實驗一 蛋白質(zhì)的等電點測定和沉淀反應.ppt

實驗一 蛋白質(zhì)的等電點測定和沉淀反應 一 目的1 了解蛋白質(zhì)的兩性解離性質(zhì)2 學習測定蛋白質(zhì)等電點的一種方法3 加深對蛋白質(zhì)膠體溶液穩(wěn)定因素的認識4 了解沉淀蛋白質(zhì)的幾種方法及其實用意義 二 原理 蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì) 在蛋白質(zhì)溶液中存在下列平衡 等電點 當溶液的pH達到一定數(shù)值時 蛋白質(zhì)顆粒上正負電荷的數(shù)目相等 在電場中 蛋白質(zhì)既不向陰極移動 也不向陽極移動 此時溶液的pH值稱為此種蛋白質(zhì)的等電點 四 操作步驟 一 酪蛋白等電點的測定 1 取同樣規(guī)格的試管4支 加入各試劑 然后混勻 此時4個管的pH依次為5 9 5 5 4 7 3 5 2 各加酪蛋白的醋酸鈉溶液1mL 加一管 搖勻一管 觀察其混濁度 靜置10分鐘后 再觀察其混濁度 最混濁的一管pH即為酪蛋白的等電點 二 蛋白質(zhì)的沉淀及變性1 蛋白質(zhì)的鹽析 蛋白質(zhì)的鹽析 無機鹽 硫酸銨 硫酸鈉 氯化鈉等 的濃溶液能析出蛋白質(zhì) 鹽的濃度不同 析出的蛋白質(zhì)也不同 如球蛋白可在半飽和硫酸銨溶液中析出 而清蛋白則在飽和硫酸銨溶液中才能析出 鹽溶 由鹽析獲得的蛋白質(zhì)沉淀 當降低其鹽類濃度時 又能再溶解 故蛋白質(zhì)的鹽析作用是可逆過程 于試管中加入蛋白質(zhì)溶液5mL 再加等量的飽和硫酸銨溶液 混勻后靜置數(shù)分鐘則析出球蛋白的沉淀 倒出少量混濁沉淀 加少量水 觀察是否溶解 為什么 將管內(nèi)容物過濾 向濾液中添加硫酸銨粉末到不再溶解為止 此時析出沉淀為清蛋白 取出部分清蛋白 加少量蒸餾水 觀察沉淀的再溶解 2 重金屬離子沉淀蛋白質(zhì) 重金屬離子與蛋白質(zhì)結合成不溶于水的復合物 取1支試管 加入蛋白質(zhì)溶液2mL 再加3 硝酸銀溶液1 2滴 振蕩試管 有沉淀產(chǎn)生 放置片刻 傾去上清液 向沉淀中加入少量的水 沉淀是否溶解 為什么 3 某些有機酸沉淀蛋白質(zhì) 取1支試管 加入蛋白質(zhì)溶液2mL 再加入1ml5 三氯乙酸溶液 振蕩試管 觀察沉淀的生成 放置片刻傾出清液 向沉淀中加入少量水 觀察沉淀是否溶解 4 有機溶劑沉淀蛋白質(zhì) 取1支試管 加入2mL蛋白質(zhì)溶液 再加入2mL95 乙醇 觀察沉淀的生成 如果沉淀不明顯 加點NaCl 混勻 5 乙醇引起的變性與沉淀 取3支試管 編號 依下表順序加入試劑 1 向各管內(nèi)加水4ml 在2 3管內(nèi)各加一滴甲基紅2 第二管中用0 1mol L醋酸溶液中和 第三管用0 05mol L碳酸鈉溶液中和 觀察各管的顏色變化和沉淀生成3 每管再加0 1mol L鹽酸溶液數(shù)滴 觀察沉淀的再溶解 五 注意事項 等電點測定的實驗要求各種試劑的濃度和加入量必須相當準確 六 實驗報告 以表格形式總結實驗結果 包括