酒精棉球擦拭14下表所示為某微生物培養(yǎng)基配方，請分析回答： 成分 含量 NaNO3 3g K2HPO4 1s KCl 0.5g MgS047H2O 0.5 FeSO4 0.01g (CH2O) 30g H20 100mL 青霉素 0.1萬單位 (1)根據(jù)物理性質(zhì)，該培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基；根據(jù)用途劃分則屬于 ，培養(yǎng)基。 (2)根據(jù)培養(yǎng)基原料，所培養(yǎng)的微生物的代謝類型是 ，培養(yǎng)的微生物可能是 。 (3)該培養(yǎng)基中的碳源是 。 (4)如果要鑒別自來水中的大腸桿菌是否超標(biāo)，至少要加入 。 和 ，除去 。成分牛肉膏蛋白胨NaCI H2O含量 05g 1805g100mL 15下表為牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的成分表，據(jù)表回答相關(guān)問題：(1) 蛋白胨在培養(yǎng)基中的主要作用是 。 (2)若用表中成分材料配制觀察金黃色葡萄球菌菌落狀況的培養(yǎng)基，還需要添加的成分是 。(3)培養(yǎng)基配制好時(shí)，分裝前應(yīng)進(jìn)行的工作程序是 。 (4)從配制培養(yǎng)基直至接種培養(yǎng)，所采用的預(yù)防雜菌感染的方法是 。 (5)對培養(yǎng)基進(jìn)行擱置斜面處理的目的是 。能力拓展1下表中給出某培養(yǎng)基的配方。請回答牛肉膏蛋白胨 NaCI 瓊脂 2 05g 1g 05g 2g100mL(1)蛋白胨能提供的營養(yǎng)素有 等。瓊脂的作用為 。 (2)在各種成分溶化分裝前，必須進(jìn)行的重要步驟是 。 (3)此培養(yǎng)基一般不適用于工業(yè)生產(chǎn)，工業(yè)生產(chǎn)常用 培養(yǎng)基。 (4)此培養(yǎng)基能培養(yǎng)的細(xì)菌的同化作用類型是 。 (5)若要分離出金黃色葡萄球菌，可在培養(yǎng)基中加入 。 (6)若用此培養(yǎng)基純化大腸桿菌，最常用的方法是 和 。若在此培養(yǎng)基中加入 和 ，可直接鑒定大腸桿菌，其菌落特征是 。 2某學(xué)校打算開辟一塊食用菌栽培基地，以豐富學(xué)生的勞動(dòng)技術(shù)課內(nèi)容。首先對食用菌實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行清掃和消毒處理，準(zhǔn)備食用菌栽培所需的各種原料和用具，然后從菌種站購來各種食用菌菌種。請回答： (1)對買回來的菌種進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。首先制備試管培養(yǎng)基，寫出制備固體牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基所需的原料： 、 、 、 、 ，其中提供氮源的主要是 ；提供碳源的主要物質(zhì)是 ；瓊脂的作用是 ，他不提供營養(yǎng)。(2)微生物在生長過程中對各種成分所需量不同，配制培養(yǎng)基時(shí)各成分要有合適的 。在燒杯中加入瓊脂后要不停地 ，防止 。 (3)將配制好的培養(yǎng)基分裝到試管中，培養(yǎng)基體積約占試管長度的 。加棉塞后若干個(gè)試管一捆，包上牛皮紙并用皮筋勒緊放入 中滅菌，壓力是 kPa，溫度是 ，時(shí)間 。滅菌完畢后拔掉電源。待鍋內(nèi)壓力自然降到0時(shí)，將試管取出。如果棉塞上沾有培養(yǎng)基此試管應(yīng) 。 (4)使用高壓蒸汽滅菌鍋時(shí)注意，先向鍋內(nèi)倒入 。把鍋內(nèi)水加熱煮沸并將其中原有冷空氣徹底排除后將鍋密閉。 (5)從一支試管向另一支試管接種時(shí)，接種環(huán)要在酒精燈 (“內(nèi)”或“外”)焰滅菌，并且待接種環(huán) 后沾取菌種，試管口不能離開酒精燈火焰附近，將接種的試管放人 冰箱中保藏。課題2 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)目標(biāo)聚焦1研究培養(yǎng)基對微生物的選擇作用2運(yùn)用相關(guān)技術(shù)進(jìn)行微生物數(shù)量的測定精例點(diǎn)撥【例1】對細(xì)菌群體生長規(guī)律測定的正確的表述是A在液體培養(yǎng)基上進(jìn)行 B至少接種一種細(xì)菌 C接種一個(gè)細(xì)菌 D及時(shí)補(bǔ)充消耗的營養(yǎng)物質(zhì)【解析】細(xì)菌群體生長規(guī)律的測定是人們在一定條件下進(jìn)行的。這些條件是：一種細(xì)菌、恒定容積的培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基、定時(shí)測定細(xì)菌總數(shù)。在這些條件下，才能測定出細(xì)菌的生長規(guī)律。測定時(shí)只能用一種細(xì)菌的子細(xì)胞群體的變化規(guī)律表達(dá)微生物的生長；恒定容積是給微生物提供一定的生存環(huán)境；液體培養(yǎng)基才能通過樣品推測細(xì)菌總數(shù)。若接種多種細(xì)菌，則會(huì)發(fā)生種間斗爭而不能測定一種微生物的生長規(guī)律。在接種時(shí)，要保證一定的接種量。答案：A【例2】在微生物群體生長規(guī)律的測定中，種內(nèi)斗爭最顯著最激烈的時(shí)期是A調(diào)整期 B對數(shù)期 C穩(wěn)定期 D衰亡期【解析】種內(nèi)斗爭是一種生態(tài)因素。種內(nèi)斗爭反應(yīng)了種內(nèi)生物對生存空間和生活資源的爭奪。在生活空間充裕，營養(yǎng)充足的時(shí)候，種內(nèi)斗爭的程度是比較低的。隨著微生物個(gè)體數(shù)目的增加，每個(gè)個(gè)體的生存空間越來越少，營養(yǎng)物質(zhì)也越來越少，每個(gè)個(gè)體對生存空間和資源的爭奪也越來越激烈，種內(nèi)斗爭就越來越激烈。由此可知，在穩(wěn)定期的種內(nèi)斗爭最激烈。在衰亡期，微生物的數(shù)目已經(jīng)開始減少，PH已經(jīng)極度不適于微生物的生存，次級代謝產(chǎn)物積累到很高的程度，這時(shí)的微生物的生存斗爭主要是與無機(jī)環(huán)境的斗爭。答案：C 【例】分析下面培養(yǎng)基的配方：KH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、葡萄糖、尿素、瓊脂。請回答： (1)在該培養(yǎng)基的配方中，為微生物的生長提供碳源和氮源的分別是_和 。 (2)想一想這種培養(yǎng)基對微生物是否具有選擇作用?如果具有，又是如何進(jìn)行選擇的? 【解析】碳源是提供碳元素的物質(zhì)，氮源是提供氮元素的物質(zhì)。所以碳源是葡萄糖，氮源是尿素。絕大多數(shù)生物都能利用葡萄糖，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，所以這種培養(yǎng)基對微生物有選擇作用。選擇的原則是只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長。答案：(1)葡萄糖；尿素。(2)有選擇作用。因?yàn)榇伺浞街心蛩厥俏┮坏?，因此，只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長。 【例】用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)，在對應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確的是 ( )A涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是230B涂布了兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是215和260，取平均值238C涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是21、212和256，取平均值163D涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是210、240和250，取平均值233【解析】在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一定要涂布至少3個(gè)子板，作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性，所以A、B不正確。C項(xiàng)雖涂布了3個(gè)子板，但是，其中1個(gè)子板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另兩個(gè)相差太遠(yuǎn)，說明在操作過程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤，因此，不能簡單地將3個(gè)平板的計(jì)數(shù)值用來求平均值。答案；D?；A(chǔ)過關(guān) 1在做分離分解尿素的細(xì)菌實(shí)驗(yàn)時(shí)，A同學(xué)從對應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基上篩選出大約150個(gè)菌落，而其他同學(xué)選擇出大約50個(gè)菌落。A同學(xué)的結(jié)果產(chǎn)生原因可能是 ( )采用的土樣不同 培養(yǎng)基被污染 操作出現(xiàn)失誤 沒有設(shè)置對照A BC 2在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基稱為 ( )A鑒別培養(yǎng)基 B固體培養(yǎng)基C選擇培養(yǎng)基 D液體培養(yǎng)基3下列能選擇出分解尿素的細(xì)菌的培養(yǎng)基 ( )AKH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、葡萄糖、尿素、瓊脂、水BKH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、葡萄糖、瓊脂、水CKH2P4、Na2HP4、MgSO47H2O、尿素、瓊脂、水DKH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、水4下表資料表明在各種培養(yǎng)基中細(xì)菌的生長，(S、C、M)為簡單培養(yǎng)基；U、V、X、Y、Z代表加入培養(yǎng)基的不同物質(zhì)，問細(xì)菌不能合成哪一種物質(zhì)? ( )培養(yǎng)基生長狀態(tài)S、C、MS、C、M+V+ZS、C、M+U+Y+S、C、M+Z+XS、C、M+V+Y+S、C、M+U+XS,C、M+Y+Z+AU BVY DZ5統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法有涂布平板法 重量法直接計(jì)數(shù)法 比濁法生理指標(biāo)法 膜過濾法A C D6關(guān)于測定土壤中細(xì)菌的數(shù)量的敘述，正確( )A一般選用103104倍的稀釋液分別涂布B測定放線菌的數(shù)量，一般選用103、104和 105倍稀釋C測定真菌的數(shù)量，一般選用103、104和 105倍稀釋D當(dāng)?shù)谝淮螠y量某種細(xì)菌的數(shù)量時(shí)，可以將104107倍的稀釋液分別涂布到平板上培養(yǎng)7用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目，其結(jié)果與實(shí)際值相比 ( ) A比實(shí)際值高B比實(shí)際值低 C和實(shí)際值一致D比實(shí)際值可能高也可能低 8用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作要設(shè)置的對照是A未接種的選擇培養(yǎng)基B未接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基C接種了的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基D接種了的選擇培養(yǎng)基9關(guān)于土壤取樣的敘述，錯(cuò)誤的是A應(yīng)選取肥沃、濕潤的土壤B先鏟去表層土3cm左右，再取樣C取樣用的小鐵鏟和信封在使用前不用滅菌D應(yīng)在火焰旁稱取土壤10關(guān)于微生物培養(yǎng)的敘述錯(cuò)誤的是(A細(xì)菌一般在3037的溫度下培養(yǎng)12dB放線菌一般在2528的溫度下培養(yǎng)57dC霉菌一般在2528的溫度下培養(yǎng)34dD不同種類的微生物，一般需要相同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間11不同種類的細(xì)菌菌落表現(xiàn)為不同的特征。下列屬于菌落特征的是 ( )菌落的大小菌落的形狀菌落的隆起程度 菌落的顏色菌落的透明度A BC D12菌落特征常用來鑒定微生物的種類。下列關(guān)于菌落的敘述，正確的是( )一個(gè)菌落就是單個(gè)微生物在固體培養(yǎng)基上迅速生長繁殖，并以此母細(xì)胞為中心形成的子細(xì)胞集團(tuán)不同種類的微生物其菌落特征完全不一樣C同一種類的微生物其菌落特征完全一樣D不同種類的微生物所表現(xiàn)出來的菌落差異是個(gè)體細(xì)胞形態(tài)差異的反映13可以鑒定出分解尿素的細(xì)菌的方法是( )A在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑B在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入二苯胺試劑C在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入蘇丹試劑D在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入雙縮脲試劑14在做本課實(shí)驗(yàn)時(shí)，甲同學(xué)篩選出的菌落與其他同學(xué)不同，并且他在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)并沒有設(shè)置對照。思考下列問題：(1)你認(rèn)為甲同學(xué)結(jié)果產(chǎn)生的原因可能有哪些？(2)請你設(shè)置對照實(shí)驗(yàn)，幫助甲同學(xué)排除可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素。(3)由此問題你得出的啟示是什么?15下面是探究如何從土壤中分離自生固氮菌與計(jì)數(shù)的實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)原理：農(nóng)田的表層土壤中，自生固氮菌的含量比較多。將用表土制成的稀泥漿，接種到無氮培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。在這種情況下，只有自生固氮菌才能生長繁殖。用這種方法，可以將自生固氮菌與其他細(xì)菌分離開來。材料用具：農(nóng)田的表層土壤、無氮培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、盛9mL無菌水的試管、無菌吸管、無菌涂布器、無菌培養(yǎng)皿、盛90mL無菌水的錐形瓶、恒溫箱。方法步驟： (1)倒平板。分別將無氮培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基倒平板，應(yīng)在 操作。(2)制備土壤稀釋液。取土樣10 g加入盛有90mL無菌水的錐形瓶中，充分搖勻。用無菌吸管吸取上清液lmL，轉(zhuǎn)至9mL的無菌水的大試管中，依次稀釋到107倍稀釋度。(3)涂布。按照由101108倍稀釋度的順序分別吸取01mL進(jìn)行平板涂布，每個(gè)稀釋度下，無氮培養(yǎng)基應(yīng)至少涂布 個(gè)子板，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基涂布 個(gè)。(4)培養(yǎng)。放入恒溫箱內(nèi)，在2830下培養(yǎng)34d。(5)細(xì)菌的計(jì)數(shù)。當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)，選取茵落數(shù)在 的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。如果測試的平均值為50，則每克樣品中的菌落數(shù)是 (稀釋度是105倍)。預(yù)期結(jié)果：相同稀釋度下，牛肉膏蛋白胨平板上的菌落數(shù) (填“多于”或“少于”)無氮培養(yǎng)基上的數(shù)目，原因是 。能力拓展1某同學(xué)的研究性學(xué)習(xí)課題是“探究影響細(xì)菌生長繁殖的因素”。他在培養(yǎng)細(xì)菌的過程中，發(fā)現(xiàn)了某種細(xì)菌(記作R)的周圍其他細(xì)菌的生長繁殖受到抑制。他把R細(xì)菌接種到專門的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，一段時(shí)間后，他除去R細(xì)菌，用該培養(yǎng)基再培養(yǎng)其他細(xì)菌，結(jié)果其他細(xì)菌仍然不能在這個(gè)培養(yǎng)基上生長和繁殖。根據(jù)以上材料回答下列問題： (1)從生態(tài)學(xué)的角度分析，R細(xì)菌與其周圍細(xì)菌之間的關(guān)系，叫做 。 (2)于是，該同學(xué)假設(shè)了以下“造成R細(xì)菌周圍的其他細(xì)菌不能生長和繁殖”的可能原因：AR細(xì)菌占據(jù)了其他細(xì)菌的生存空間BR細(xì)菌吞噬了其他細(xì)菌CR細(xì)菌產(chǎn)生了不利于其他細(xì)菌生存的物質(zhì) DR細(xì)菌更容易吸收培養(yǎng)基中的物質(zhì) 你認(rèn)為以上哪項(xiàng)是最可能的? 。 (3)參照上述題目中給出的有關(guān)材料，設(shè)計(jì)你對第(2)題所作選擇的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。 方法步驟：結(jié)果結(jié)論： 2下面是某同學(xué)做自生固氮菌分離實(shí)驗(yàn)的方案和觀察結(jié)果： 培養(yǎng)基成分： NaNO3一2g； K2HP041g；KCl05g；FeSO4：一001g；瓊脂一1520g；MgSO4蔗糖30g 蒸餾水1000mL一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?略)二、材料用具(略)三、方法步驟(1)接種。接種前，準(zhǔn)備好盛有上述配方的培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)皿中并滅菌，供實(shí)驗(yàn)用。 取10g土壤，放在無菌研缽中，注入5mL蒸餾水，并用無菌玻璃棒攪拌均勻，備用。 將接種環(huán)放在酒精燈的火焰上滅菌。將培養(yǎng)皿蓋輕輕放在桌面上，手拿培養(yǎng)皿。將接種環(huán)放在培養(yǎng)基邊緣處冷卻。然后，用接種環(huán)蘸取少許泥漿，輕輕地點(diǎn)接在培養(yǎng)基的表面上，共點(diǎn)接1520處。 接種后，輕輕地蓋上培養(yǎng)皿蓋，將培養(yǎng)皿放在實(shí)驗(yàn)桌上。 (2)培養(yǎng)。 將接過種的培養(yǎng)皿放入恒溫箱內(nèi)，在2830的溫度下培養(yǎng)34d。 (3)觀察。 34d后，取出培養(yǎng)皿，仔細(xì)觀察培養(yǎng)基上的菌落，其中大而扁平、邊緣呈現(xiàn)波狀或鋸齒狀并為褐色的菌落為自生固氮菌。 (4)鏡檢(略)該實(shí)驗(yàn)方案和觀察結(jié)果中有幾處明顯錯(cuò)誤，請指出錯(cuò)誤并改正。(至少找出三處)課題3 分解纖維素的微生物的分離目標(biāo)聚焦 1簡述纖維素酶的種類和作用 理解纖維素分解菌的篩選原理 3掌握從土壤中分離某種特定微生物的操作技術(shù)精例點(diǎn)撥【例1】分離土壤中纖維素分解菌用到的方稀釋倒平板法 涂布平板法單細(xì)胞挑取法 選擇培養(yǎng)分離A D D【解析】分離土壤中纖維素分解菌，先進(jìn)行選擇培養(yǎng)，增大纖維素分解菌的濃度，梯度稀釋，涂布平板、培養(yǎng)，單細(xì)胞挑取以獲得純培養(yǎng)。稀釋倒平板法是先進(jìn)行梯度稀釋，然后分別取不同稀釋液少許，與已溶化并冷卻至50左右的瓊脂培養(yǎng)基混合、搖勻后，傾人滅菌的培養(yǎng)皿中，制成可能含菌的瓊脂平板，保溫一定時(shí)間即可出現(xiàn)菌落。涂布平板法是先將溶化的培養(yǎng)基倒人無菌培養(yǎng)皿，制成無菌平板，冷卻凝固后，將一定量的某一稀釋度的樣品液涂布在整個(gè)子板表面，經(jīng)培養(yǎng)后形成單個(gè)的菌落。答案：B。 【例2】根據(jù)下面的實(shí)驗(yàn)原理和材料用具，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)選擇運(yùn)載體質(zhì)粒，探究質(zhì)粒的抗菌素基因類別。 實(shí)驗(yàn)原理：作為運(yùn)載體的質(zhì)粒，須有標(biāo)記基因，這一標(biāo)記基因有抗菌素抗性基因。故凡有抗菌素抗性的細(xì)菌，其質(zhì)粒才可能用作運(yùn)載體。 材料用具：青霉素、四環(huán)素的10萬單位溶液、菌種試管、滅菌的含細(xì)菌培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿、酒精燈、接種環(huán)、一次性注射器、蒸餾水、恒溫箱。 方法步驟： 第一步：取三個(gè)含細(xì)菌培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿并標(biāo)1、2、3號，在酒精燈旁，用三支注射器，分別注入lmL蒸餾水、青霉素、四環(huán)素液，并使之分布在整個(gè)培養(yǎng)基表面。 第二步：將接種環(huán)，并在酒精燈火焰旁取種，然后對三個(gè)培養(yǎng)皿分別接種。 第三步：培養(yǎng)。將接種后的三個(gè)培養(yǎng)皿放人37的恒溫箱中培養(yǎng)24h。 預(yù)期結(jié)果及分析：(1)設(shè)置1號的目的是的現(xiàn)象是。 (2)若僅2號生存，則說明。(3)若2號不存活，3號存活，則說明。(4)若2號、3號都存活，則說明?！窘馕觥勘绢}既考查實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)能力，又考查了預(yù)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果多層次思維能力，屬于分析綜合能力的考查。該實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組(加青霉素和加四環(huán)素的培養(yǎng)基)，一個(gè)對照組(加蒸餾水的培養(yǎng)基)，遵循了實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的單一變量原則和對照原則。對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的預(yù)期應(yīng)分三種情況預(yù)測：一是僅2號存活，說明細(xì)菌質(zhì)粒中只有抗青霉素的基因，沒有抗四環(huán)素的基因；二是2號不存活，3號存活，說明細(xì)菌質(zhì)粒中有抗四環(huán)素的基因，沒有抗青霉素的基因；三是若2號、3號都存活，說明細(xì)菌質(zhì)粒中，兩種抗性基因都有。答案：第二步：在酒精燈火焰上灼燒。(1)對照作用；細(xì)菌正常生長。(2)質(zhì)粒上有抗青霉素基因，沒有抗四環(huán)素基因。(3)質(zhì)粒上有抗四環(huán)素基因，沒有抗青霉素基因。(4)質(zhì)粒上有抗四環(huán)素基因和抗青霉素基因?；A(chǔ)過關(guān)1下列纖維素含量最高的生物是西瓜果實(shí) B小麥種子C花生果實(shí) 棉花果實(shí)。2纖維素酶可以將哪種物質(zhì)分解?A牛肉片 B魚片濾紙條 D塑料條3尋找纖維素分解菌應(yīng)到A富含無機(jī)鹽的環(huán)境中B富含纖維素的環(huán)境中濕潤的環(huán)境中D池塘中 4在酸性貧瘠的土壤中分解纖維素占優(yōu)勢的菌為 ( ) A真菌B細(xì)菌 C放線菌D兼性厭氧細(xì)菌和真菌 5選擇培養(yǎng)的結(jié)果是培養(yǎng)液變 ( ) A清澈 B渾濁 C紅色 D產(chǎn)生透明圈 6在加入剛果紅的培養(yǎng)基中出現(xiàn)透明圈的菌落是 ( )A乳酸菌B硝化細(xì)菌C分解尿素的細(xì)菌D分解纖維素的細(xì)菌7兩種剛果紅染色法的結(jié)果是均會(huì)出現(xiàn)透明圈均不會(huì)出現(xiàn)透明圈C方法一出現(xiàn)，方法二不出現(xiàn)D方法一不出現(xiàn)，方法二出現(xiàn)8關(guān)于選擇培養(yǎng)的正確敘述是A可以增加纖維素分解菌的濃度B可以減少纖維素分解菌的濃度C所用培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基D所用培養(yǎng)基是乎板培養(yǎng)基分離纖維素分解菌的實(shí)驗(yàn)過程中操作有誤的是經(jīng)選擇培養(yǎng)后將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上B富集培養(yǎng)這一步可省略，但培養(yǎng)纖維素分解菌少C經(jīng)稀釋培養(yǎng)后，用剛果紅染色D對照組可用同樣量的培養(yǎng)液涂布到不含纖維素的培養(yǎng)基上10在將樣品稀釋涂布到鑒別纖維素分解菌完全除去其他微生物B沒有意義，去掉這一步更好C增加纖維素分解菌的濃度D使纖維素分解菌充分長大11生活在反芻動(dòng)物胃內(nèi)的纖維素分解菌，其新陳代謝類型為( ) A自養(yǎng)需氧型 B異養(yǎng)厭氧型C異養(yǎng)需氧型 D自養(yǎng)厭氧型 12反芻動(dòng)物與其胃內(nèi)的纖維素分解菌之間屬于 ( ) 互利共生 種間競爭寄生關(guān)系 D捕食關(guān)系 13請分析下面的培養(yǎng)基配方，回答下面的問題：纖維紊分解菌的選擇培養(yǎng)基 纖維素粉 5g NaNO3 1g Na2HPO47H20 12g KH2PO4 09g MgSO47H2() 05g KCl 05g酵母菌 05g 水解酪素 05g將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1000mL。 (1)此培養(yǎng)基配方中為微生物提供碳源和氮源的分別是 、 。 (2)此配方為 培養(yǎng)基。(根據(jù)物理狀態(tài))此培養(yǎng)基選擇出的微生物主要是 。14設(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)，從牛的六位中分離出能夠纖維素的微生物。實(shí)驗(yàn)依據(jù)：實(shí)驗(yàn)步驟：能力拓展1 下表為纖維素分解菌的鑒別培養(yǎng)基配方，請?jiān)O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)測定該培養(yǎng)基用于鑒定纖維素分解菌的最適值。CMCNa酵母膏KH2PO4瓊脂土豆汁蒸餾水 56g 18 05g 15g100mL1000mL實(shí)驗(yàn)步驟(1) ;(2) ;(3) ;(4) 。(5)放在適宜條件下培養(yǎng)，觀察并記錄結(jié)果。(6)僅憑一次實(shí)驗(yàn)?zāi)芊駵?zhǔn)確測出培，養(yǎng)基的最適PH?為什么?2 富集培養(yǎng)的微生物學(xué)中的最強(qiáng)有力的技術(shù)手段之一。主要是指利用不同微生物間生命活動(dòng)特點(diǎn)的不同，制定環(huán)境條件，是僅適應(yīng)該條件的微生物旺盛生長，從而使其在群落中的數(shù)量大大增加，人們能夠更容易地從自然界中分離到所需的特定微生物。富集條件可根據(jù)所需分離的微生物的特點(diǎn)，從物理、化學(xué)、生物及綜合多個(gè)方面進(jìn)行選擇，如溫度、PH、紫外線、高壓、光照、氧氣、營養(yǎng)等許多方面。下圖描述了采用富集方法從土壤中分離能降解酚類化合物對羥基苯甲酸的微生物的實(shí)驗(yàn)過程。利用富集培養(yǎng)技術(shù)從土壤中分離能降解對羥基苯甲酸的微生物請分析回答：(1)本實(shí)驗(yàn)所需培養(yǎng)基為碳源為 。(2)實(shí)驗(yàn)原理是 。(3)重復(fù)培養(yǎng)的目的是 。(4)的菌落中大部分是降解 微生物。(5)為 組，為 組，設(shè)置的目的是 。(6)采用 法，接種到的培養(yǎng)基中，在操作過程中為防止污染應(yīng)注意的事項(xiàng)是 。測試與評價(jià)單元測試與評價(jià)(二)一、選擇題(每題3分，共45分。每題只有1個(gè)選項(xiàng)符合題目要求)1培養(yǎng)基為微生物的生長繁殖提供( )A水B碳源C.氮源D水、碳源、氮源和無機(jī)鹽等2將配制好的培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌應(yīng)用( ) A灼燒滅菌 B高壓蒸汽滅菌C干熱滅菌 D煮沸滅菌3下列敘述錯(cuò)誤的是 ( )A.培養(yǎng)乳酸菌時(shí)需要在培養(yǎng)基中添加維生素B培養(yǎng)霉菌時(shí)需將培養(yǎng)基的PH調(diào)至堿性C.培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)需將pH調(diào)至中性或微堿性D培養(yǎng)厭氧微生物時(shí)需要提供無氧的條件4以下部位不含有微生物的是 ( )A洗干凈的臉B洗完澡后的皮膚C刷完牙后的口腔D灼燒之后的接種環(huán)5為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在何種范圍的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)? ( )A30100 B30200C30300 D306006土壤中的細(xì)菌能分解尿素，是因?yàn)樗鼈兡芎铣梢环N ( )A尿素酶 B脲酶C蛋白酶 D肽酶7設(shè)置對照的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中哪一因素對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響? ( )A測試因素 B非測試因素C全部因素 D部分因素8以下操作用到接種環(huán)的是 ( )A平板劃線操作 B系列稀釋操作C涂布平板操作 D倒平板操作9能排除培養(yǎng)基是否有雜菌污染的方法是A將未接種的培養(yǎng)基放在窗臺(tái)上培養(yǎng)將未接種的培養(yǎng)基放在實(shí)驗(yàn)桌上培養(yǎng)將未接種的培養(yǎng)基放在恒溫箱中培養(yǎng)將已接種的培養(yǎng)基放在恒溫箱中培養(yǎng)10有關(guān)培養(yǎng)基的配置原則表述正確的是任何培養(yǎng)基都必須含有碳源、氮源、礦質(zhì)元素、水及生長因子碳源和氮源必須具有一定比例，碳元素的含量最多，其次是氮源素微生物的生長除受營養(yǎng)因素的影響外，還受值、氧、滲透壓的影響營養(yǎng)物質(zhì)的濃度越高越好11高壓蒸汽濕熱滅菌的操作順序應(yīng)該是 ( )加水 排冷氣 裝置滅菌 98kPa下滅菌 加蓋 0kPa下排起，打開滅菌鍋 BC D12斜面培養(yǎng)基形成的斜面的長度不超過試管總長的 ( )A13 B23C14 D1213滅菌的標(biāo)準(zhǔn)是 ( ) A使病原菌不生長 B殺死所有的微生物 C殺死所有的病原微生物 D殺死所有微生物的細(xì)胞、芽孢和孢子 14下表是某培養(yǎng)基的配方，有關(guān)敘述正確成分蛋白胨葡萄糖K2HPO4伊紅Y莢藍(lán) H20含量 10g 10g 2g 04g0065g1000mL A從物理性質(zhì)看該培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基，從用途看該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基中屬于碳源的物質(zhì)主要是葡萄糖，屬于氮源的物質(zhì)是蛋白胨C該培養(yǎng)基可用于選擇乳酸菌該培養(yǎng)基調(diào)節(jié)合適的后就可以接種使用15用培養(yǎng)液培養(yǎng)三種細(xì)菌，讓它們在三支不同的試管中生長，下圖顯示了細(xì)菌的生長層，如果此時(shí)往三支試管中通人氧氣，則細(xì)菌的繁殖速度將如何變化? ( ) 選項(xiàng)I號試管II號試管III號試管 A 加快 減慢 不變 B 減慢 加快 加快 C 加快 減慢 減慢 D 減慢 加快 減慢二、非選擇題（55分） 16下表是某微生物培養(yǎng)基成分。請回答：編號 成分 含量 粉狀硫 10g (NH4)2SO4 04g K2HP04 4g MgSO4 925g FeSO4 0卜g CaCl2 05g H2O 100mL(1)若不慎將過量NaCl加人培養(yǎng)基中。如不想浪費(fèi)此培養(yǎng)基，可再加入 ，用于培養(yǎng) 。(2)若除去成分，加入(CH2O)，該培養(yǎng)基可用于培養(yǎng) 。(3)不論何種培養(yǎng)基，在各種成分都溶化后，分裝前要進(jìn)行的是 。(4)表中各成分重量確定的原則是 。(5)若表中培養(yǎng)基用于菌種鑒定，應(yīng)增加的成分是 。(6)該培養(yǎng)基若用于培養(yǎng)產(chǎn)生人生長激素的工程菌，培養(yǎng)基成分中至少應(yīng)該含有 。17科學(xué)工作者做了這樣一組實(shí)驗(yàn)，把被農(nóng)藥污染的土壤分成兩組，一組土壤高壓滅菌，另一組土壤不滅菌，然后把兩組土壤放人溫室中培養(yǎng)數(shù)周后，結(jié)果如下圖，請回答：(1)高壓滅菌組為曲線 ；對照組為曲線 。(2)A曲線的形成原因是 。(3)B曲線的形成原因是 。18關(guān)于水污染對生物的影響的實(shí)驗(yàn)如下圖所示，將放置一天的洗碗水、河水、自來水各 5mL，分別注入13號試管中，再各滴加幾滴質(zhì)量濃度為001的亞甲基藍(lán)溶液。把上述試管在溫暖環(huán)境中放置40min后，1號試管內(nèi)水樣由藍(lán)色變?yōu)闊o色，2號試管內(nèi)水樣變?yōu)闇\藍(lán)色，3號試管內(nèi)水樣無變化，是分析回答：(1)在l號、2號試管內(nèi)水樣中大量繁殖的生物是 。(2)上述生物的數(shù)量與水樣中的 含量成正比。(3)1號、2號管內(nèi)水樣變色的原因是 。 19根據(jù)各類微生物的形態(tài)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和新陳代謝類型，利用選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基，結(jié)合顯微鏡鏡檢以及菌落特征，可以把混雜在一起的大腸桿菌、硝化細(xì)菌、乳酸菌、酵母菌、金黃色葡萄球菌、圓褐固氮菌、尿細(xì)菌、纖維桿菌分離開來。下面是分離篩選的方法步驟，請根據(jù)各個(gè)步驟的條件，分析回答： 首先配制一系列不同性質(zhì)的固體培養(yǎng)基，然后進(jìn)行高溫滅菌。再將上述微生物的混合液分別接種到各種培養(yǎng)基上培養(yǎng)。 (1)利用無氮培養(yǎng)基可篩選出 。 (2)用不含有機(jī)碳源的選擇培養(yǎng)基可篩選出 。(3)酵母菌的篩選需要在常規(guī)培養(yǎng)基中另加 。用含較高濃度NaCl的培養(yǎng)基可選擇出 ；或者根據(jù)菌落的顏色呈現(xiàn) 色，將其挑取單獨(dú)培養(yǎng)。利用伊紅和美藍(lán)培養(yǎng)基培養(yǎng)混合菌，菌落呈 色并帶有金屬光澤的是 ，挑取