飼料級L-蘇氨酸產(chǎn)品檢測標準.doc

阜豐集團研發(fā)中心 飼料級蘇氨酸產(chǎn)品化驗操作規(guī)程飼料級L-蘇氨酸產(chǎn)品檢測標準目錄1 范圍32 技術(shù)要求33 試驗方法43.1 鑒別試驗43.2 L-蘇氨酸含量的測定53.3比旋光度的測定63.4 水分的測定73.5 飼料中粗灰分的測定113.6重金屬的測定（比色法）133.7飼料中鉛的測定143.8砷的測定18附3.9、硼氫化物還原光度法（快速法）25參考文獻：31飼料級L-蘇氨酸產(chǎn)品檢測標準GB/T21979-20081 范圍本標準規(guī)定了飼料級L-蘇氨酸產(chǎn)品的技術(shù)要求、實驗方法、檢驗規(guī)則、標簽、包裝、運輸和保質(zhì)期。本標準適用于以淀粉、糖質(zhì)為主要原料、經(jīng)發(fā)酵、提取制成的飼料級L-蘇氨酸?；瘜W名稱：L-2-氨基-3-羥基丁酸分子式：C4HNO3相對分子質(zhì)量：119.12（按2006年國際相對原子質(zhì)量）結(jié)構(gòu)式： OHCH3-CH-CH-COOH NH22 技術(shù)要求2.1外觀和性狀 本品應為白色至淺褐色的結(jié)晶或結(jié)晶性粉末，味微甜。能溶于水，難溶于甲醇、乙醚和三氯甲烷。有旋光性。2.2技術(shù)指標 項目指標一級二級含量（以干基計）/%98.597.5比旋光度D20-26.0 -29.0干燥失重/%1.0灼燒殘渣/%0.5重金屬（以Pb計）/(mg/kg)20砷（以As計）/(mg/kg)22.3其它衛(wèi)生指標應符合GB13078的規(guī)定。3 試驗方法除非另有規(guī)定，在分析中僅使用分析純試劑。水應符合GB/T6682三級水規(guī)定。試驗中所用標準滴定溶液、制劑及制品，在沒有注明其它規(guī)定時，均按GB/T601、GB/T602、GB/T603的規(guī)定制備。3.1 鑒別試驗3.1.1試劑茚三酮3.1.2 儀器紅外分光光度儀3.1.3 鑒別方法 取本品0.05g，加水50ml使溶解，加茚三酮0.05g，加熱溶液顯藍紫色，隨溫度升高顏色加重。 紅外鑒別：本品的紅外光吸收圖譜與中華人民共和國藥典2005年版的對照圖譜（光譜集957圖）一致3.2 L-蘇氨酸含量的測定3.2.1 試劑和溶液3.2.1.1 甲酸3.2.1.2 冰乙酸3.2.1.3 高氯酸標準滴定溶液c（HClO4）=0.1 mol/L3.2.1.4 -萘酚苯基甲醇指示液；2g/L冰乙酸溶液。3.2.2 儀器自動電位滴定儀或酸度計：以玻璃電極為指示電極，飽和甘汞電極為參比電極（或采用復合電極），并備有磁力攪拌器和滴定裝置。3.2.3 分析步驟稱取預先在105干燥至恒重的試樣0.2g，精確到0.2mg，加甲酸（3.2.1.1）3mL和冰乙酸（3.2.1.2）50mL使溶解，用高氯酸標準滴定溶液（3.2.1.3）滴定，用電位滴定儀滴定至終點。或選用指示劑，加-萘酚苯基甲醇指示液（3.2.1.4）10滴，溶液由橙黃色變?yōu)辄S綠色。用時作空白實驗。3.2.4 結(jié)果計算 L-蘇氨酸含量X以質(zhì)量分數(shù)（%）表示，按式（1）計算：X=（V-V0）119.12cm1 000100式中： V-試樣溶液消耗高氯酸標準滴定溶液的體積，單位為毫升（ml）V0-空白溶液消耗高氯酸標準滴定溶液的體積，單位為毫升（ml）119.12- L-蘇氨酸的摩爾質(zhì)量，單位為g/molc- 高氯酸標準滴定溶液的濃度，單位為摩爾每升（mol/L） m-試樣的質(zhì)量，單位為克(g) 1000-將體積V和V0由毫升換算為升計算結(jié)果保留小數(shù)點后一位小數(shù)。注意：標定高氯酸、滴定樣品一定注意溫度統(tǒng)一，最好在20。3.3比旋光度的測定3.3.1儀器 旋光儀：用鈉光燈（鈉光譜D線589.3nm）作光源。3.3.2測定方法試樣在105干燥至恒重，稱取干燥試樣約3g，精確到0.2mg,加水溫熱溶解（若樣品溶液顏色較深，溶解后加少量活性炭，過濾，用水洗劑數(shù)次），并全部轉(zhuǎn)入50ml容量瓶中，調(diào)節(jié)溶液溫度至20，并稀釋至刻度，中速定性濾紙過濾，濾液用旋光儀測定旋光度。3.3.3結(jié)果計算 L-蘇氨酸在20下，對鈉光譜D線的旋光度D20按下式計算：式中：-測得的旋光度 L-旋光管的長度，單位為分米（dm）C每100ml溶液中所含試樣的質(zhì)量，單位為克（g）.3.4 水分的測定3.4.1原理根據(jù)樣品性質(zhì)的不同，在特定條件下對試樣進行干燥所損失的質(zhì)量在試樣中所占的比例。3.4.2儀器和材料實驗室常用及以下儀器、材料。3.4.2.1分析天平：感量 1mg。3.4.2.2稱量瓶：由耐腐蝕金屬或玻璃制成，戴蓋。其表面積能使樣品鋪開約.3g/c.3.4.2.3電熱鼓風干燥箱：溫度可控制在1032。3.4.2.4電熱真空干燥箱：溫度可控制在80 2，真空度可達13kPa.3.4.2.5應備有通入干燥空氣導入裝置或以氧化鈣（CaO）為干燥劑的裝置。（20個樣品需300g氧化鈣）。3.4.2.6干燥器：具有干燥劑。3.4.2.7砂：經(jīng)酸洗。3.4.3采樣按GB/T 14699.1 采樣。樣品應具有代表性，在運輸和儲存過程中避免發(fā)生損壞和變質(zhì)。3.4.4試樣的制備按 GB/T 20195制備試樣。3.4.5 分析步驟3.4.5.1 試樣液體、粘稠飼料和以油脂為主要成分的飼料稱量瓶(3.4.2.2)內(nèi)放一薄層砂（3.4.2.7）和一根玻璃棒。將稱量瓶及內(nèi)容物和蓋一并放入103的干燥箱(3.4.2.3)內(nèi)干燥30min1min.蓋好稱量瓶，從干燥箱中取出，放在干燥器（3.4.2.5）中冷卻至室溫。稱量其質(zhì)量，準確至1mg.稱取10g試樣于稱量瓶中，準確至1mg。用玻璃棒將試樣與砂充分混和，玻璃棒留在稱量瓶中，按3.4.5.2操作。其它飼料將稱量瓶(3.4.2.2)放入103干燥箱(3.4.2.3)中干燥30min1min后取出，放在干燥器（3.4.2.6）中冷卻至室溫。稱量其質(zhì)量，準確至1mg.稱取5g試樣于稱量瓶中，準確至1mg.并攤勻。3.4.5.2測定將稱量瓶蓋放在下面或邊上與稱量瓶一同放入103干燥箱（3.4.2.3）中建議平均每升干燥箱空間最多放一個稱量瓶當干燥箱溫度達103后，干燥4h0.1h。將蓋蓋上，從干燥箱中取出，在干燥器（3.4.2.6）中冷卻至室溫。稱量，準確至1mg.以油脂為主要成分的飼料應在103干燥箱（3.4.2.3）中在干燥30min1min.兩次稱量的結(jié)果相差不應大于試樣質(zhì)量的0.1%，如果大于0.1%，按3.4.5.3操作。3.4.5.3 檢查實驗為了檢查在干燥過程中是否有因化學反應如美拉德（Maillard）反應而造成不可接受的質(zhì)量變化，作如下檢查。在干燥箱中于103再次干燥 稱量瓶和試樣，時間為2h0.1h.在干燥器（3.4.2.6）中冷卻至室溫。稱量，準確至1mg.如果經(jīng)第二次干燥后質(zhì)量變化大于試樣質(zhì)量的2%，就可能發(fā)生了化學反應。在這種情況下按3.4.5.4所述步驟操作。3.4.5.4 發(fā)生不可接受質(zhì)量變化的樣品 按3.4.5.1取試樣。將稱量瓶蓋放在下面或邊上如稱量瓶一同放入80的真空 干燥箱（3.2.2.4）中，減壓至13 KPa。通入干燥空氣或放置干燥劑干燥試樣。在放置干燥劑的情況下，當達到設定的壓力后斷開真空泵。在干燥過程中保持所設定壓力。當干燥箱溫度達到80后，家熱4h0.1h.小心的將干燥箱恢復至常壓。打開干燥箱，立即將稱量瓶蓋蓋上，從干燥箱中取出，放入干燥器中冷卻至室溫稱量，準確至1mg.將試樣再次放入80的真空干燥箱中干燥30min1min，直至連續(xù)兩次干燥質(zhì)量變化之差小于其質(zhì)量的0.2%。3.4.5.5 測定次數(shù) 同一試樣進行兩個平行測定。3.4.5.6計算 未作預處理的樣品未作預處理的樣品，其水分和其它揮發(fā)性物質(zhì)的含量W1以質(zhì)量分數(shù)表示，數(shù)值以%計，按式（1）計算： - （1）式中： m3_試樣的質(zhì)量，單位為克（g）;m4_稱量瓶質(zhì)量，如使用砂和玻璃棒，也包括砂和玻璃棒的質(zhì)量，單位為（g）;m5_稱量瓶和干燥后試樣的質(zhì)量，如使用砂和玻璃棒，也包括砂和玻璃棒的質(zhì)量，單位為克（g）. 經(jīng)過預處理的樣品注：對難粉碎的樣品見GB/T 20195。樣品水分含量高于7%，脂肪含量低于12g/Kg,只需預干燥的樣品，其水分和其它揮發(fā)性物質(zhì)的含量W2億以質(zhì)量分數(shù)表示，數(shù)值以%計，按式（2）計算： -（2） M0 -試樣經(jīng)提取和/或空氣風干前的質(zhì)量，單位為克（g）; M1-試樣經(jīng)提取和/或空氣風干前的質(zhì)量，單位為克（g）;M3-試樣的質(zhì)量，單位為克（g）M4-稱量瓶（包括蓋）的質(zhì)量，如使用砂和玻璃棒，也包括砂和玻璃棒的質(zhì)量，單位為克（g）;M5-稱量瓶（包括蓋）和干燥后試樣的質(zhì)量，如使用砂和玻璃棒，也包括砂和玻璃棒的質(zhì)量，單位為克（g）;經(jīng)脫脂的高脂肪低水分試樣及經(jīng)脫脂和預干燥的高脂肪高水分試樣，其水分和其它揮發(fā)性物質(zhì)的含量w3,以質(zhì)量分數(shù)表示，數(shù)值以%計，按式（3）計算： -（3）式中：M2-從試樣中提取脂肪的質(zhì)量，單位為克（g）;式中其它符號的含義同7.6.2.1 結(jié)果表示取兩次測定的算術(shù)平均值作為結(jié)果，兩個平行測定結(jié)果的絕對差值不大于0.2%，超過0.2%，重新界定，結(jié)果精確至0.1%。3.5 飼料中粗灰分的測定3.5.1 本標準規(guī)定了動物飼料中粗灰分的測定方法3.5.2 粗灰分本標準規(guī)定的條件下，550灼燒所得的殘渣。3.5.3 原理試樣中有機質(zhì)經(jīng)灼燒分解，對所得的灰分稱量。注：灰分用質(zhì)量分數(shù)表示。3.5.4儀器設備除常用實驗室設備外，其他儀器設備如下。分析天平:感量為0.001g. 馬弗爐：電加熱，可控制溫度，帶高溫計。馬弗爐中擺放煅燒盤的地方，災550時溫差不超過20。干燥箱：溫度控制在（1032）。電熱板或煤氣噴燈。煅燒盤：鉑或鉑合金（如10%鉑，90%金）或在實驗條件下不受影響的其他物質(zhì)（如瓷質(zhì)材料），最好是表面積約為20cm2、高約為2.5cm的長方形容器，對易于膨脹的碳水化合物樣品，灰化盤的表面積約為30cm2、高為3.0cm的容器。 干燥器：盛有有效的干燥劑。3.5.5采樣重要的是實驗室收到一份真正具有代表性的樣品，并且在運輸及保存過程中不受到破壞或不發(fā)生變化。樣品應以不破壞或不改變其組分的方式儲存。采樣按GB/T 14699.1執(zhí)行。3.5.6分析步驟3.5.6.1試樣制備試樣制備按GB/T20195 執(zhí)行。3.5.6.2實驗步驟將煅燒盤放入馬弗爐中，與550，灼燒至少30min,移入干燥器中冷卻至室溫，稱量，準確至0.001g.稱取約5g試樣（精確至.001）于煅燒盤中。3.5.6.3測定將盛有試樣（6.2）的煅燒盤放在電熱板或煤氣噴燈上小心加熱至試樣碳化，轉(zhuǎn)入預先加熱到550的馬弗爐中灼燒3h,觀察是否有碳粒，如無碳粒，繼續(xù)于馬弗爐中灼燒1h，如果有碳?；驊岩捎刑剂?，將煅燒盤冷卻并用蒸餾水潤濕，在（1032）的干燥箱中仔細蒸發(fā)至干，再將煅燒盤置于馬弗爐中灼燒1h，取出于干燥器中，冷至室溫迅速稱量，準確至0.001g。注：由上述步驟得到的粗灰分可用于測定鹽酸不溶性灰分（參見ISO 5985）。對同一試樣取兩分試料進結(jié)果表示3.5.7結(jié)果表示粗灰分W，用質(zhì)量分數(shù)（%）表示，按式（1）計算： （1） 式中： M2灰化后粗灰分加煅燒盤的質(zhì)量，單位為克（g）;M0-為空煅燒盤的質(zhì)量，單位為克（g）;M1-裝有試樣的煅燒盤的質(zhì)量，單位為克（g）;3.5.8精密度取兩次測定的算術(shù)平均值作為測定結(jié)果。3.6重金屬的測定（比色法）3.6.1、試劑和溶液3.6.2鹽酸：1+3溶液冰乙酸：6%（v/v）溶液硫化鈉：1g硫化鈉溶于10ml水中，臨用時新配。鉛標準溶液：1ml含0.01mgpb,稱取硝酸鉛0.160g,于燒杯中，加硝酸5ml與水50ml溶解，移于1000ml容量瓶中，并用水稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液，臨用時準確稀釋10倍。3.6.3測定方法稱取1.0000g試樣，置于瓷坩堝中，在電爐上小心炭化，再于550灼燒3h(或用灼燒殘渣測定后的殘灰)，在殘渣中加入4ml鹽酸，于水浴上加熱并蒸干，加10ml熱水并浸漬2min，全部轉(zhuǎn)入納氏比色管中，加2ml乙酸溶液，并用水稀釋至50ml,加2滴硫化鈉溶液，放置5min，移取2ml鉛標準溶液與試樣同時同樣顯色作為標準，試樣的顏色不得深于此標準。3.7飼料中鉛的測定3.7.1范圍本標準規(guī)定了用原子吸收光譜法對飼料中鉛的測定方法本標準適用于各種配合飼料、濃縮飼料、添加劑預混和飼料、單一飼料及飼料添加劑。干灰化法適用于含有有機物較多的飼料原料、濃縮飼料、配合飼料中鉛的測定。濕消化法分鹽酸消化法和高氯酸消化法。鹽酸消化法適用于不含有有機質(zhì)的添加劑預混料和礦物質(zhì)飼料中鉛的測定。高氯酸消化法適用于含有有機質(zhì)的添加劑預混料中鉛的測定。3.7.2原理3.7.2.1干灰化法 將試料在馬福爐55015溫度下灰化之后，酸性條件下溶解殘 渣，沉淀和過濾，定容制成式樣溶液，用火焰原子吸收光譜法，測量其在283.3nm處的吸光度，與標準系列比較定量。3.7.2.2濕消化法試料中的鉛在酸的作用下變成鉛離子，沉淀和過濾去除沉淀物，稀釋定容，用原子吸收光譜法測定。3.7.3試劑和材料 除特殊規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純。實驗用水符合GB/T6682中實驗室二級用水。警告：各種強酸應小心操作，稀釋和取用均應在通風櫥中進行，適用高氯酸時注意不要燒干，小心爆炸。3.7.3.1 稀鹽酸溶液，c(HCl)=0.6mol/L3.7.3.2.鹽酸溶液，c(HCl)=6mol/L.3.7.3.3 硝酸溶液，c(HNO3)=6mol/L:吸取43ml硝酸，用水定容至100ml.3.7.3.4鉛標準儲備液：準確稱取1.598g硝酸鉛Pb(NO3)2,加硝酸溶液（7.3.3）10ml,全部溶解后，轉(zhuǎn)入1000mL容量瓶中，加水至刻度，該溶液含鉛為1mg/Ml.標準儲備液儲存在聚乙烯瓶中，4保存。3.7.3.5鉛標準工作液：吸取1.0 mL.鉛標準儲備液（7.3.4），加入100 mL.容量瓶中，加水至刻度，此溶液含鉛為10ug/mL.工作液當天適用當天配制。3.7.3.6 乙炔：符合GB 6819的規(guī)定。3.7.4 儀器設備注：所用的儀器在使用前用稀鹽酸（3.7.3.1）煮。如果使用專用的灰化皿和玻璃器皿，每次使用前不需要用鹽酸煮。3.7.4.1 馬福爐，溫度能控制在55015。3.7.4.2 分析天平：稱量精度到0.0001g.3.7.4.3實驗室用樣品粉碎機。3.7.4.4原子吸收分光光度計附測定鉛的空心陰極燈。3.7.4.5無灰（不釋放礦物質(zhì)的）濾紙3.7.4.6瓷坩堝（內(nèi)層光滑沒有被腐蝕，使用前用稀鹽酸煮）3.7.4.7可調(diào)電爐3.7.4.8平底柱型聚四氟乙烯坩堝（60cm2）。3.7.5試樣的制備選取有代表性的樣品，至少500g，四分法縮分至100g,粉碎，過1mm的尼龍篩，混勻裝入密閉中，低溫保存?zhèn)溆谩?.7.6、分析步驟3.7.6.1試樣溶解干灰化法 稱取約5g制備好的試樣，精確到0.001g，置于瓷坩堝中。將瓷坩堝置于可調(diào)電爐上，100-300緩慢加熱炭化至無煙，要避免試料燃燒。然后放入已在550下預熱15min的馬福爐，灰化2-4h,冷卻后用2ml水將炭化物濕潤。如果仍有少量炭粒，可滴入硝酸使殘渣濕潤，將坩堝放在水域上干燥，然后再放到馬福爐中灰化2h，冷卻后加2ml水。取5ml鹽酸，開始慢慢一滴一滴加入到坩堝中，邊加邊轉(zhuǎn)動坩堝，直到不冒煙，然后再快速放入，再加入5ml硝酸，轉(zhuǎn)動坩堝并用水浴加熱直到消化液2-3ml時取下（注意防止濺出），分次用5ml的水轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶。冷卻后，用水定容至刻度，用無灰濾紙過濾，搖勻，待用。同時制備試樣空白溶液。 鹽酸消化法依據(jù)預期含量，稱取1-5g制備好的試樣，精確到0.001g，置于瓷坩堝中。用2ml水將試樣濕潤，取5ml鹽酸，開始慢慢一滴一滴加入到坩堝中，邊加邊轉(zhuǎn)動坩堝，直到不冒煙，然后再快速放入，再加入5ml硝酸，轉(zhuǎn)動坩堝并用水浴加熱直到消化液2-3ml時取下（注意防止濺出），分次用5ml的水轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶。冷卻后，用水定容至刻度，用無灰濾紙過濾，搖勻，待用。同時制備試樣空白溶液。 高氯酸消化法稱取1g試樣(精確到0.001g),置于聚四氟乙烯坩堝中，加水濕潤樣品，加入10ml硝酸（含硅酸鹽較多的樣品需再加入5ml氫氟酸），放在通風柜里靜置2h后，加入5ml高氯酸，在可調(diào)電爐上墊瓷磚小火加熱，溫度低入250，待消化液冒白煙為止。冷卻后，用無灰濾紙過濾到50ml的容量瓶中，用水沖洗坩堝和濾紙多次，加水定容至刻度，搖勻，待用，同時制備試樣空白溶液。3.7.6.2標準曲線繪制分別吸取0 ml、1.0 ml、2.0 ml、4.0ml、8.0ml鉛標準工作液，置于50ml容量瓶中，加入鹽酸溶液1ml,加水定容至刻度，搖勻，導入原子吸收分光光度計中，用水調(diào)零，在283.3nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。3.7.6.3測定試樣溶液和試劑空白，按繪制標準曲線步驟進行測定，測出相應吸光值與標準曲線比較定量。3.7.6.4結(jié)果計算3.7.6.5測定結(jié)果按式(1)計算：X =(12)V11 000m1 000=(12)V1m. ( 1 ) X-試料中鉛含量的數(shù)值，單位為毫克每千克（mg/kg）; m-試料的質(zhì)量的數(shù)值，單位為克(g);V1-試料消化液總體積的數(shù)值，單位為毫升（ml）; 1-測定用試料消化液鉛含量的數(shù)值，單位為毫克每毫升（ug/ml）；2空白試液中鉛含量的數(shù)值，單位為毫克每毫升（ug/ml）；3.7.7精確度 每個試樣取兩個平行樣進行測定,以其算術(shù)平均值為結(jié)果,結(jié)果表示到0.01mg/kg3.8砷的測定本標準規(guī)定了飼料中總砷的測定方法。本標準適用于各種配合飼料、濃縮飼料、添加劑預混和飼料、單一飼料及飼料添加劑。最低檢測濃度：0.04mg/kg;原子熒光光度法為0.010 mg/kg。3.8.1銀鹽法（仲裁法） 原理： 樣品經(jīng)酸消解或干灰化破壞有機質(zhì)，使砷呈離子狀態(tài)存在，經(jīng)碘化鉀、氯化亞錫將高價砷還原為三價砷，然后被鋅粒和酸產(chǎn)生的新生態(tài)氫還原為砷化氫。在密閉裝置中，被二乙氨基二硫代甲酸銀（Ag-DDTC）的三氯甲烷溶液吸收，形成黃色或棕紅色銀溶膠，其顏色深淺與砷含量成正比，用分光光度計比色測定。形成膠體銀的反應如下： AsH3+6Ag(DDTC)=6Ag+3H(DDTC)+As(DDTC)33.8.2試劑和溶液 以下試劑除特別注明外，均為分析純，水應符合GB/T6682二級水要求。 硝酸、硫酸、高氯酸、鹽酸、乙酸、碘化鉀、L-抗壞血酸 無砷鋅粒，粒徑3.00.2mm。 混合酸溶液（A）：HNO3+H2SO4+HCLO4=23+3+4 鹽酸溶液：C（1mol/L）,量取84.0ml鹽酸，倒入適量水中，用水稀釋到1L。鹽酸溶液：C（3mol/L）,量取250ml鹽酸，倒入適量水中，用水稀釋到1L。 乙酸鉛溶液：200g/L 硝酸鎂溶液：（150g/L），稱取30g硝酸鎂Mg(NO3)2.6H2O溶于水中，并稀釋至200ml。 碘化鉀溶液：（150g/L），稱取75g碘化鉀溶于水中，定容至500ml,儲存于棕色瓶中。 酸性氯化亞錫溶液（400g/L）：稱取20g氯化亞錫（SnCl2.2H2O）溶于50ml鹽酸中，加入數(shù)顆金屬顆粒，可用一周。 二乙氨基二硫代甲酸銀（Ag-DDTC）-三乙胺-三氯甲烷吸收溶液(2.5g/L):稱取2.5g(精確到0.0001g) 二乙氨基二硫代甲酸銀（Ag-DDTC）于干燥的燒杯中，加適量的三氯甲烷待完全溶解后，轉(zhuǎn)入1000ml容量瓶中，加入20ml三乙胺，用三氯甲烷定容，于棕色瓶中存放在冷暗處，若有沉淀應過濾后使用。 乙酸鉛棉花：將醫(yī)用脫脂棉在乙酸鉛溶液（100g/L）浸泡約1h,壓除多余溶液，自然晾干，或在90-100烘干，保存于密閉瓶中。 砷標準儲備溶液(1.0g/ml):精確稱取0.660g三氧化砷（110、干燥2h），加5ml氫氧化鈉溶液（200g/L）使之溶解，然后加入25ml硫酸溶液（60ml/L）中和，定容至500ml，此溶液每毫升含1.00g砷，于塑料瓶中儲存。 砷標準操作溶液（1.0ug/ml）:準確吸取5ml砷標準儲備溶液(1.0g/ml)于100ml容量瓶中，加水定容，此溶液含砷50ug/ml,準確吸取溶液含砷50ug/ml溶液2.0ml于100ml的容量瓶中，加1ml鹽酸，加水定容，搖勻，此溶液每毫升相當于1.0ug砷。 硫酸溶液（60ml/L）：吸取6.0ml硫酸，緩慢加入到約80ml水中，冷卻后用水稀釋至100ml。3.8.3 儀器砷化氫發(fā)生及吸收裝置砷化氫發(fā)生器：100ml帶30ml、40ml、50ml刻度線和側(cè)管的錐形瓶。導氣管：管徑為8.0-8.5mm，尖端孔為2.5-3.0mm。吸收瓶：下部帶5ml刻度線。分光光度計：波長范圍360-800nm，分析天平：感量0.0001g.可調(diào)式電爐。瓷坩堝：30ml高溫爐：溫控0-950。3.8.4 分析步驟：3.8.4.1 試料的處理混合酸消解法配合飼料及單一飼料，宜采用硝酸-硫酸-高氯酸消解法。稱取試料3-4g（精確到0.0001g）,置于250ml凱氏瓶中，加水少許濕潤試樣，加30毫升混合酸溶液，放置4h以上或過夜，置電爐上從室溫開始消解。待棕色氣體消失后，提高消解溫度，至冒白煙（SO3）數(shù)分鐘（務必趕盡硝酸），此時溶液應清亮無色或淡黃色，瓶內(nèi)溶液體積近似硫酸用量，殘渣為白色。若瓶內(nèi)溶液呈棕色，冷卻后添加適量硝酸和高氯酸，直到消解完全。冷卻，加10ml鹽酸溶液煮沸，稍冷，轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中，用水洗劑凱氏瓶3-5次，洗液并入容量瓶中，然后用水定容，搖勻，待測。試樣消解液含砷小于10ug時，可直接轉(zhuǎn)移到砷化氫發(fā)生器，補加7ml鹽酸，加水使瓶內(nèi)溶液體積為40ml，從加2ml碘化鉀起，按以下步驟操作。同時于相同條件下，做試劑空白試驗。 鹽酸溶樣法礦物元素飼料添加劑不宜加硫酸，應用鹽酸溶樣。稱取試樣1-3g(精確到0.0001g)于100ml高型燒杯中，加水少許濕潤試樣，慢慢地滴加10ml鹽酸溶液（3mol/L），待激烈反應過后，再緩慢加入8ml鹽酸，用水稀釋至約30ml煮沸。轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中，洗劑燒杯3-4次，洗液并入容量瓶中，用水定容搖勻、待測。試樣消解液含砷小于10ug時，可直接轉(zhuǎn)移到砷化氫發(fā)生器，用水稀釋到40ml并煮沸，從加2ml碘化鉀起，按以下步驟操作。另外，少數(shù)礦物質(zhì)飼料富含硫，嚴重干擾砷的測定，可用鹽酸溶解樣品后，往高型杯中加入5ml乙酸鉛溶液并煮沸，靜置20分鐘，形成的硫化鉛沉淀過濾除之，濾液定容至50ml，按以下步驟操作。同時于相同條件下做試劑空白試驗硫酸銅、堿式氯化銅溶樣：稱取試樣0.12-0.5g（精確0.0001g） 于砷化氫發(fā)生器中（若遇砷含量高的樣品時，應先定容，適當分取試樣，使試樣中砷含量在工作曲線之內(nèi)），加5ml水溶解，加2ml乙酸及1.5g碘化鉀，放置5min后，加0.2gL-抗壞血酸使之溶解，加10ml鹽酸，然后用水稀釋至40ml，搖勻，按以下步驟操作。同時于相同條件下做試劑空白試驗 干灰化法添加劑預混合飼料 、濃縮飼料、配合飼料、單一飼料及飼料添加劑可選擇干灰化法。稱取試樣2-3g（精確到0.0001g）于30ml瓷坩堝中，加入5ml硝酸鎂，混勻，于低溫或沸水浴中蒸干，低溫炭化至無煙后，然后轉(zhuǎn)入高溫爐于550恒溫灰化3.5-4h，取出，冷卻，緩慢加入10ml鹽酸溶液（3mol/L），待激烈反應后，煮沸并轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中，用水洗劑坩堝3-5次，洗液并入容量瓶，定容、搖勻、待測。試樣消解液含砷小于10ug時，可直接轉(zhuǎn)移到砷化氫發(fā)生器，補加8ml鹽酸，加水使溶液體積為40ml，加入1g抗壞血酸溶解后，按以下步驟操作。同時于相同條件下，做試劑空白試驗。3.8.5 標準曲線繪制準確吸取砷標準工作溶液（1.0ug/ml）0.00ml、1.00ml、2.00ml、4.00ml、6.00ml、8.00ml、10.00ml于發(fā)生瓶中，加10ml鹽酸，加水稀釋至40ml,從加入2ml碘化鉀起，以下按9.4.3規(guī)定步驟操作，測其吸光度，求出回歸方程各參數(shù)或繪制出標準曲線。當更換鋅粒批號或新配制Ag-DDTC吸收液、碘化鉀溶液和氯化亞錫溶液，均應重新繪制標準曲線。3.8.6 還原反應與比色測定從3.8.4.1處理好的待測液中，準確吸取適量溶液（含砷量應1.0ug）于砷化氫發(fā)生器中，補加鹽酸至總量為10ml,并用水稀釋到40ml,使溶液鹽酸濃度為3mol/L,然后向試樣溶液、試劑空白溶液、標準系列溶液各發(fā)生器中，加入2ml碘化鉀溶液，搖勻，加入1ml氯化亞錫溶液，搖勻，靜置15min.準確吸取5.00mLAg-DDTC吸收液于吸收瓶中，連接好發(fā)生吸收裝置（勿漏氣，導管賽又蓬松的乙酸鉛棉花）。從發(fā)生器側(cè)管迅速加入4g無砷鋅粒，反應45min,當室溫低于15時，反應延長至1h.反應中輕搖發(fā)生瓶2次，反應結(jié)束后，取下接收瓶，用三氯甲烷定容至5ml，搖勻，測定。以原吸收液為參比，災20nm處，用1cm比色池測定。3.8.7分析結(jié)果的計算與表達3.8.7.1結(jié)果計算試樣中總砷含量X，以質(zhì)量分數(shù)（mg/kg）表示，按式（1）計算： 式中： V1試樣消解液定容體積，單位為毫升（ml）;V2分取試液體積，單位為毫升（ml）;A1測試液中含砷量，單位為微克（ug）；A3 試劑空白中含砷量，單位為微克(ug):m 試樣質(zhì)量，單位為克（g）。若樣品中演砷含量很高，可用是（2）計算：式中：V1試樣消解液定容總體積，單位為毫升（ml）;V2 分取試液體積，單位為毫升（ml）;V3分取液在定容體積，單位為毫升（ml）;V4測定時分取V3的體積，單位為毫升(ml);A2測定用試液中含砷量，單位為微克（ug）；A3試劑空白液中含砷量，單位為微克(ug);m_試樣質(zhì)量，單位為克（g）. 3.8.7.2結(jié)果表示每個樣品應做平行樣，以其算數(shù)平均值為分析結(jié)果，結(jié)果表示到0.01mg/kg.當每千克試樣中含砷量1.0mg時，結(jié)果取三位有效數(shù)字。3.8.7.3允許差分析結(jié)果的相對偏差，應大于表1所列允許差。表1 分析結(jié)果允許差飼料中含砷量/（mg/kg）允許相對偏差/（%）1.00 20%1.005.00 10%5.0010.00 5%10.00 3%附3.9、硼氫化物還原光度法（快速法）3.9.1原理樣品經(jīng)酸消解或干灰化破壞有機質(zhì)，使砷成離子狀態(tài)存在，在酒石酸環(huán)境中，硼氫化鉀將砷離子還原成氫化砷（AsH3）氣體.在密閉裝置中，被Ag-DDTC三氯甲烷溶液吸收，形成黃色或棕紅色銀溶膠，其顏色深淺與砷含量成正比，用分光光度計比色測定。3.9.2、試劑溶劑除下列試劑外，其它試劑同上混合酸溶液：HNO3+H2SO4+HCLO4=20+2+3 甲基橙水溶液：1g/L;pH3.0（紅）4.0（橙） 氨水溶液：1+1酒石酸溶液：200g/L 稱取100g酒石酸加水適量，稍加熱溶解，冷卻后定容500ml。 硼氫化鉀片： KBH4:NaCl=1:5,將硼氫化鉀和氯化鈉按質(zhì)量比1：5比例混勻，于90-100干燥2h，壓力為2kPa的條件下，壓制成直徑10mm,厚5mm，每片質(zhì)量為1.00.1g。壓制及儲存中應防潮濕。3.9.3設備：3.9.4 分析步驟3.9.4.1試料的處理混合酸消解法配合飼料及單一飼料，宜采用三酸消解法。稱取試樣2.0-3.0g(精確到0.0001g)，于250ml凱氏燒瓶中，加水少許濕潤式樣，加25ml混合酸溶液（20+2+3），置電路上從室溫開始消解，待樣液煮沸后，關閉電路10-15min，繼續(xù)加熱消解，直至冒白煙（SO3）數(shù)分鐘，此時溶液應清亮無色或淡黃色，體積近似硫酸用量，殘渣為白色。稍冷，轉(zhuǎn)移到100ml砷化氫發(fā)生器中，洗劑凱氏燒瓶3-4次，用水洗液并入發(fā)生器中，使瓶內(nèi)溶液體積為30ml左右（消解時趕盡硝酸，否則結(jié)果偏低）。發(fā)生器中加入2滴甲基橙指示劑，用氨水調(diào)pH值至橙色，再滴加鹽酸溶液（1mol/L）至剛好變紅色，加入6.0ml酒石酸溶液，用水稀釋至50ml。準確吸取5.00ml吸收液于吸收瓶中，連接好發(fā)生吸收裝置（勿漏氣，導管塞有膨松德乙酸鉛棉花），從發(fā)生器側(cè)管迅速加入硼氫化鉀一片，立即蓋緊塞子，反應完畢再加第二片，反應時輕輕搖動發(fā)生器2-3次，待反應結(jié)束后，以原吸收液作參比，在520nm處，用1cm比色池測定。（注：還原反應時，應防止有毒砷化氫氣體泄漏）同時于相同條件下，做試劑空白試驗。鹽酸溶樣法礦物元素飼料添加劑不宜加硫酸，應用鹽酸溶樣，稱取試樣0.5-2.0g，（精確到0.0001g）于發(fā)生器中，慢慢滴加5ml鹽酸溶液（3mol/L）,待激烈反應過后，再緩慢加入3-4ml鹽酸，用水稀釋至30ml煮沸，試樣溶解后，發(fā)生器中加入2滴甲基橙指示劑，用氨水調(diào)pH值至橙色，再滴加鹽酸溶液（1mol/L）至剛好變紅色，加入6.0ml酒石酸溶液，用水稀釋至50ml。準確吸取5.00ml吸收液于吸收瓶中，連接好發(fā)生吸收裝置（勿漏氣，導管塞有膨松德乙酸鉛棉花），從發(fā)生器側(cè)管迅速加入硼氫化鉀一片，立即蓋緊塞子，反應完畢再加第二片，反應時輕輕搖動發(fā)生器2-3次，待反應結(jié)束后，以原吸收液作參比，在520nm處，用1cm比色池測定。（注：還原反應時，應防止有毒砷化氫氣體泄漏）同時于相同條件下，做試劑空白試驗。 干灰化法添加劑預混合飼料、濃縮飼料、配合飼料、單一飼料及飼料添加劑可選擇干灰化法。稱取試樣1-2g（精確到0.0001g）于30ml瓷坩堝中，低溫炭化完全后轉(zhuǎn)入高溫爐中，于550恒溫灰化3h，取出冷卻，緩慢加入10ml鹽酸溶液，待激烈反應完全過后煮沸并轉(zhuǎn)移到砷化氫發(fā)生器中，加水至30ml左右，加入1g抗壞血酸溶解后，發(fā)生器中加入2滴甲基橙指示劑，用氨水調(diào)pH值至橙色，再滴加鹽酸溶液（1mol/L）至剛好變紅色，加入6.0ml酒石酸溶液，用水稀釋至50ml。準確吸取5.00ml吸收液于吸收瓶中，連接好發(fā)生吸收裝置（勿漏氣，導管塞有膨松德乙酸鉛棉花），從發(fā)生器側(cè)管迅速加入硼氫化鉀一片，立即蓋緊塞子，反應完畢再加第二片，反應時輕輕搖動發(fā)生器2-3次，待反應結(jié)束后，以原吸收液作參比，在520nm處，用1cm比色池測定。（注：還原反應時，應防止有毒砷化氫氣體泄漏）同時于相同條件下，做試劑空白試驗。 3.9.5標準曲線繪制準確吸取砷標準工作溶液（1.0ug/ml）0.00ml、1.00 ml、2.00ml、4.00ml、6.0ml、8.0ml于發(fā)生瓶中，加水至60ml,加入6ml酒石酸溶液（200G/L）,準確吸取5.00ml吸收液于吸收瓶中，連接好發(fā)生吸收裝置（勿漏氣，導管塞有膨松德乙酸鉛棉花），從發(fā)生器側(cè)管迅速加入硼氫化鉀一片，立即蓋緊塞子，反應完畢再加第二片，反應時輕輕搖動發(fā)生器2-3次，待反應結(jié)束后，以原吸收液作參比，在520nm處，用1cm比色池測定。（注：還原反應時，應防止有毒砷化氫氣體泄漏）附：氫化物原子熒光光度法3.9.1原理樣品經(jīng)酸消解或干灰