（植物學(xué)專業(yè)論文）四種子囊菌的抗氧化活性及抗氧化成分研究.pdf

中文摘要 本研究以四種名貴藥用子囊菌，冬蟲夏草、古尼蟲草、蛹蟲草和黑柄 炭角菌等為材料，通過液體發(fā)酵或人工栽培，獲得了它們的菌絲體及人工 栽培的黑柄炭角菌和蛹蟲草子實體，以d p p h 清除率、還原力、螯合率以 及總酚含量為指標(biāo)，對它們的抗氧化活性進(jìn)行了評價。研究結(jié)果表明： ( 1 ) d p p h 自由基清除活性四種子囊菌的子實體之間無顯著差異 ( p o 0 5 ) ；但菌絲體之間存在一定的顯著差異，其中冬蟲夏草和蛹蟲草菌絲 體的d p p h 清除活性顯著高于黑柄炭角菌( p o 0 5 ) ，卻顯著低于古尼蟲草 ( p o 0 5 ) ，冬蟲夏草和蛹蟲草菌絲體之間無顯著差異( p c s 加繃j 如( f ) c 門刀f 攻m ) x 硼羅勿劣( f ) c s 加p 刀s 括( m ) c 朋訛，西( m ) x 嘲礦勿劣( m ) 。四種子囊菌菌絲體之間存在顯著差異 ( p o 0 5 ) ， 但二者與冬蟲夏草、黑柄炭角菌子實體都存在顯著差異( p cm 杉婦，括( f ) c g w 刀刀f 攻m ) c s 仂p 刀s 括( f ) x 刀i ：；吵勿鉛( m ) c 朋講勉廠括( m ) c s 砌p 瑚捃( m ) c i g w 刀力f 攻f ) 。 ( 4 ) 總酚含量四種子囊菌子實體的總酚含量均顯著高于其菌絲體?？偡?含量的大小順序為c g 甜刀刀f f ( f ) c 耽刀加r 括( f ) c i ，z 力f f ( m ) c s 覷p 瑚括( f ) x 硼礦勿部( f ) c j 伽p 刀s 西( m ) c 優(yōu)f ，f 砌墻( m ) x 嘲羅勿鯔( m ) 。酚類物質(zhì)含量 分別為6 5 4 3 ，6 4 9 3 ，5 4 3 5 ，4 4 2 7 ，4 0 0 8 ，2 7 0 1 ，2 2 7 1 ，1 2 1 4 m g 。 ( 5 ) 總酚含量與還原力、d p p h 清除率的相關(guān)性分析通過分析總酚含 量和還原力、d p p h 清除率i c 5 0 值的關(guān)系，表明總酚含量和還原力、d p p h 清除率正相關(guān)。 采用萃取，硅膠柱層析等方法對蛹蟲草中抗氧化活性成分進(jìn)行了初步 分離，得到了具有抗氧化活性的粗成分7 個，分別為p e 1 、p e 2 、p e 3 、 p e 4 、p e 5 、e a 1 以及e a 4 ，對它們的d p p h 清除活性進(jìn)行了定性和定量 分析，結(jié)果表明，e a - 1 和e a - 4 的自由基清除活性最強(qiáng)，在4 m m l 時， 清除率分別達(dá)到8 5 4 8 和7 2 5 8 。 關(guān)鍵詞：砌，切即桫勿酷，抗氧化，自由基，蟲草，自由基，活性成分 a b s t r a c t t h ea n t i o x i d a n t a c t i v i t i e s o ff o u r s p e c i e s o f 氆s e c 婚題c 巳弋e s l c 0 r d y c e p s s i n e n s i s c o r d y c e p sg u n n i i 。 c o r d y c e p s z 以- j 六e t r j sa n d 刪a r j a 力f g rz i p e 殳) w e r ee v a l u a t e db yd p p hf r e er a d i c a l s c a v e n g i n ga c t i v i t y ，r e d u c i n gp o w e r ， f e r r o u si o nc h e l a t i n ga c t i v i t y a n dt h ec o n t e n to ft o t a lp h e n 0 1i c s t h er e s u l t sa r ea sf 0 1l o w s ( 1 ) d p p hf r e er a d i c a ls c a v e n g i n ga c t i v i t y t h e r ew e r en o s i g n i f i c a n td i f f e r e n c e sa m o n gt h ef r u i t i n gb o d yo ff o u ra s c o m y c e t e s ( p o 0 5 ) b u ts i g n i f i c a n td i f f e r e n c e se x i s t e di nd i f f e r e n tm y c e l i a d p p hs c a v e n g in gc a p a cit yo f t h em y c e1iao fc 刪肜e 玀ss j p 門s j sa n d 仍一弦p p s 矗盯- j 舌甜0 sw a ss i g n i f i c a n t l yh i g h e rt h a na ”a 訂a 力拓t 印p s ( p 0 0 5 ) ，b u ts i g n i f i c a n t l yl o w e rt h a nt h a to f 矧弦哪魯吧，加j j ( p q 。q 吣飛h e 強(qiáng)c e 、l aq tc o r d y c e p ss i n e n s i s 烈c o r d y c e p sm i i i t a r i s d i d n ts h o ws i g n i f i c a n td i f f e r e n c e( p c s i n e n s i s 妊q 、 c g u n n i i 心酗、 x n i g r i p e s c s i n e n s i s 、 c 。m n it a r i s 蛐、 x 。n i g r i p e s 蛐 r e d u c i n gp o w e ro fm y c e l i ao f f o u ra s c o m y c e t e ss h o w e ds i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e ( p o 0 5 ) ， b u tb o t hh a ds i g n i f i c a n td i f f e r e n c ew i t h矧肜印ss j 力e 刀s j s a n ax y l a r i an i g r i p e s 心q q 曲 ( 3 )c h e l a t i n ga b i l i t yo nf e r r o u s i o n s c h e l a t i n ga b i l i t y o f f o u ra s c o m y c e t e sd e c r e a s e di nt h e o r d e ro f上力剃p p s( f ) c m i l i t a r i s 心n c g u n n n 心q c s i n e n s i s ( 吣、 x n i g r i p e s 心酗、 i c m i i i t a r i sq 酗 c s i n e n s i s 心6 、) c g u n n i i 婚、) a 弋5 q oug 廠l ( 4 )t h ec o n t e n to ft o t a lp h e n o li c s t h ec o n t e n to ft o t a l p h e n o l i c s i nt h ef r u i tb o d i e sw a ss i g n i f i c a n t l yh i g h e rt h a nt h e m y c e l i a t h ec o n t e n to ft o t a lp h e n o ld e c r e a s e di nt h eo r d e ro f c 。g u n n i i c m i l i t a r i sq 吣 c g u n n i i 心酗 c s i n e n s i s q 吣、 x n i g r i p e sq n c 。s i n e n s i s 吣酗 c m i l i t a r i s 心吣 x n i g r i p e s 心l c ) a n a w e r e6 5 4 3 ，6 4 9 3 ，5 4 3 5 ，4 4 2 7 ，4 0 0 8 ，2 7 0 1 ，2 2 7 1 ， 1 2 1 4 g m g ， r e s p e c ti v e l y ( 5 )t h er e l a ti v it yb e t w e e nt o t a lp h e n o li c sa n dd p p hs c a v e n g i n g a b i l i t ya n dr e d u c i n gp o w e r t h er e l a t i o no fd p p hs c a v e n g i n g a b i l i t y a n dr e d u c i n gp o w e ri c 5 0v a l u e sa n dt o t a lp h e n 0 1 i c sw a s a n a l y s e d t h er e s u l ts h o w e dt h er e l a t i o n s h i po ft o t a lp h e n 0 1i sa n d d p p hs c a v e n g i n ga b i l i t ya n dr e d u c i n gp o w e rw a sp o s i t i v ec o r r e l a t i o n l i q u i d 一1i q u i de x t r a c ti o na n dc 0 1 u m nc h r o m a t o g r a p h yw e r ep p li e d t os e p a r a t ea n t i o x i d a t i v ec o m p o n e n t si nc o r d y c e p sm i l i t a r i s a n d s e v e n 己r u d ec o r i l p o n e n t ，n a m e dp e 一1 ，p e 一2 ，p e 一3 ，p e 一4 ，p e 一5 ，e a 一1a n d e a 一4 ，w e r eg o t t h e i ra c t i v i t i e sw e r ee v a l u a t e db yq u a l i t a t i v eo r q u a t i t a t i v ea n a l y s i s e a 一1a n de a 一4s h o w e dt h eb e s ta n t i o x i d a n t a c t i v i t y d p p hf r e er a c i c a ls c a v e n g i n g a c t i v i t yw e r e8 5 4 8 a n d 7 2 5 8 ，r e s p e c ti v e l y k e yw 6 r d s ：五夕- 刎a 刀j 鰳e sa n t i o x i d a t i v e ，f r e er a d i c a l ，c o r d y c e p s ， a c tiv ec o m d o u n d i v 湖南師范大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明 本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研 究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含任何其他 個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的 個人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識到本聲明的法律結(jié) 果由本人承擔(dān)。 學(xué)位論文作者簽名：斌7 專鐸) 刁年 月工7 日 湖南師范大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書 本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，研究生 在校攻讀學(xué)位期間論文工作的知識產(chǎn)權(quán)單位屬湖南師范大學(xué)。同意學(xué)校保 留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱 和借閱。本人授權(quán)湖南師范大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入 有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本 學(xué)位論文。 本學(xué)位論文屬于 1 、保密口，在年解密后適用本授權(quán)書。 2 、不保密口。 作槲：黼琿稚期警日 導(dǎo)師簽名：歷當(dāng)f l 、琴乞 日期：口 年5 月q 日“ 四種子囊菌的抗氧化活性及抗氧化成分研究 1 引言 早在1 0 0 年前，人們就已經(jīng)發(fā)現(xiàn)橡膠的老化過程與氧有密切關(guān)系。同 樣，食品中的油脂、脂溶性成分如維生素和類胡蘿卜素及其他組分與氧接 觸后，也會發(fā)生氧化反應(yīng)，出現(xiàn)食品的酸敗、變質(zhì)、褪色、產(chǎn)生異味等現(xiàn) 象。而這些都與自由基反應(yīng)密切相關(guān)。 自由基是指外層軌道上含有未配對電子的原子、分子、離子或基團(tuán)， 其種類繁多，常見的如羥自由基、超氧陰離子自由基等，具有很強(qiáng)的氧化 性，可以對細(xì)胞膜、核酸和蛋白質(zhì)等造成損傷，影響機(jī)體正常功能。在正 常情況下，生物體內(nèi)的抗氧化體系能保持氧自由基產(chǎn)生和消除的動態(tài)平衡。 但是在各種內(nèi)源性( 體內(nèi)生化反應(yīng)) 和外源性因素( 如環(huán)境污染、吸煙、 飲酒) 作用下，機(jī)體自由基代謝會出現(xiàn)紊亂，引起生物膜的損傷、蛋白質(zhì) 的變性等，從而導(dǎo)致各種疾病的發(fā)生，如衰老、癌癥、動脈硬化癥，纖維 纖維化疾病，糖尿病，白內(nèi)障，黃褐斑等。 隨著自由基生物學(xué)的發(fā)展和人們認(rèn)識的不斷深入，自由基以及由其造 成的負(fù)面影響愈來愈受到關(guān)注。因而，尋找能有效清除自由基的抗氧化活 性物質(zhì)，用來延緩衰老及治療與衰老有關(guān)的疾病已成為現(xiàn)代生物研究領(lǐng)域 的熱點(diǎn)之一。 近年來，國內(nèi)外很多研究人員都進(jìn)行了新型抗氧化劑的研究開發(fā)，但 主要是以高等植物為材料，如香辛料、葡萄籽、茶葉等。以高等真菌為材 料進(jìn)行抗氧化成分分離純化的研究雖有一些，但是多數(shù)都不夠深入，僅僅 是對粗提取物的抗氧化活性進(jìn)行了研究，其中還有些是不可食用的真菌， 因此經(jīng)濟(jì)價值不是很高。本論文首先對近年來國內(nèi)外高等真菌的抗氧化研 究進(jìn)行了概括，然后再對國內(nèi)四種名貴藥用真菌，冬蟲夏草、蛹蟲草、古 尼蟲草和黑柄炭角菌甲醇提取物的抗氧化活性進(jìn)行了評價，在此基礎(chǔ)上又 對蛹蟲草的抗氧化活性成分進(jìn)行了初步的分離純化。 1 1 高等真菌抗氧化研究進(jìn)展 碩十學(xué)位論文 目前國內(nèi)外研究過的具有抗氧化活性的真菌種類可分為口蘑科、側(cè)耳 科、紅菇科、球蓋菇科、多孔菌科、羊肚菌科等2 9 科，1 0 0 多個種。 表卜1 具有抗氧化活性的高等真菌 1 a b l el - lh i 曲脅g iw i t ha n t i o x i d a n ta c t i v i t i e s 四種子囊菌的抗氧化活性及抗氧化成分研究 科名拉丁名 中文名文獻(xiàn)號 口p ，功d ，螂j 甜勿辦舭螂 朱紅硫磺菌7 ，2 3 研f 廟腸肋珂咖陽 灰樹花3 ，2 4 ，2 5 ，2 6 多孔菌科 p d z 胗d ，塒陽甜口朋d s 淞 寬鱗大孔菌 4 砌。船d f 搬x p ，口肋f c 淞 褐黃纖孔菌1 1 ，1 2 ，1 3 ，1 4 p 忍p ，加淞初口f 卯f 螂 火木層孔菌 15 f 協(xié)c d p d ，f 口d 6 z f g 甜口 樺褐孑l 菌 7 a 勿陽加砌酊c “彪門脅羊肚菌7 ，2 4 羊肚菌科跆聊c d 刀f c 口圓錐鐘菌 4 朋0 陽辦e f 腸口挖刪s f f c p 筇 黑脈羊肚菌 6 訛彤加刀白c d 刀七日尖頂羊肚菌 7 a g n r i c 粥b l q z e i 蘑菇斜 a g n n c t l sb i s p o r u s a g c i r i c l l sn r 、e n s i s 巴西蘑菇 雙孢蘑菇 野蘑菇 1 6 4 ，5 ，3 0 4 4 絲竺絲塑絲2 竺! ! 翌壹奎塹塹夔 魚 砌e ，印辦d 廠口口“，口門f f d r f 門c 幻 橙黃革菌 18 革菌科 t h e l e p h o r nv i a t i s t h e l e p h o r qg n n b 匈t l n 蓮座革菌 干巴革菌 2 2 l8 木耳科 a u r i c h l n r 口r n e s e n t e r i c n a u r i c u l c l r i ap o l y 打i c k a o i r l c u l n r i c i 如s c o s t l c c i n e c l a u r c u l n r i c i 口t l n c t l l n 氈蓋木耳 毛木耳 褐黃木耳 木耳 4 0 4 0 4 0 5 絲些! 絲些塹塑旦旦壘塑絲絲墨查呈 魚 絲膜菌科d p j f d 把口加v d 冊力“腸砌 黃環(huán)鱗傘 7 g y m n o p l u sc i e r u g i n o s 凇 綠褐裸傘 ! b o t e t u sb n d i u s 4 牛肝菌科b d 彪f d 蘆括礦括p 口灰黑擬牛肝菌 l8 b d 彪f 塒p 幽凰美味牛肝菌6 ，1 6 白蘑科均腳比轡淞研溯d 理淞 真姬菇斑玉蕈 4 1 乃f c 幻，d 小口p d ，f p 刀，d s 甜朋 灰褐紋口蘑 4 3 科名拉丁名中文名文獻(xiàn)號 自墮型 墨里竺! 翌竺! 絲絲星塑堡絲絲絲盔魚壁蕉竺 齒菌科螄“肌唧口門幽聊 白齒菌6 勛彤d 如，z 砌6 ，f c 口，螂翹鱗肉齒菌 4 4 具有抗氧化活性的高等真菌數(shù)量 分分離純化的真菌僅有少數(shù)幾種，表 6 0 個具有抗氧化活性的化合物。 眾多，但是目前進(jìn)行了抗氧化活性成 卜2 是目前從1 0 多種真菌中分離到的 表卜2 高等真菌中發(fā)現(xiàn)的抗氧化活性成分 t l b l el 一2a i l t i o x i d a t i v ec o m o u n d sd i s c o v e r e di nh i g h 向n g i 四種子囊菌的抗氧化活性及抗氧化成分研究 5 碩士學(xué)位論文 r = o h 2r = h c 啦l ：l h 6 h b 占h 3 墨i 1 1 一 c h 30 h i i i h 2 1 舢y d r o x y e 唱o t h i o n e i n e 2e 唱o m i o n e i n e 3n - h y d r o x y _ n ，n - d i m e t h y l u r e a 4 c 伽a t i n 7r = hi n o s c a v i nc 8r _ c h 3m e t h y l i n o s c a v i nc 9r = hl n o s c a “n a 1 lr 5 c h 3m e t h y l i n o s c a v i na r 5r 爿- id a v a l l i a l t o n e 6r = c h 3m e t h y l d a v a l i i a l t o n e 6 1 3p h e l l i 鰣d i nf 四種子囊菌的抗氧化活性及抗氧化成分研究 1 0r = hi n o s c a v i nb l2r - c h 3 m e t h y l i n o s c a v i nb l5 i n t e r m n g i n sb 17p h e l l i 鰣d i m e ra r 1 4 i n t e r 如n g i n sa o h 1 8 h a n 鋤a g i n l6 i n t e r f u n g i n sc 2 0 g 卸b 勾u n d r oo r 2 1 g 鋤b a j u nd r 1 9v i a l i n i n a o h 2 2 t h e l e p h o na 2 3r l = i 也= h r 3 = r 4 = i u = a c ，r 6 = c o p h 2 4r l = r 2 = h ，r 3 = r 4 = r 5 = a c ，r 6 o c h 2 c h 2 p h 2 5r i = r 2 = h ，r 3 = r 6 = c o c h 2 c h ( o c o c h 3 ) c h 3 ，r 4 = a c ，r 5 = c o c h 2 c h ( o h ) c h 3 2 6r 1 i 也= i ，r 3 = r 4 = a c ，r 5 = c o c h 2 c h ( o h ) c h 3 ，r 6 ：c o c h 2 c h 2 p h 2 7r 1 = r 2 = r 4 = r 5 = h ，盼o c h 2 c h ( o c o c h 3 ) c h 3 ，r 6 = c o c h 2 c h ( o h ) c 心 2 8r l = i u = l 洚r 5 = h ，r 3 o c h 2 c h ( o c o c h 3 ) c h 3 ，r 6 o c h 2 c h 2 p h 2 9r l = r 2 = r 4 = r 5 = h ，i b = c o c h 2 c h ( o h ) c h 3 ，r 6 = c o c h 2 c h 2 p h 3 0r l = r 2 = r 4 = r 5 = h ，r 3 o c h 2 c h ( 0 h ) c h 3 ，r 6 = a c 7 h 翼 啪暉一冷 h 怎 嗍 m l 丫i 工 么 小 一 碩十學(xué)位論文 3lr l = r 2 = r 4 = r 5 = h ，r 3 = - r 6 = c o c h 2 c h ( o c o c h 3 ) c h 3 3 2r l = i t 2 = r 4 = r 5 = h ，i u = 吶心，r 6 = c o c h 2 c h ( 0 c o c h 3 ) c h 3 3 3r 1 = r 2 = r 4 = r 5 = h ，r 3 號a c ，r 6 = c o c h 2 c h 2 c h 3 3 4r l = r 2 = r 4 = r 5 = h ，r 3 = a c ，r 6 = c o c h 2 c h 2 p h 3 5r l = r 2 = r 4 = r 5 = h ，r 3 o p h ，r 6 o c h 2 c h 2 p h 3 6b e t u i i n a na3 7b e t u l i n a nb 3 8i n o n o b l i n sa 3 9i n o n o b i i n sb4 0i n o n o b i i n sc4 l p h e l l i g r i d i n sd 伽 4 2 p h e l i i g r i d i n se 4 3 p h e l l i g r i d i n sd 4 4o l i g o p o r i n sa 4 5o l i g o p o r i n sb 4 6 o i i g o p o r i n sc 喲。磬黟一廠觶 喲，各v 夸眷f 、 辯。 耐磚、o r r - r i j l cr w _ l h ；良* 只：f 一hr 2 。 c ；r r 4 - hr - r c h ，c o p h 乳r - 群z t t c 1 0r t r 3 * c h 蘆0 龜f 粕 ! lr ；赍；hi 礦；蛐 5 ：r r ? r 、- h 俑 r o ! ：r = c h c ( p h 。r 2 竄r ，_ 州 ! ! r r 0 - cr 3 4 h 4 7l ，2 ，4 - 秭a c 咖x y - 3 - ( 4 - a c e t o x y p h e n y l ) 7 ，8 d h y d r o x y d i b e n z 0 【b ，d 】f u 瑚 4 8 l ，2 - d i a c e t o 巧- 4 ，7 ，8 - t r i h y d r o x y - 3 - ( 4 h y d r o x y p h e n y i ) d i b e n z o 【b ，d 】f u r 柚 4 9g 鋤b 萄u n i nb5 0g 鋤b a j u n i na 51 3 一o - m e t h y l a t m m e n t i n 5 2 g 鋤b a j u n i nc 5 3a 仃0 m e n t i n 5 4 1 2 4 ，7 ，8 - p e n t a c e t 0 x y - 3 - ( 4 - a c e t 0 巧p h e n y 叫b e n z 0 【b ，d 】f u 舶 5 5 2 ，37 - d i a c e t o x y - 4 ，4 ”，57 ，67 t e t 商l y d r o x y 【l ，l ：47 ，l ”- t e r p h e n y l 8 o r l 脅 四種子囊菌的抗氧化活性及抗氧化成分研究 奠穗，一岬 、 、， ，。“ 5 8 5 7e 唱o s t r a - 4 ，6 ，8 ( 14 ) ，2 2 - t e t m e n 3 - o n e 5 8 p a i m i t i ca c i d 5 9 e 唱o s t e r o l 6 0 5 ，8 一e p i d i o x y - e 唱o s t a - 6 ，2 2 d i e n - 3 p o i 圖卜1 一些抗氧化物質(zhì)的結(jié)構(gòu)式 表1 2 中所列舉的化合物僅為做過抗氧化活性測定的化合物，其實還有 很多化合物為進(jìn)行過抗氧化活性測定，但從其結(jié)構(gòu)式判斷，這些物質(zhì)可能 也具有抗氧化活性，如t h e l e p h a j l t i n sa c 【5 6 】、t h e l e p h a n t i n si n 【5 7 1 等。 1 1 2 高等真菌中天然抗氧化劑的種類 高等真菌中的抗氧化成分種類繁多，主要包括多糖、多酚、類黃酮、 多肽、萜類、類胡蘿卜素物質(zhì)以及微量元素等。 1 1 2 1 多糖及其復(fù)合物 多糖是一類結(jié)構(gòu)復(fù)雜的生物大分子，分子量從幾千到上百萬。到目前 為止，國內(nèi)學(xué)者對白靈菇、杏鮑菇、盤針孢菌、黃傘、樟芝、松木層孔菌、 香菇、雞腿菇、猴頭菌、蛹蟲草、阿魏菇、安絡(luò)小皮傘、毛頭鬼傘、銀耳、 云芝、美味牛肝菌、野生牛肝菌、真姬菇、大球蓋菇、靈芝、滑菇、鳳尾 側(cè)耳、環(huán)棱褐孔菌、刺芹側(cè)耳、茶樹菇、黑木耳、灰樹花、金頂側(cè)耳、紅 緣層孔菌、桃紅側(cè)耳、金耳、樺褐孔菌等真菌的多糖進(jìn)行了體內(nèi)外的抗氧 化活性研究，但是研究都不夠深入，多數(shù)是對其粗多糖進(jìn)行的研究，僅有 碩十學(xué)位論文 少數(shù)獲得了純度比較高的多糖。 杏鮑菇多糖對自由基引起的亞油酸、菜油氧化以及離體肝臟組織的脂 質(zhì)過氧化損傷均有一定的抑制作用【5 硼；黑木耳多糖具有清除超氧陰離子、 抗氧化及保護(hù)線粒體的功能【5 9 1 ；灰樹花多糖組分p g f 1 在體外對o h 有較 強(qiáng)的抑制作用。從靈芝中提取的靈芝多糖肽( g l p p ) 可以減少人血清低密 度脂蛋白的氧化修飾，降低血清和心肌勻漿的丙二醛含量，提高谷胱甘肽 過氧化物酶( g s h p x ) 活性，降低超氧化物歧化酶活性，但對過氧化氫酶活 性無顯著影響，證明g l p p 具有體內(nèi)和體外的抗氧化作用，其抗氧化活性 可能與其清除氧自由基或提高g s h p x 水平的作用有關(guān)【6 1 】。 1 1 2 2 多酚類 多酚類化合物是自然界中一類重要的化合物，酚是一類芳環(huán)上碳原子 與羥基直接相連形成的化合物。多酚是芳環(huán)與一個以上羥基直接相連的酚 類。多酚可以分為兩大類，一類是多酚的單體，包括一些黃酮類化合物、 綠原酸、沒食子酸和鞣花酸，以及一些含有糖苷的復(fù)合類多酚化合物；另 一類是由單體多酚聚合成的低聚體或多聚體，統(tǒng)稱單寧類物質(zhì)。據(jù)此可以 判斷，圖1 1 中所列的化合物很多都可以歸入多酚類化合物，因這些化合物 的結(jié)構(gòu)中都含有酚羥基，從而表現(xiàn)出一定的抗氧化能力。 l e eik 【6 2 】從而d 刀d 加d 6 均“淞中分離到六種新的抗氧化多酚，分別是 i n o n o b l i n sa 、i i l o n o b l i n sb 、i n o n o b l i n sc 、p h e l l i g r i d i n sd 、p h e l l i 鰣d i n se 、 p h e l l i 酣d i n sg 這些化合物對a b t s 和d p p h 自由基有很強(qiáng)的清除作用，此 外對超氧陰離子自由基也具有較好的清除作用。 1 1 2 3 對聯(lián)三苯類 目前報道的該類物質(zhì)中有一組化合物c u n i s i a n sa q ，共1 7 種，全部從 脅舭c 緲廊f f 分離得到。其中一些具有很強(qiáng)的抗氧化性能。劉吉開【1 8 】等對 云南食用菌中分離得到的對聯(lián)三苯類成分1 ，2 d i a c e t o x y 4 ，7 ， 8 n m y d r o x y - 3 - ( 4 一h y d r o x y p h e n y l ) d i b e n z o b ，d 】如r a n 進(jìn)行了清除d p p h 自由 基活性測試，結(jié)果表明其具有與b h a 相當(dāng)?shù)幕钚浴?1 1 2 4 黃酮類化合物 四種子囊菌的抗氧化活性及抗氧化成分研究 黃酮類化合物是指兩個芳香環(huán)通過中央三碳鏈連接成的一類化合物。 黃酮類化合物多數(shù)帶有酚羥基，因此也可以歸入酚類化合物，但是也有例 外，如查兒酮，它的分子中一個羥基都沒有，而黃酮醇沒有酚羥基，僅在 3 位有一個醇羥基。 黃酮類化合物的抗氧化機(jī)理有兩類：一類是絡(luò)合具有促氧化作用的金 屬離子；另一類是清除自由基。 1 1 2 5 其他 除了上面所述的幾類物質(zhì)，還有一些物質(zhì)也具有抗氧化活性，如 e 瑪o t h i o n e i n e 、伊h y d r o x y e r g o t h i o n e i n e ，前者屬于氨基酸，后者是它的衍生 物。此外，在一些真菌中還發(fā)現(xiàn)有番茄紅素、胡蘿卜素【刪等物質(zhì)。 1 1 2 6 微量元素對抗氧化活性的增效作用 杜明5 8 1 等對富硒靈芝中的富硒蛋白進(jìn)行了純化，并檢測了其對羥自由 基和超氧陰離子的清除能力，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，富硒蛋白的自由基清除能力隨硒 含量的增加而增強(qiáng)。 1 1 2 7 抗氧化協(xié)同效應(yīng) 抗氧化劑之間，抗氧化劑與增效劑以及抗氧化劑與金屬離子螯合劑之 間進(jìn)行合理的配伍能明顯增強(qiáng)抗氧化功能，從而形成復(fù)合抗氧化劑。 1 2 抗氧化機(jī)理研究進(jìn)展 目前認(rèn)為中藥成分抗氧化成分對機(jī)體氧化損傷的保護(hù)作用主要包括以 下幾方面： 1 2 1 直接清除活性氧自由基 自由基又叫游離基，活性氧自由基是一些處于激發(fā)態(tài)的含氧基團(tuán)，如 超氧陰離子自由基、羥基自由基、烷氧基自由基等。o h 是化學(xué)性質(zhì)最活 潑的活性氧，它帶有一個不成對電子，是對人體毒性最大的自由基，它可 以與活細(xì)胞中的任何分子發(fā)生反應(yīng)而造成損害，而且反應(yīng)速度極快。o 是 自由基引起機(jī)體中毒的主要原因，可使核酸鏈斷裂、多糖解聚和不飽和脂 肪酸過氧化，進(jìn)而造成膜損傷、線粒體氧化磷酸化等影響。目前制備超氧 碩士學(xué)位論文 陰離子自由基的經(jīng)典方法是鄰苯三酚自氧化法，陳暢等【5 9 j 等采用鄰苯三酚 白氧化法，研究了蒙山蟲草、蛹蟲草和冬蟲夏草3 種蟲草水提液的抗氧化 活性。結(jié)果表明，3 種蟲草都具有較強(qiáng)的抗氧化活性，且比較相近。 1 2 2 增強(qiáng)抗氧化酶活性 細(xì)胞中的主要抗氧化酶有超氧化物歧化酶( s o d ) ，谷胱甘肽過氧化物酶 ( q s h - p x ) 和過氧化氫酶( c a t ) 。s o d 是含有c u ，z n ，m n ，f e 等金屬離子， 是體內(nèi)超氧陰離子的主要清除者，將其催化分解為h 2 0 2 。h 2 0 2 也具有氧 化損傷作用，通過過氧化氫酶將其轉(zhuǎn)化為0 2 和h 2 0 。同時h 2 0 2 也可通過 g s h - p x 的催化和還原型谷胱甘肽( g s h ) 反應(yīng)生成h 2 0 ，同時生成還原型谷 胱甘肽。如槲皮素能減少胰島p 細(xì)胞的氧化損傷，同時還能恢復(fù)f e 2 + 致腎 細(xì)胞損傷動物的s o d ，g s h p x 和過氧化氫酶的活力唧】。l e ehy 洲等從 靈芝中分離純化到一種刺激成分，該物質(zhì)可以增強(qiáng)抗氧化酶類過氧化物酶 的表達(dá)。 1 2 3 抗脂質(zhì)過氧化 細(xì)胞中自由基對細(xì)胞的直接損傷作用主要是攻擊細(xì)胞膜上的脂質(zhì)，自 由基先和細(xì)胞膜上的磷脂或低密度脂蛋白( l d l ) 的不飽和脂肪酸反應(yīng)，該反 應(yīng)產(chǎn)物又攻擊附近的不飽和脂肪酸，最終導(dǎo)致鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的產(chǎn)生。過氧化程 度多以其最終產(chǎn)物中丙二醛( a ) 為評價指標(biāo)。近來有研究認(rèn)為，部分黃 酮類化合物以氫鍵形式與細(xì)胞膜結(jié)合，保護(hù)細(xì)胞膜上的不飽和鍵不與自由 基接觸，抗脂質(zhì)過氧化。 1 2 4 減少d n a 損傷【5 l 】 自由基學(xué)說認(rèn)為，過剩的自由基可以攻擊d n a ，引起d n a 損傷，從而 引發(fā)多種疾病。對中藥抗氧化作用的研究目前在某些方面已深入到d n a 分 子水平。 1 2 5 對氧化酶系活力及表達(dá)的影響 如對黃嘌呤氧化酶( x o ) 的影響。x o 可將黃嘌呤催化生成尿酸鹽，同時 四種子囊菌的抗氧化活性及抗氧化成分研究 產(chǎn)生超氧陰離子。該過程是缺血再灌注損傷的一個非常重要的途徑。在機(jī) 體正常生理狀態(tài)下，該酶以黃嘌呤脫氫酶形式存在，在機(jī)體處于缺血狀態(tài) 時，黃嘌呤脫氫酶轉(zhuǎn)化為x 0 ，當(dāng)缺血組織再灌注時，x o 催化產(chǎn)生超氧陰 離子，導(dǎo)致氧化損傷。因此黃嘌呤氧化酶的含量可作為抗氧化研究的指標(biāo) 成分。另外，對一氧化氮( n o ) 及一氧化氮合酶的影響。正常生理狀態(tài)下， n o 在舒張血管內(nèi)皮、維持機(jī)體血壓平衡方面起重要作用。但高濃度卻能和 活性氧反應(yīng)后產(chǎn)生氧化能力更高的亞硝基自由基，同時n o 也可看作是一 種自由基，導(dǎo)致細(xì)胞氧化損傷。在缺血再灌注損傷時，n o 主要合成酶，誘 導(dǎo)型一氧化氮合酶( i n o s ) 活性增加，大量n o 產(chǎn)生而導(dǎo)致氧化損傷形成。 研究發(fā)現(xiàn)許多黃酮類化合物包括槲皮素、姜黃素在缺血再灌注損傷時可抑 制i n o s 的活性，而起到抗氧化作用。 1 3 抗氧化活性檢測方法的研究進(jìn)展 目前常用的抗氧化活性檢測方法主要基于以下機(jī)理【6 2 】：( 1 ) 樣品對檢 測體系中自由基有清除能力；( 2 ) 樣品對檢測體系中脂類物質(zhì)的氧化有抑制 作用；( 3 ) 根據(jù)樣品的還原能力來推測被測物的抗氧化活性。 1 3 1 清除自由基能力 清除自由基是抗氧化劑抗氧化的主要機(jī)制。自由基的清除能力是通過 檢測在“無脂 體系中抗氧化劑提供的氫或者電子向自由基遷移的能力。屬于 這一類的檢測方法有a b t s 法、d p p h 法、羥自由基的清除能力、超氧陰離 子自由基的清除能力、氧自由基的清除能力、總自由基捕獲抗氧化參數(shù)法、 d d 法等。 1 3 2 抑制脂質(zhì)過氧化 脂質(zhì)過氧化( 1 i p i dp e r o x i d a t i o n ，簡稱l p o ) 是指脂類( l h ) 的多不飽和脂肪 酸( p a 1 ) 在自由基的引發(fā)下經(jīng)酶促或非酶促作用，使其發(fā)生過氧化而生成 脂質(zhì)過氧化物的過程。脂質(zhì)過氧化過程與生物體正常結(jié)構(gòu)的紊亂和膜功能 損傷有關(guān)。由自由基引發(fā)的鏈?zhǔn)阶詣友趸磻?yīng)是脂質(zhì)過氧化的主要途徑。 脂質(zhì)體系抗氧化能力檢測中常用的底物主要有：低密度脂蛋白( l d l ) 碩十學(xué)位論文 和高密度脂蛋白( ) l ) 、油脂、亞油酸等；檢測體系主要有：乳化體系、脂 質(zhì)體和微粒體。脂質(zhì)體系抗氧化能力的檢測方法主要分為兩類：脂質(zhì)氧化 初期產(chǎn)物的檢測：過氧化值法( p o v ) ，共軛二烯氫過氧化物法和硫氰酸鐵法 ( f t c ) ；脂質(zhì)氧化終產(chǎn)物的檢測：硫代巴比妥酸法( 1 1 3 a r s ) 【6 3 1 、頂空氣相色 譜法【州，茴香胺值法【6 5 1 和羰基值法【6 6 】。 脂質(zhì)體系抗氧化能力檢測方法的還存在一定的不足，主要包括： ( 1 ) 抗氧化劑在水相和油相間的分配效應(yīng)；( 2 ) 被氧化底物的性質(zhì)和組成( 如脂質(zhì) 不飽和程度，脂肪的物理化學(xué)狀態(tài)等) ；( 3 ) 誘導(dǎo)氧化反應(yīng)的方式( 如升高溫度、 各種催化劑或自由基引發(fā)劑的的添加，增大氧壓以及攪拌等) 1 - 3 - 3 還原能力檢測 主要有普魯士藍(lán)法、鐵離子還原能力( f 凡心) 檢測法。普魯士藍(lán)法【6 7 】源 于o y a i z u ( 1 9 8 6 ) 所述的方法，以普魯士藍(lán)f e 4 ( f e ( c n ) 6 ) 生成量作為指標(biāo)?？?氧化劑能將赤血鹽k 3 f e ( c n ) 6 還原成黃血鹽，再利用f e 2 + 形成普魯士藍(lán)，該 物質(zhì)在7 0 0 衄的具有最大吸光值。吸光值越大，表明樣品的還原力越強(qiáng)， 抗氧化效果越佳。f 凡廿法原理為在較低p h 環(huán)境下，f e ”三吡啶三吖嗪 ( t r i p y r i d y l t r i a z i n e ，t p t z ) 可被樣品中還原物質(zhì)還原為二價鐵形式，呈現(xiàn)出 藍(lán)色，并于吸光度5 9 3 m 處具有最大光吸收，根據(jù)吸光度大小計算樣品抗 氧化活性強(qiáng)弱。w r o n gcc 【醯j 等人用f 凡心法對3 0 種中藥的抗氧化活性進(jìn)行 了系統(tǒng)研究。 1 3 4 生物化學(xué)發(fā)光法 清除氧自由基能力評價生物化學(xué)發(fā)光法測定氧自由基清除作用時，一定 濃度范圍內(nèi)發(fā)光強(qiáng)度( c l ) 與氧自由基數(shù)量呈量效關(guān)系。清除氧自由基的物 質(zhì)則可以降低c l ，根據(jù)c l 的下降則可以判斷某物質(zhì)清除氧自由基的能力。 流動注射化學(xué)發(fā)光技術(shù)是一種簡單、快速和靈敏度高的方法，可對藥物和 植物性食物中活性成分含量及抗氧化性進(jìn)行測定。該方法靈敏度高、快速 測定、操作簡單和重復(fù)性好，因此可用于抗自由基活性藥物的篩選。 1 3 5 抗氧化檢測方法存在的問題 四種子囊菌的抗氧化活性及抗氧化成分研究 基于不同原理的各種體外抗氧化活性檢測方法雖然很多，也能夠在不同 條件下反映抗氧化劑的多種功能特性，但也存在一定的局限性【6 9 1 。 目前，雖然有多種抗氧化活性的檢測方法，由于抗氧化反應(yīng)的多樣性 和復(fù)雜性，尚未形成標(biāo)準(zhǔn)化的方法?？寡趸瘎┰隗w系中的抗氧化活性受很 多因素的影響，主要有抗氧化劑在水相和油相間的分配效應(yīng)、所處的微環(huán) 境、被氧化底物的性質(zhì)和組成，檢測體系( 均相體系和膠束乳化體系、生物 膜體系及復(fù)合抗氧化劑體系等復(fù)雜體系) 。因此，在進(jìn)行抗氧化活性實驗設(shè) 計時，這些因素都要被考慮。對于具體某一被測物的抗氧化活性，應(yīng)至少 使用兩種不同的方法，因為被測物在一種檢測方法中是抗氧化劑，而在另 一種方法中有可能是促氧化劑。因此，在檢測被測物的抗氧化活性時，首 先，應(yīng)明確氧化作用的底物是脂類物質(zhì)、蛋白質(zhì)還是d n a 。其次，不要對 樣品的抗氧化效果輕易下結(jié)論，除非實驗條件與應(yīng)用環(huán)境條件基本相同。 此外，由于相互作用物質(zhì)的存在狀態(tài)，檢測方法的原理和檢測結(jié)果表達(dá)的 方式不同等原因，造成了結(jié)果之間互相比較的困難，甚至一些結(jié)果是互相 矛盾的。這主要是由于：( 1 ) 各種抗氧化活性檢測方法的原理和目的不同， 如t e a c 法和o r a c 法反映的是抗氧化劑抑制體系中自由基引起的氧化還 原反應(yīng)能力，而f 凡蛆法反映的是被測物的還原能力。( 2 ) 天然抗氧化劑和 生物樣品一般是混合物，其中每一種物質(zhì)對不同測量方法有不同的貢獻(xiàn)。 例如，尿酸對總的f 凡廿法的貢獻(xiàn)占6 0 ，而g s h 對這種方法幾乎沒有 任何影響。( 3 ) 不同抗氧化活性結(jié)果的表示方式不同，如o r a c 法表示的是 樣品中p p e 的過氧化動力學(xué)，而t e a c 法則表示的是特定時間內(nèi)( 3 或6m i n ) 測量到的被測抗氧化劑。還需要指出的是這些方法都是在非生理條件下進(jìn) 行的。因此，這些結(jié)果是不能外推為體內(nèi)的結(jié)果。因此，較好的方法是采 用細(xì)胞學(xué)實驗和體內(nèi)外實驗相結(jié)合的方法綜合評價樣品的抗氧化活性?？?氧化活性的檢測方法與被測物的性質(zhì)，組成和檢測體系等因素密切相關(guān)， 深入了解不同抗氧化活性檢測方法的原理，優(yōu)缺點(diǎn)和它們之間的關(guān)系，以 及不同條件下對樣品抗氧化活性的檢測能力，對于全面，真實地了解抗氧 化劑的活性具有重要的意義。 1 4 抗氧化劑的應(yīng)用研究進(jìn)展 碩七學(xué)位論文 1 4 1 食品保藏 油脂氧化的類型包括自動氧化、光與輻射氧化和酶促氧化，其中最重 要、最基本的氧化反應(yīng)類型就是油脂的自動氧化。脂類的自動氧化反應(yīng)具 有極其普遍的意義，油脂的變質(zhì)絕大部分是由于自動氧化造成的。 油脂的自動氧化是不飽和脂肪酸與氧之間發(fā)生的典型的自由基連鎖反應(yīng)， 氧化反應(yīng)起始階段速度較慢，然后呈幾何倍數(shù)增長，迅速完成反應(yīng)的全過 程。自由基的存在是加速油脂氧化的必要條件，它的產(chǎn)生可能有3 種方式： 食品中天然存在或自然產(chǎn)生的自由基；通過金屬催化劑和脂類化合物 直接反應(yīng)產(chǎn)生；氫過氧化物的分解。 1 4 2 化妝品 近年來，已有大量研究表明，人的皮膚因氧化、紫外線的照射會變得 老化，出現(xiàn)色素沉著、粗糙、發(fā)皺等現(xiàn)象，皮膚老化的重要內(nèi)在原因之一 是自由基的作用。光照射可以在體內(nèi)和皮膚內(nèi)產(chǎn)生多種自由基。在