GB5413.3-2010食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)嬰幼兒食品和乳品中脂肪的測(cè)定.pdf

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 5413.32010 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 嬰幼兒食品和乳品中脂肪的測(cè)定 National food safety standard Determination of fat in foods for infants and young children, milk and milk products 中 華 人 民 共 和 國(guó) 衛(wèi) 生 部中 華 人 民 共 和 國(guó) 衛(wèi) 生 部 發(fā)布 2010-03-26 發(fā)布 2010-06-01 實(shí)施GB 5413.32010 I 前 言 本標(biāo)準(zhǔn)代替 GB/T 5009.46-2003乳與乳制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法中脂肪的測(cè)定、GB/T 5409-85牛乳檢驗(yàn)方法中脂肪的測(cè)定、GB/T 5416-85奶油檢驗(yàn)方法中脂肪的測(cè)定、GB/T 5413.3-1997嬰幼兒配方食品和乳粉 脂肪的測(cè)定 。 本標(biāo)準(zhǔn)的附錄 A 為資料性附錄。 本標(biāo)準(zhǔn)所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為： GB/T 5409-85； GB/T 5413.3-1997； GB/T 5416-85； GB 5009.46-1985、GB/T 5009.46-1996、GB/T 5009.46-2003。GB 5413.32010 1 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 嬰幼兒食品和乳品中脂肪的測(cè)定 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了巴氏殺菌乳、滅菌乳、生乳、發(fā)酵乳、調(diào)制乳、乳粉、煉乳、奶油、稀奶油、干酪和嬰幼兒配方食品中脂肪的測(cè)定方法。 本標(biāo)準(zhǔn)第一法適用于巴氏殺菌乳、滅菌乳、生乳、發(fā)酵乳、調(diào)制乳、乳粉、煉乳、奶油、稀奶油、干酪和嬰幼兒配方食品中脂肪的測(cè)定；第二法適用于巴氏殺菌乳、滅菌乳、生乳中脂肪的測(cè)定。 2 規(guī)范性引用文件 本標(biāo)準(zhǔn)中引用的文件對(duì)于本標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 僅所注日期的版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。 第一法 3 原理 用乙醚和石油醚抽提樣品的堿水解液， 通過(guò)蒸餾或蒸發(fā)去除溶劑， 測(cè)定溶于溶劑中的抽提物的質(zhì)量。 4 試劑和材料 除非另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純，水為 GB/T 6682 規(guī)定的三級(jí)水。 4.1 淀粉酶：酶活力1.5 U/mg。 4.2 氨水（NH4OH）：質(zhì)量分?jǐn)?shù)約 25%。 注：可使用比此濃度更高的氨水。 4.3 乙醇（C2H5OH）：體積分?jǐn)?shù)至少為 95%。 4.4 乙醚（C4H10O）：不含過(guò)氧化物，不含抗氧化劑，并滿足試驗(yàn)的要求。 4.5 石油醚（CnH2n+2）：沸程 30 60 。 4.6 混合溶劑：等體積混合乙醚（4.4）和石油醚（4.5），使用前制備。 4.7 碘溶液（I2）：約 0.1 mol/L。 4.8 剛果紅溶液（C32H22N6Na2O6S2）：將 1 g 剛果紅溶于水中，稀釋至 100 mL。 注：可選擇性地使用。剛果紅溶液可使溶劑和水相界面清晰，也可使用其他能使水相染色而不影響測(cè)定結(jié)果的溶液。 4.9 鹽酸（6 mol/L）：量取 50 mL 鹽酸（12 mol/L）緩慢倒入 40 mL 水中，定容至 100 mL，混勻。 5 儀器和設(shè)備 GB 5413.32010 2 5.1 分析天平：感量為 0.1 mg。 5.2 離心機(jī)：可用于放置抽脂瓶或管，轉(zhuǎn)速為 500 轉(zhuǎn)/分鐘600 轉(zhuǎn)/分鐘，可在抽脂瓶外端產(chǎn)生 80 g90 g 的重力場(chǎng)。 5.3 烘箱。 5.4 水浴。 5.5 抽脂瓶：抽脂瓶應(yīng)帶有軟木塞或其他不影響溶劑使用的瓶塞（如硅膠或聚四氟乙烯）。軟木塞應(yīng)先浸于乙醚中，后放入 60 或 60 以上的水中保持至少 15 min，冷卻后使用。不用時(shí)需浸泡在水中，浸泡用水每天更換一次。 注：也可使用帶虹吸管或洗瓶的抽脂管（或燒瓶），但操作步驟有所不同，見附錄 A 中規(guī)定。接頭的內(nèi)部長(zhǎng)支管下端可成勺狀。 6 分析步驟 6.1 用于脂肪收集的容器（脂肪收集瓶）的準(zhǔn)備 于干燥的脂肪收集瓶中加入幾粒沸石，放入烘箱中干燥1 h。使脂肪收集瓶冷卻至室溫，稱量，精確至0.1 mg。 注：脂肪收集瓶可根據(jù)實(shí)際需要自行選擇。 6.2 空白試驗(yàn) 空白試驗(yàn)與樣品檢驗(yàn)同時(shí)進(jìn)行，使用相同步驟和相同試劑，但用10 mL水代替試樣。 6.3 測(cè)定 6.3.1 巴氏殺菌乳、滅菌乳、生乳、發(fā)酵乳、調(diào)制乳 稱取充分混勻試樣10 g（精確至0.0001 g）于抽脂瓶中。 6.3.1.1 加入 2.0 mL 氨水（4.2） ，充分混合后立即將抽脂瓶放入 65 5 的水浴中，加熱 15 min20min，不時(shí)取出振蕩。取出后，冷卻至室溫。靜止 30 s 后可進(jìn)行下一步驟。 6.3.1.2 加入 10 mL 乙醇（4.3） ，緩和但徹底地進(jìn)行混合，避免液體太接近瓶頸。如果需要，可加入兩滴剛果紅溶液（4.8） 。 6.3.1.3 加入 25 mL 乙醚（4.4） ，塞上瓶塞，將抽脂瓶保持在水平位置，小球的延伸部分朝上夾到搖混器上，按約 100 次/min 振蕩 1 min，也可采用手動(dòng)振搖方式。但均應(yīng)注意避免形成持久乳化液。 抽脂瓶冷卻后小心地打開塞子，用少量的混合溶劑沖洗塞子和瓶頸，使沖洗液流入抽脂瓶。 6.3.1.4 加入 25 mL 石油醚（4.5） ，塞上重新潤(rùn)濕的塞子，按 6.3.1.3 所述，輕輕振蕩 30 s。 6.3.1.5 將加塞的抽脂瓶放入離心機(jī)中，在 500 轉(zhuǎn)/分鐘600 轉(zhuǎn)/分鐘下離心 5 min。否則將抽脂瓶靜止至少 30 min，直到上層液澄清，并明顯與水相分離。 6.3.1.6 小心地打開瓶塞，用少量的混合溶劑（4.6）沖洗塞子和瓶頸內(nèi)壁，使沖洗液流入抽脂瓶。 如果兩相界面低于小球與瓶身相接處， 則沿瓶壁邊緣慢慢地加入水， 使液面高于小球和瓶身相接處（見圖1），以便于傾倒。 6.3.1.7 將上層液盡可能地倒入已準(zhǔn)備好的加入沸石的脂肪收集瓶中，避免倒出水層（見圖 2） 。 GB 5413.32010 3 圖1 傾倒醚層前 圖2 傾倒醚層后 6.3.1.8 用少量混合溶劑沖洗瓶頸外部， 沖洗液收集在脂肪收集瓶中。 要防止溶劑濺到抽脂瓶的外面。 6.3.1.9 向抽脂瓶中加入 5 mL 乙醇，用乙醇沖洗瓶頸內(nèi)壁，按 6.3.1.2 所述進(jìn)行混合。重復(fù) 6.3.1.36.3.1.8 操作，再進(jìn)行第二次抽提，但只用 15 mL 乙醚和 15 mL 石油醚。 6.3.1.10 重復(fù) 6.3.1.26.3.1.8 操作，再進(jìn)行第三次抽提，但只用 15 mL 乙醚和 15 mL 石油醚。 注：如果產(chǎn)品中脂肪的質(zhì)量分?jǐn)?shù)低于5 %，可只進(jìn)行兩次抽提。 6.3.1.11 合并所有提取液，既可采用蒸餾的方法除去脂肪收集瓶中的溶劑，也可于沸水浴上蒸發(fā)至干來(lái)除掉溶劑。蒸餾前用少量混合溶劑沖洗瓶頸內(nèi)部。 6.3.1.12 將脂肪收集瓶放入 102 2 的烘箱中加熱 1 h，取出脂肪收集瓶，冷卻至室溫，稱量，精確至 0.1 mg。 6.3.1.13 重復(fù) 6.3.1.12 操作， 直到脂肪收集瓶?jī)纱芜B續(xù)稱量差值不超過(guò) 0.5 mg， 記錄脂肪收集瓶和抽提物的最低質(zhì)量。 6.3.1.14 為驗(yàn)證抽提物是否全部溶解，向脂肪收集瓶中加入 25 mL 石油醚，微熱，振搖，直到脂肪全部溶解。 如果抽提物全部溶于石油醚中， 則含抽提物的脂肪收集瓶的最終質(zhì)量和最初質(zhì)量之差， 即為脂肪含量。 6.3.1.15 若抽提物未全部溶于石油醚中，或懷疑抽提物是否全部為脂肪，則用熱的石油醚洗提。小心地倒出石油醚，不要倒出任何不溶物，重復(fù)此操作 3 次以上，再用石油醚沖洗脂肪收集瓶口的內(nèi)部。 最后，用混合溶劑沖洗脂肪收集瓶口的外部，避免溶液濺到瓶的外壁。將脂肪收集瓶放入102 2 的烘箱中，加熱1 h，按6.3.1.12和6.3.1.13所述操作。 6.3.1.16 取 6.3.1.13 中測(cè)得的質(zhì)量和 6.3.1.15 測(cè)得的質(zhì)量之差作為脂肪的質(zhì)量。 注：選擇帶有虹吸管或洗瓶附件的抽脂管時(shí)，步驟如附錄A（標(biāo)準(zhǔn)的附錄）所述。 6.3.2 乳粉和乳基嬰幼兒食品 稱取混勻后的試樣，高脂乳粉、全脂乳粉、全脂加糖乳粉和乳基嬰幼兒食品：約1 g（精確至0.0001 g），脫脂乳粉、 乳清粉、酪乳粉：約1.5 g（精確至0.0001 g）。 6.3.2.1 不含淀粉樣品 加入 10 mL 65 5 的水，將試樣洗入抽脂瓶的小球中，充分混合，直到試樣完全分散，放入流動(dòng)水中冷卻。 6.3.2.2 含淀粉樣品 將試樣放入抽脂瓶中，加入約0.1 g的淀粉酶（4.1）和一小磁性攪拌棒，混合均勻后，加入8 mL10 mL 45 的蒸餾水，注意液面不要太高。蓋上瓶塞于攪拌狀態(tài)下，置65 水浴中2 h，每隔10 min搖混一次。為檢驗(yàn)淀粉是否水解完全可加入兩滴約0.1 mol/L的碘溶液（4.7），如無(wú)藍(lán)色出現(xiàn)說(shuō)明水解完全，否則將抽脂瓶重新置于水浴中，直至無(wú)藍(lán)色產(chǎn)生。冷卻抽脂瓶。 GB 5413.32010 4 以下操作同6.3.1.16.3.1.16。 6.3.3 煉乳 脫脂煉乳、全脂煉乳和部分脫脂煉乳稱取約3 g5 g、高脂煉乳稱取約1.5 g（精確至0.0001 g），用10 mL蒸餾水，分次洗入抽脂瓶小球中，充分混合均勻。 以下操作同6.3.1.16.3.1.16。 6.3.4 奶油、稀奶油 先將奶油試樣放入溫水浴中溶解并混合均勻后，稱取試樣約0.5 g樣品（精確至0.0001 g），稀奶油稱取1g于抽脂瓶中，加入8 mL10 mL 45的蒸餾水。加 2 mL氨水充分混勻。 以下操作同6.3.1.16.3.1.14。 6.3.5 干酪 稱取約2 g研碎的試樣（精確至0.0001 g）于抽脂瓶中，加10 mL鹽酸（4.9），混勻，加塞，于沸水中加熱20 min30 min。以下操作按6.3.1.26.3.1.16操作。 7 分析結(jié)果表述 樣品中脂肪含量按式（1）計(jì)算： 1004321=m)mm()mm(X(1) 式中： X樣品中脂肪含量，單位為克每百克（g/100g）； m樣品的質(zhì)量，單位為克（g）； m16.3.1.13 中測(cè)得的脂肪收集瓶和抽提物的質(zhì)量，單位為克（g）； m2脂肪收集瓶的質(zhì)量，或在有不溶物存在下，6.3.1.15 中測(cè)得的脂肪收集瓶和不溶物的質(zhì)量，單位為克（g）； m3空白試驗(yàn)中，脂肪收集瓶和 6.3.1.13 中測(cè)得的抽提物的質(zhì)量，單位為克（g）； m4空白試驗(yàn)中脂肪收集瓶的質(zhì)量，或在有不溶物存在時(shí)，6.3.1.15 中測(cè)得的脂肪收集瓶和不溶物的質(zhì)量，單位為克（g）。 以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。 8 精密度 在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果之差應(yīng)符合： 脂肪含量15%，0.3g/100g； 脂肪含量 515%，0.2g/100g； 脂肪含量5%，0.1g/100g。 9 其他 實(shí)驗(yàn)過(guò)程注意事項(xiàng)： 9.1 空白試驗(yàn)檢驗(yàn)試劑 要進(jìn)行空白試驗(yàn)，以消除環(huán)境及溫度對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的影響。 進(jìn)行空白試驗(yàn)時(shí)在脂肪收集瓶中放入 1 g 新鮮的無(wú)水奶油。必要時(shí)，于每 100 mL 溶劑中加入 1 g無(wú)水奶油后重新蒸餾，重新蒸餾后必須盡快使用。 GB 5413.32010 5 9.2 空白試驗(yàn)與樣品測(cè)定同時(shí)進(jìn)行 對(duì)于存在非揮發(fā)性物質(zhì)的試劑可用與樣品測(cè)定同時(shí)進(jìn)行的空白試驗(yàn)值進(jìn)行校正。 抽脂瓶與天平室之間的溫差可對(duì)抽提物的質(zhì)量產(chǎn)生影響。在理想的條件下（試劑空白值低，天平室溫度相同，脂肪收集瓶充分冷卻），該值通常小于 0.5 mg。在常規(guī)測(cè)定中，可忽略不計(jì)。 如果全部試劑空白殘余物大于 0.5 mg， 則分別蒸餾 100 mL 乙醚和石油醚， 測(cè)定溶劑殘余物的含量。用空的控制瓶測(cè)得的量和每種溶劑的殘余物的含量都不應(yīng)超過(guò) 0.5 mg。 否則應(yīng)更換不合格的試劑或?qū)υ噭┻M(jìn)行提純。 9.3 乙醚中過(guò)氧化物的檢驗(yàn) 取一只玻璃小量筒，用乙醚沖洗，然后加入 10 mL 乙醚，再加入 1 mL 新制備的 100 g/L 的碘化鉀溶劑，振蕩，靜置 1 min，兩相中均不得有黃色。 也可使用其他適當(dāng)?shù)姆椒z驗(yàn)過(guò)氧化物。 在不加抗氧化劑的情況下，為長(zhǎng)久保證乙醚中無(wú)過(guò)氧化物，使用前三天按下法處理： 將鋅箔削成長(zhǎng)條，長(zhǎng)度至少為乙醚瓶的一半，每升乙醚用 80 cm2鋅箔。 使用前，將鋅片完全浸入每升中含有 10 g 五水硫酸銅和 2 mL 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 98 %的硫酸中 1 min，用水輕輕徹底地沖洗鋅片，將濕的鍍銅鋅片放入乙醚瓶中即可。也可以使用其他方法，但不得影響檢測(cè)結(jié)果。 第二法 10 原理 在乳中加入硫酸破壞乳膠質(zhì)性和覆蓋在脂肪球上的蛋白質(zhì)外膜，離心分離脂肪后測(cè)量其體積。 11 試劑和材料 11.1 硫酸（H2SO4）：分析純，20約 1.84 g/L。 11.2 異戊醇（C5H12O）：分析純。 12 儀器和設(shè)備 12.1 乳脂離心機(jī)。 12.2 蓋勃氏乳脂計(jì)：最小刻度值為 0.1 %，見圖 3。 GB 5413.32010 6 圖 3 蓋勃氏乳脂計(jì) 12.3 10.75 mL 單標(biāo)乳吸管。 13 分析步驟 于蓋勃氏乳脂計(jì)中先加入 10 mL 硫酸（11.1） ，再沿著管壁小心準(zhǔn)確加入 10.75 mL 樣品，使樣品與硫酸不要混合，然后加 1 mL 異戊醇（11.2） ，塞上橡皮塞，使瓶口向下，同時(shí)用布包裹以防沖出，用力振搖使呈均勻棕色液體，靜置數(shù)分鐘（瓶口向下） ，置 65 70 水浴中 5 min，取出后置于乳脂離心機(jī)中以 1100 轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心 5 min，再置于 65 70 水浴水中保溫 5 min（注意水浴水面應(yīng)高于乳脂計(jì)脂肪層） 。取出，立即讀數(shù)，即為脂肪的百分?jǐn)?shù)。 14 精密度 在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的 5%。 GB 5413.32010 7 附 錄 A （資料性附錄） 使用帶虹吸管或洗瓶的抽脂管的操作步驟 A.1 步驟 A.1.1 脂肪收集瓶的準(zhǔn)備：見6.1。 A.1.2 空白試驗(yàn)：見6.2和9.2。 A.1.3 測(cè)定 A.1.3.1 巴氏殺菌、滅菌乳、生乳、發(fā)酵乳、調(diào)制乳：稱取充分混勻樣品 10 g（精確至 0.001 g）于抽脂管底部。 乳粉及乳基嬰幼兒食品：稱取混勻后的樣品高脂乳粉、全脂乳粉、全脂加糖乳粉和乳基嬰幼兒配方食品：約1g， 脫脂乳粉、 乳清粉、 酪乳粉： 約1.5 g（精確至0.001 g） ， 于抽脂管底部， 加入10 mL 65 5 的水，充分混合，直到樣品完全分散，放入流動(dòng)水中冷卻。 煉乳：脫脂煉乳稱取約 10 g、全脂煉乳和部分脫脂煉乳稱取約 3 g5 g；高脂煉乳稱取約 1.5g（精確至 0.001g） ，于抽脂管底部。加入 10 mL 水，充分混合均勻。 奶油、稀奶油：先將奶油樣品放入溫水浴中溶解并混合均勻后，奶油稱取約 0.5 g 樣品，稀奶油稱取 1g 于抽脂管底部（精確至 0.001 g） 。 上述樣品接以下 A.1.3.1.1 操作。 干酪：稱取約 2 g 研碎的樣品（精確至 0.001 g） 。加水 9 mL、氨水 2 mL，用玻璃棒攪拌均勻后微微加熱使酪蛋白溶解，用鹽酸（4.9）中和后再加鹽酸（4.9）10 mL，加海砂 0.5 g，蓋好玻璃蓋，以文火煮沸 5 min，冷卻后將燒杯內(nèi)容物移入抽脂管底部，用 25 mL 乙醚沖洗燒杯，洗液并入抽脂管中，以下操作按 A.1.3.1.4“加軟木塞”以后操作。 A.1.3.1.1 加入2 mL氨水，與管底部已稀釋的樣品徹底混合。加入氨水后，應(yīng)立即進(jìn)行下步操作。 A.1.3.1.2 將抽脂管放入65 5 的水浴中，加熱15 min20 min，偶爾振蕩樣品管，然后冷卻至室溫。 A.1.3.1.3 加入10 mL乙醇，在管底部輕輕徹底地混合，必要時(shí)加入兩滴剛果紅溶液。 A.1.3.1.4 加入25 mL乙醚，加軟木塞（已被水飽和） ，或用水浸濕的其他瓶塞，上下反轉(zhuǎn)1 min，不要過(guò)度（避免形成持久性乳化液） 。必要時(shí)，將管子放入流動(dòng)的水中冷卻，然后小心地打開軟木塞，用少量的混合溶劑（使用洗瓶）沖洗塞子和管頸，使沖洗