不同劑量五味子多糖灌胃給藥鎮(zhèn)痛作用的觀察.doc

不同劑量五味子多糖灌胃給藥鎮(zhèn)痛作用的觀察【摘要】目的：研究不同劑量五味子多糖灌胃給藥對(duì)小鼠酒石酸銻鉀扭體反應(yīng)和大鼠甲醛致痛行為的抑制作用.方法：將50只小鼠隨機(jī)分為生理鹽水組，阿司匹林組（100mg/kg）和五味子多糖20，50和100mg/kg不同濃度組.將50只大鼠隨機(jī)分為生理鹽水組，阿司匹林（100mg/kg）組，五味子多糖20，50和100mg/kg不同濃度組.五味子多糖采取灌胃給藥，連續(xù)給藥7d，于第8日給藥后進(jìn)行痛行為學(xué)檢測(cè).分別給予小鼠腹腔注射0.2，0.5mL/L酒石酸銻鉀后觀察并記錄10min的扭體次數(shù).大鼠左后足底掌側(cè)皮下注射20g/L甲醛50L后，立即放入20cm20cm25cm的樹脂玻璃箱中，記錄大鼠60min內(nèi)每5min出現(xiàn)自發(fā)縮足、舔足的持續(xù)時(shí)間.以縮足和舔足時(shí)間之和作為傷害性反應(yīng)的行為學(xué)指標(biāo).結(jié)果：五味子多糖灌胃給藥對(duì)于小鼠的扭體反應(yīng)具有顯著的抑制作用，且呈一定的劑量依賴性，劑量20，50和100mg/kg下的扭體次數(shù)分別為（27.805.81）次，（24.903.75）次和（15.303.43）次，與對(duì)照組（32.907.40）次相比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<；0.05）.50和100mg/kg五味子多糖可顯著降低甲醛第一時(shí)相和第二時(shí)相的傷害性反應(yīng)表達(dá)，而20mg/kg五味子多糖對(duì)甲醛疼痛雙相反應(yīng)無抑制作用.結(jié)論：五味子多糖灌胃給藥對(duì)于小鼠扭體試驗(yàn)和大鼠甲醛試驗(yàn)兩種不同性質(zhì)的病理性痛都有鎮(zhèn)痛作用.【關(guān)鍵詞】五味子多糖；灌胃；鎮(zhèn)痛0引言在對(duì)鎮(zhèn)痛藥物的探索研究中，中藥、天然藥物越來越凸顯其藥效良好、無成癮性、不良反應(yīng)少及資源豐富等優(yōu)勢(shì),已成為現(xiàn)代藥物研究的熱點(diǎn).五味子又名五梅子、玄及、會(huì)及、山花椒等，木蘭科多年生落葉藤本.五味子多糖是從五味子干燥成熟果實(shí)中提取的含有五味子總多糖，17種以上氨基酸和16種以上微量元素的混合物1，具有保肝、抗疲勞、抗衰老、增強(qiáng)免疫等藥理作用2-3.以往的研究4-6表明，五味子多糖灌胃給藥具有明顯的鎮(zhèn)靜催眠作用，但有關(guān)其鎮(zhèn)痛作用的研究還少見報(bào)道.我們利用小鼠扭體試驗(yàn)和大鼠甲醛試驗(yàn)建立兩種不同的病理性痛模型，以觀察不同劑量五味子多糖灌胃給藥是否可產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用.1材料和方法1.1材料昆明種小鼠50只，體質(zhì)量1824g，雌雄兼用；SD大鼠50只，體質(zhì)量180240g，雌雄兼用（第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供）；五味子多糖（西安新通制藥有限公司）；阿司匹林（南京制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)920916）；酒石酸銻鉀，甲醛（西安新通制藥有限公司）.1.2方法1.2.1實(shí)驗(yàn)分組將50只小鼠隨機(jī)分為生理鹽水組，阿司匹林組（100mg/kg），五味子多糖20，50和100mg/kg不同濃度組.每組動(dòng)物10只.50只大鼠也同樣隨機(jī)分為生理鹽水組，阿司匹林組（100mg/kg），五味子多糖20，50和100mg/kg不同濃度組.每組動(dòng)物10只.五味子多糖和生理鹽水組采取灌胃給藥，連續(xù)給藥7d，在第8日給藥后進(jìn)行痛行為學(xué)檢測(cè).阿司匹林組在第8日五味子多糖和生理鹽水組給藥的同時(shí)采取腹腔注射給藥.1.2.2模型制作1.2.2.1小鼠酒石酸銻鉀扭體試驗(yàn)給予小鼠腹腔注射0.2和0.5mL/L酒石酸銻鉀，給藥后觀察和記錄10min的扭體次數(shù),并計(jì)算鎮(zhèn)痛率.小鼠一次扭體的判定標(biāo)準(zhǔn)為：腹部收縮，四肢伸展，軀干拉伸.鎮(zhèn)痛率的計(jì)算方法：鎮(zhèn)痛率（%）=（五味子多糖組/阿司匹林組扭體次數(shù)-生理鹽水組扭體次數(shù)）/生理鹽水組扭體次數(shù)100%.1.2.2.2大鼠甲醛試驗(yàn)在大鼠左后足底掌側(cè)皮下注射20g/L甲醛50L后，立即將大鼠放入20cm20cm25cm的樹脂玻璃箱中，用秒表記錄大鼠60min內(nèi)每5min出現(xiàn)的自發(fā)縮足和舔足的持續(xù)時(shí)間.采用Abbott等7的方法將縮足和舔足時(shí)間之和作為傷害性反應(yīng)的行為學(xué)指標(biāo).選擇間隔觀察時(shí)間為5min是因甲醛試驗(yàn)的第一時(shí)相時(shí)間為05min.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：數(shù)據(jù)以xs表示，五味子多糖組和阿司匹林組和對(duì)照組之間的差異比較用SPSS11.0軟件進(jìn)行LSDt檢驗(yàn).P<；0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.2結(jié)果2.1五味子多糖對(duì)小鼠扭體反應(yīng)的影響小鼠酒石酸銻鉀扭體試驗(yàn)結(jié)果顯示，五味子多糖灌胃給藥對(duì)于小鼠的扭體反應(yīng)具有顯著的抑制作用，且呈一定的劑量依賴性.五味子多糖20mg/kg組，50mg/kg組和100mg/kg組的小鼠扭體次數(shù)分別為（27.805.81）次，（24.903.75）次和（15.303.43）次，與生理鹽水對(duì)照組（32.907.40）次相比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（20mg/kg組P<；0.05，50mg/kg組和100mg/kg組P<；0.01），其鎮(zhèn)痛率分別為15.5%，24.3%和53.5%.2.2五味子多糖對(duì)大鼠痛行為持續(xù)時(shí)間的影響在大鼠左后足掌面皮下注射20g/L甲醛50L后，出現(xiàn)典型的雙相傷害性反應(yīng)，即在致痛后立即出現(xiàn)致痛側(cè)的縮足、舔足行為，持續(xù)約5min，相對(duì)安靜約510min，再次出現(xiàn)上述傷害性行為表現(xiàn)，持續(xù)約40min（圖1A）.結(jié)果表明，較高劑量的五味子多糖（50mg/kg和100mg/kg）可顯著降低甲醛第一時(shí)相和第二時(shí)相的傷害性反應(yīng)表達(dá)，而低劑量的五味子多糖（20mg/kg）對(duì)甲醛疼痛雙相反應(yīng)無抑制作用（圖1B）.bP<；0.01vs生理鹽水對(duì)照組（n=10，xs）.A：60min內(nèi)每5min大鼠的縮足、舔足時(shí)間；B：第一時(shí)間（05min）和第二時(shí)間（1060min）內(nèi)大鼠的縮足、舔足時(shí)間.圖1五味子多糖對(duì)大鼠甲醛雙相反應(yīng)的抑制作用（略）3討論扭體試驗(yàn)和甲醛試驗(yàn)?zāi)軌蚰M不同性質(zhì)的臨床病理性痛，是目前國內(nèi)外公認(rèn)的較為可靠的動(dòng)物疼痛模型，已普遍應(yīng)用于疼痛機(jī)制研究以及鎮(zhèn)痛藥物評(píng)價(jià).本研究采用的痛刺激均為化學(xué)刺激，但所引起的疼痛性質(zhì)是不完全相同：扭體法出現(xiàn)的是內(nèi)臟痛，而甲醛致痛模型出現(xiàn)的是軀體體表痛.研究結(jié)果表明五味子多糖對(duì)于酒石酸銻鉀所致的內(nèi)臟痛和甲醛所致傷害性行為反應(yīng)都有顯著抑制作用，可為新型鎮(zhèn)痛藥物的開發(fā)與利用提供參考.至于其鎮(zhèn)痛機(jī)制，目前還少見報(bào)道.根據(jù)以往的研究5-6，8報(bào)道，五味子具有很強(qiáng)的鎮(zhèn)靜催眠作用并且能夠有效治療環(huán)己酰亞胺誘導(dǎo)的健忘癥，提示五味子能夠參與調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的興奮性.對(duì)于五味子多糖的鎮(zhèn)靜催眠作用，Yoshihiro9的研究結(jié)果表明5羥色胺和前列腺素D2(PGD2)，作為內(nèi)源性促睡眠物質(zhì)，可能參與了這個(gè)調(diào)節(jié)過程.對(duì)于環(huán)己酰亞胺誘導(dǎo)的健忘癥，五味子多糖的治療作用可以為5羥色胺(2)受體拮抗劑所增強(qiáng)；為5羥色胺(1A)受體激動(dòng)劑、氨基丁酸(A)受體拮抗劑和膽堿能受體拮抗劑所減弱10.因此，我們推測(cè)，五味子多糖對(duì)于酒石酸銻鉀所致的內(nèi)臟痛和甲醛所致傷害性行為反應(yīng)的鎮(zhèn)痛作用，可能是由于其對(duì)于內(nèi)源性神經(jīng)遞質(zhì)及其受體的調(diào)節(jié)作用產(chǎn)生的.然而，揭示其鎮(zhèn)痛作用機(jī)制還需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究.【參考文獻(xiàn)】1張?zhí)m杰，張維華，趙珊紅.北五味子果實(shí)中多糖的提取與純化研究J.鞍山師范學(xué)院學(xué)報(bào),2002,4(1):58-60.2曾靖，叢錚.五味子多糖藥理作用的初步觀察J.贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),1995,15(1):16-18.3YipAY,LooWT,ChowLW.FructusSchisandrae(Wuweizi)containingcompoundinmodulatinghumanlymphaticsystemaPhaseIminimizationclinicaltrialJ.BiomedPharmacother,2007,61(9):588-590.4李玉娟，梁鑫淼，肖紅斌，等.生、炒酸棗仁鎮(zhèn)靜催眠作用及化學(xué)成分比較J.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2003,20(1):35-37.5HuangF,XiongY,XuL,etal.SedativeandhypnoticactivitiesoftheethanolfractionfromFructusSchisandraeinmiceandratsJ.JEthnopharmacol,2007,4:110(3):471-475.6霍艷雙，陳曉輝，李康，等.北五味子的鎮(zhèn)靜、催眠作用J.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2005,2(22):126-128.7AbbottFV,FraklinKB,WestbrookRF.Theformalintest:scoringpropertiesofthefirstandsecondphasesofthepainresponseinratsJ.Pain,1995,60(6):912.8HsiehMT,WuCR,WangWH,etal.TheamelioratingeffectofthewaterlayerofFructusSchisandraeoncycloheximideinducedamnesiainrats:InteractionwithdrugsactingatneurotransmitterreceptorsJ.PharmacolRes，2001,43(1):17-22.9YoshihiroU.Molecularmechanismof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