幽門螺桿菌檢測ppt課件

幽門螺桿菌感染的實驗診斷 講課內(nèi)容 第一節(jié)幽門螺桿菌特點第二節(jié)幽門螺桿菌感染的檢測方法第三節(jié)幽門螺桿菌檢測方法的臨床應(yīng)用 123 第一節(jié)幽門螺桿菌特點 幽門螺桿菌 Helicobacterpylori簡稱HP 呈弧形或S形 有1 2個微小彎曲 屬微需氧菌 在pH值為6 8時繁殖最為活躍 該菌具有豐富的尿素酶 可分解食物中的尿素產(chǎn)生氨 該菌生長于胃粘液深層 胃粘膜表面 多在胃竇部以胃小凹 上皮皺褶的內(nèi)折及腺腔內(nèi)為多 H Pylori感染和十二指腸潰瘍 H Pylori感染D G細(xì)胞功能改變遺傳易感性 壁細(xì)胞總體增加B型慢性胃竇炎 胃泌素胃酸分泌量H Pylori的遷移十二指腸粘膜胃上皮化生十二指腸球炎十二指腸球潰瘍 H Pylori感染和胃癌的關(guān)系 淺表性胃炎正常胃粘膜基因損傷H Pylori感染彌漫性胃癌萎縮性胃炎環(huán)境因素胃粘膜腸上皮化生高CagA HP滴度宿主因素的H pylori菌株感染腸型早期胃癌進(jìn)展期胃癌 3 HP的毒力作用 取決于 定植能力 菌株的基因型 細(xì)菌的圓球體樣型態(tài) 對抗菌藥物的敏感性 第二節(jié)幽門螺桿菌感染的檢測 侵入性檢測方法 非侵入性檢測方法 快速尿素酶試驗病理切片染色培養(yǎng)黏膜涂片革蘭氏染色基因方法 PCR等 13C 或14C 尿素呼氣試驗Hp糞便抗原試驗Hp血清抗體試驗 試驗原理 HP能產(chǎn)生豐富尿素酶 將尿素分解 產(chǎn)生2個分子的氨 使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性 酚紅呈粉紅色 操作過程 活檢同時取2塊組織進(jìn)行檢測 胃竇和胃體各1塊 標(biāo)本放置于試劑后觀察顏色變化 注意事項 檢測結(jié)果受試劑pH值 取材部位 組織大小 細(xì)菌量 觀察時間 環(huán)境溫度等因素影響 一 快速尿素酶試驗RUT 一 創(chuàng)傷性檢查 胃鏡檢查胃黏膜取材 直接涂片革蘭氏染色 也可包埋切片 常規(guī)HE染色或銀染 直接鏡檢觀察Hp 直接鏡檢 其它組織學(xué) 二 組織學(xué)檢查 1 免疫組化染色特異性高 2 HE染色可同時作病理診斷 3 熒光原位雜交 FISH 具有較高敏感性 1 在胃鏡取胃粘膜放在轉(zhuǎn)運培養(yǎng)基中 2 接種于Hp牛腦浸液培養(yǎng)基 分區(qū)劃線 3 置5 12 CO2培養(yǎng)箱35 37 3 5d形成小的半透明灰色菌落 有微弱的溶血環(huán) 培養(yǎng)過程 診斷Hp最可靠的方法 可作為驗證其他診斷性試驗的 金標(biāo)準(zhǔn) 一般用于藥敏試驗和科研 特點 三 細(xì)菌培養(yǎng) 幽門螺桿菌的尿素酶 A B C D 基因 16S rDNA基因 VacA及CagA基因均已克隆成功 根據(jù)幽門螺桿菌不同的耙基因 設(shè)計不同的引物 從而建立不同的PCR系統(tǒng) 擴(kuò)增產(chǎn)物可經(jīng)凝膠電泳分析 原理與方法 特點 四 聚合酶鏈反應(yīng)試驗 PCR檢測技術(shù) 1 與細(xì)菌培養(yǎng)和組織學(xué)染色鏡檢比較無明顯優(yōu)越性 2 現(xiàn)在可收集胃液PCR檢測幽門螺桿菌敏感性高 但可能與口腔和胃內(nèi)其它尿素酶陽性菌叢起交叉反應(yīng) 注 HP的基因分型 HP菌屬亞群 及致病性 VacA基因表達(dá)空泡毒素87KDCagA基因表達(dá)細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白128KDCagA基因僅出現(xiàn)于VacA產(chǎn)生細(xì)胞毒效應(yīng)時 是VacA產(chǎn)生效果的標(biāo)志 原理和過程 HP能產(chǎn)生豐富尿素酶 能分解胃中的尿素 當(dāng)整粒攝入含同位素碳 13的尿素膠囊后 碳 13尿素在尿素酶作用下 分解為氨和碳 13 二氧化碳 碳 13 二氧化碳被小腸上段吸收后 進(jìn)入血循環(huán) 并隨呼氣排出 分析呼氣中的碳 13就可診斷該細(xì)菌的存在 特點和注意事項 1 易于操作 可反映全胃Hp感染狀況 2 檢測前一個周內(nèi)應(yīng)停用抗生素 鉍劑 質(zhì)子泵抑制劑等藥 3 孕婦 哺乳期婦女及兒童不宜做 一 13C 或14C 尿素呼氣試驗 二 非創(chuàng)傷性檢查 多采用ELISA雙抗體夾心法 或膠體金試條法 留取晨糞便 用稀釋液稀釋 再加入試條或微孔板檢測 原理與方法 特點 二 幽門螺桿菌糞便抗原檢測 1 糞便抗原檢測靈敏度高 準(zhǔn)確性好 HP死亡但抗原成分仍保留下來 故在治療前后都可用 2 適用于所有年齡和類型的患者 兒童 多采用ELISA雙抗原夾心法 或膠體金試條法 可快速檢測人血清 血漿或全血中幽門螺桿菌抗體 原理與方法 特點 三 幽門螺桿菌血清抗體檢測 1 檢測的