GB 5413.13-2010發(fā)布稿 嬰幼兒食品和乳品中維生素B6的測(cè)定 發(fā)布稿.pdf

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 5413.132010前 言 本標(biāo)準(zhǔn)代替GB 5413.13-1997嬰幼兒配方食品和乳粉 維生素B6的測(cè)定。 本標(biāo)準(zhǔn)與GB 5413.13-1997相比，主要變化如下： 標(biāo)準(zhǔn)名稱改為嬰幼兒食品和乳品中維生素B6的測(cè)定； 完善了維生素B6含量的計(jì)算。 本標(biāo)準(zhǔn)附錄A為資料性附錄。 本標(biāo)準(zhǔn)所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為： GB 5413-1985、GB 5413.13-1997。 中 華 人 民 共 和 國(guó) 衛(wèi) 生 部中 華 人 民 共 和 國(guó) 衛(wèi) 生 部 發(fā)布 2010-03-26 發(fā)布 2010-06-01 實(shí)施食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 嬰幼兒食品和乳品中維生素 B6的測(cè)定 National food safety standard Determination of vitamin B6 in foods for infants and young children, milk and milk products GB 5413.132010 I 前 言 本標(biāo)準(zhǔn)代替GB 5413.13-1997嬰幼兒配方食品和乳粉 維生素B6的測(cè)定。 本標(biāo)準(zhǔn)與GB 5413.13-1997相比，主要變化如下： 標(biāo)準(zhǔn)名稱改為嬰幼兒食品和乳品中維生素B6的測(cè)定； 完善了維生素B6含量的計(jì)算。 本標(biāo)準(zhǔn)附錄A為資料性附錄。 本標(biāo)準(zhǔn)所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為： GB 5413-1985、GB 5413.13-1997。 GB 5413.132010 1 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 嬰幼兒食品和乳品中維生素 B6的測(cè)定 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了嬰幼兒食品和乳品中維生素 B6的測(cè)定方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于嬰幼兒食品和乳品中維生素 B6的測(cè)定。 2 規(guī)范性引用文件 本標(biāo)準(zhǔn)中引用的文件對(duì)于本標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 僅所注日期的版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。 3 原理 試樣經(jīng)熱水提取等前處理后，經(jīng) C18色譜柱分離，熒光檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量測(cè)定維生素 B6（吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺）的含量。 4 試劑和材料 除非另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純，水為 GB/T 6682 規(guī)定的一級(jí)水。 4.1 淀粉酶：酶活力1.5 U/mg。 4.2 辛烷磺酸鈉：優(yōu)級(jí)純。 4.3 冰乙酸：優(yōu)級(jí)純。 4.4 甲醇：色譜純。 4.5 三乙胺：色譜純。 4.6 鹽酸溶液（5.0 mol/L，0.1 mol/L）。 4.7 氫氧化鈉溶液（5.0 mol/L，0.1 mol/L）。 4.8 標(biāo)準(zhǔn)溶液 4.8.1 維生素 B6（吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺）標(biāo)準(zhǔn)貯備液（1 mg/mL）：稱取 0.05 g（精確至 0.0001 g）吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺標(biāo)準(zhǔn)品，分別置于 50 mL 容量瓶中，用水溶解定容。 4.8.2 維生素 B6（吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺）混合標(biāo)準(zhǔn)中間液（20 g/mL）：分別準(zhǔn)確吸取吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺標(biāo)準(zhǔn)貯備液（4.8.1）1 mL 至 50 mL 容量瓶中，用水定容。 4.8.3 維生素 B6（吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺）混合標(biāo)準(zhǔn)系列測(cè)定液：分別準(zhǔn)確吸取維生素 B6混合標(biāo)準(zhǔn)中間液（4.8.2）0.0 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、5.0 mL，至 100 mL 容量瓶中，用水定容。該標(biāo)準(zhǔn)系列濃度分別為 0.00 g/mL、0.20 g/mL、0.40 g/mL、0.60 g/mL、1.00 g/mL。臨用前配制。 5 儀器和設(shè)備 5.1 超聲波振蕩器。 GB 5413.132010 2 5.2 高效液相色譜儀，帶熒光檢測(cè)器。 5.3 天平：感量為 0.1 mg。 5.4 pH 計(jì)：精度為 0.01。 5.5 培養(yǎng)箱：30 80 。 6 分析步驟 6.1 試樣預(yù)處理 6.1.1 含淀粉的試樣：稱取混合均勻固體試樣約 5.0 g（精確至 0.0001 g），加入約 25 mL 45 50 的水，或稱取混合均勻液體試樣約 20.0 g（精確至 0.0001 g）于 150 mL 錐形瓶中。加入約 0.5 g 淀粉酶（4.1），混勻后向錐形瓶中充氮，蓋上瓶塞，置 50 60 培養(yǎng)箱內(nèi)約 30 min。取出冷卻至室溫。 6.1.2 不含淀粉的試樣： 稱取混合均勻固體試樣約 5.0 g （精確至 0.0001 g） ， 加入約 25 mL 45 50 的水，或稱取混合均勻液體試樣約 20.0 g（精確至 0.0001 g）于 150 mL 錐形瓶中?；靹虿⒊浞秩芙?，靜置 5 min10 min，冷卻至室溫。 6.2 待測(cè)液的制備 6.2.1 用鹽酸溶液（4.6）調(diào)節(jié)試樣溶液的 pH 值至 1.7 0.1，放置約 1 min。再用氫氧化鈉溶液（4.7）調(diào)節(jié)試樣溶液的 pH 值至 4.5 0.1。 6.2.2 將試樣溶液轉(zhuǎn)移至 50 mL 容量瓶中，用水沖洗錐形瓶。洗液合并于 50 mL 容量瓶中，用水定容至 50 mL。 6.2.3 把上述容量瓶放入超聲波振蕩器中，超聲振蕩約 10 min。 6.2.4 另取 50 mL 三角瓶，上面放入三角漏斗和濾紙，把超聲波振蕩的試樣溶液倒入其中，自然過(guò)濾。濾液再經(jīng) 0.45 m 微孔濾膜加壓過(guò)濾，用試管收集，即為試樣待測(cè)液。 6.3 參考色譜條件 色譜柱：C18柱 （粒徑5 m，150 mm 4.6 mm）或同等性能的色譜柱。 流動(dòng)相：甲醇（4.4）50 mL，辛烷磺酸鈉（4.2）2.0 g，三乙胺（4.5）2.5 mL，用水溶解并定容到1000 mL后，用冰乙酸（4.3）調(diào)pH至3.0 0.1，再經(jīng)0.45 m微孔濾膜加壓過(guò)濾。 流速：1.0 mL/min。 檢測(cè)波長(zhǎng)：激發(fā)波長(zhǎng) 293 nm，發(fā)射波長(zhǎng) 395 nm。 進(jìn)樣量：10 L。 6.4 定量分析 6.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 將維生素 B6混合標(biāo)準(zhǔn)系列測(cè)定液（4.8.3）依次進(jìn)行色譜測(cè)定（其標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖參見(jiàn)附錄 A 中圖A.1）。記錄各組分的色譜峰面積或峰高，以峰面積或峰高為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定液的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 6.4.2 試樣測(cè)定 將試樣待測(cè)液（6.2.4）進(jìn)行色譜測(cè)定。記錄各組分色譜峰面積或峰高，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出試樣待測(cè)液中維生素 B6各組分的濃度 ci。 7 分析結(jié)果的表述 7.1 試樣中維生素B6各組分的含量的計(jì)算 試樣中維生素B6各組分的含量按式（1）計(jì)算： GB 5413.132010 3 mVcXii100=（1） 式中： Xi試樣中組分的含量，單位為微克每百克（g/100 g）； ci試樣待測(cè)液中維生素B6各組分的濃度，單位為微克每毫升（g/mL）； m試樣的質(zhì)量，單位為克（g）； V試樣溶液的體積，單位為毫升（mL）。 7.2 試樣中維生素B6的含量的計(jì)算 試樣中維生素B6的含量按式（2）計(jì)算： 006. 1012. 1+=胺醛醇XXXX（2） 式中： X試樣中維生素B6含量，單位為微克每百克（g/100 g）； X醇試樣中吡哆醇含量，單位為微克每百克（g/100 g）； X醛試樣中吡哆醛含量，單位為微克每百克（g/100 g）； X胺試樣中吡哆胺含量，單位為微克每百克（g/100 g）； 1.012吡哆醛的含量換算成吡哆醇的系數(shù)； 1.006吡哆胺的含量換算成吡哆醇的系數(shù)。 注：試樣中維生素B6含量以吡哆醇計(jì)。 以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。 8 精密度 在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10 %。 9 其他 本標(biāo)準(zhǔn)檢出限為：吡哆醇 1.5 g/100 g、吡哆醛 1.3 g/100 g、吡哆胺 1.6 g/100 g。 GB 5413.132010 4 附錄 A （資料性附錄） 維生素 B6標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖 A.1 維生素 B6標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖 維生素 B6標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖見(jiàn)圖 A.1。 F luores cence0