國(guó)標(biāo)-菌落總數(shù)測(cè)定

食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定 1主題內(nèi)容與適用范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中菌落總數(shù)的測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中菌落總數(shù)的測(cè)定。2術(shù)語(yǔ)菌落總數(shù)是指食品檢樣經(jīng)過(guò)處理，在一定條件下培養(yǎng)后(如培基成分、培養(yǎng)溫度和時(shí)間、pH、需氧性質(zhì)等)，所得1mL(g)檢樣中所含菌落的總數(shù)。本方法規(guī)定的培養(yǎng)條件下所得結(jié)果，只包括一群在營(yíng)養(yǎng)瓊脂上生長(zhǎng)發(fā)育的嗜中溫性需氧的菌落總數(shù)。菌落總數(shù)主要作為判定食品被污染程度的標(biāo)志，也可以應(yīng)用這一方法觀察細(xì)菌在食品中繁殖的動(dòng)態(tài)，以便對(duì)被檢樣品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)時(shí)提供依據(jù)。3引用標(biāo)準(zhǔn)GB 4789.28食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)染色法、培養(yǎng)基和試劑4設(shè)備和材料4.1溫箱：361。4.2冰箱：04。4.3恒溫水?。?61。4.4天平。4.5電爐4.6吸管。4.7廣口瓶或三角瓶：容量為500mL。4.8玻璃珠：直徑約5mm。4.9平皿：直徑為90mm。4.10試管。4.11放大鏡。4.12菌落計(jì)數(shù)器。4.13酒精燈。4.14均質(zhì)器或乳缽。4.15試管架。4.16滅菌刀或剪子。4.17滅菌鑷子。5培養(yǎng)基和試劑5.1營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：按GB 4789.28中4.7規(guī)定。5.2磷酸鹽緩沖稀釋液：按GB 4789.28中3.22規(guī)定。5.3生理鹽水。5.475%乙醇。6檢驗(yàn)程序菌落總數(shù)的檢驗(yàn)程序如下。（圖略）7操作步驟7.1檢樣稀釋及培養(yǎng)7.1.1以無(wú)菌操作，將檢樣25g(或mL)剪碎放于含有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶?jī)?nèi)(瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠)或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分振搖或研磨做成110的均勻稀釋液。固體檢樣在加入稀釋液后，最好置均質(zhì)器中以800010 000r/min的速度處理1min，做成110的均勻稀釋液。7.1.2用1mL滅菌吸管吸取110稀釋液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內(nèi)(注意吸管尖端不要觸及管內(nèi)稀釋液)，振搖試管，混合均勻，做成1100的稀釋液。7.1.3另取1mL滅菌吸管，按上條操作順序，做10倍遞增稀釋液，如此每遞增稀釋一次，即換用1支1mL火菌吸管。7.1.4根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)?biāo)本污染情況的估計(jì)，選擇23個(gè)適宜稀釋度，分別在做10倍遞增稀釋的同時(shí)，即以吸取該稀釋度的吸管移1mL稀釋液于滅菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。7.1.5稀釋液移入平皿后，應(yīng)及時(shí)將涼至46營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(可放置于461水浴保溫)注入平皿約15mL，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使混合均勻。同時(shí)將營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1mL稀釋液的滅菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照7.1.6待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置361溫箱內(nèi)培養(yǎng)482h。7.2菌落計(jì)數(shù)方法做平板菌落計(jì)數(shù)時(shí)，可用肉眼觀查，必要時(shí)用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平板的菌落數(shù)后，求出同稀釋度的各平板平均菌落總數(shù)。7.3菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告7.3.1平板菌落數(shù)的選擇選取菌落數(shù)在30300之間的平板作為菌落總數(shù)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)。一個(gè)稀釋度使用兩個(gè)平板，應(yīng)采用兩個(gè)平板平均數(shù)，其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無(wú)片狀菌落生長(zhǎng)的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)，若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計(jì)算半個(gè)平板后乘2以代表全皿菌落數(shù)。平皿內(nèi)如有鏈狀菌落生長(zhǎng)時(shí)(菌落之間無(wú)明顯界線)，若僅有一條鏈，可視為一個(gè)菌落；如果有不同來(lái)源的幾條鏈，則應(yīng)將每條鏈作為一個(gè)菌落計(jì)。7.3.2稀釋度的選擇7.3.2.1應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在30300之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之(見(jiàn)表中例1)。7.3.2.2若有兩個(gè)稀釋度，其生長(zhǎng)的菌落數(shù)均在30300之間，則視兩者之比如何來(lái)決定。若其比值小于或等于2，應(yīng)報(bào)告其平均數(shù)；若大于2則報(bào)告其中較小的數(shù)字(見(jiàn)表中例2及3)。7.3.2.3若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之(見(jiàn)表中例4)。7.3.2.4若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之(見(jiàn)表中例5)。7.3.2.5若所有稀釋度均無(wú)菌落生長(zhǎng)，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)報(bào)告之(見(jiàn)表中例6)。7.3.2.6若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30300之間，其中一部分大于300或小于30時(shí)，則以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之(見(jiàn)表中例7)。7.3.3菌落數(shù)的報(bào)告菌落數(shù)在100以內(nèi)時(shí)，按其實(shí)有數(shù)報(bào)告，大于100時(shí)，采用二位有效數(shù)字，在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入方法計(jì)算。為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)，也可用10的指數(shù)來(lái)表示(見(jiàn)表中“報(bào)告方式”欄)。稀釋度選