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生物技術(shù)實(shí)踐一、選擇題1.(2011江蘇高考)下列與果酒、果醋和腐乳制作相關(guān)的敘述,正確的是( )a.腐乳制作所需要的適宜溫度最高b.果醋發(fā)酵包括無(wú)氧發(fā)酵和有氧發(fā)酵c.使用的菌種分別是酵母菌、醋酸菌、乳酸菌d.使用的菌種都具有細(xì)胞壁、核糖體、dna和rna【解析】選d。a項(xiàng),果醋制作所需要的適宜溫度最高,為3035。b項(xiàng),果醋發(fā)酵為有氧發(fā)酵,缺氧時(shí)醋酸菌的生長(zhǎng)、增殖都會(huì)受到影響。c項(xiàng),使用的菌種分別是酵母菌、醋酸菌和毛霉等。d項(xiàng),酵母菌和毛霉是真菌,醋酸菌是細(xì)菌,它們都具有細(xì)胞壁、核糖體、dna和rna。2.(2011江蘇高考)下列有關(guān)酶的制備和應(yīng)用的敘述,正確的是( )a.酶解法和吸水漲破法常用于制備微生物的胞內(nèi)酶b.透析、電泳和酸解等方法常用于酶的分離與純化c.棉織物不能使用添加纖維素酶的洗衣粉進(jìn)行洗滌d.多酶片中的胃蛋白酶位于片劑的核心層【解析】選a。酶解法和吸水漲破法可使微生物細(xì)胞破裂,釋放出胞內(nèi)酶;常用透析法、離心沉降法和電泳法進(jìn)行酶的分離和純化;棉織物經(jīng)添加纖維素酶的洗衣粉洗滌后更為蓬松,更為鮮亮;多酶片中的胃蛋白酶位于糖衣之內(nèi),腸溶衣之外。3.(2011江蘇高考)在利用雞血進(jìn)行“dna的粗提取與鑒定”的實(shí)驗(yàn)中,相關(guān)敘述正確的是( )a.用蒸餾水將nacl溶液濃度調(diào)至0.14 mol/l,濾去析出物b.調(diào)節(jié)nacl溶液濃度或加入木瓜蛋白酶,都可以去除部分雜質(zhì)c.將絲狀物溶解在2 mol/l nacl溶液中,加入二苯胺試劑即呈藍(lán)色d.用菜花替代雞血作為實(shí)驗(yàn)材料,其實(shí)驗(yàn)操作步驟相同【解析】選b。a項(xiàng),用蒸餾水將nacl溶液濃度調(diào)至0.14 moll,使dna析出。b項(xiàng),nacl溶液為2moll,過(guò)濾除去不溶的雜質(zhì),木瓜蛋白酶能夠分解蛋白質(zhì)。c項(xiàng),在沸水浴的條件下,dna遇二苯胺會(huì)被染成藍(lán)色。d項(xiàng),如果實(shí)驗(yàn)材料是植物細(xì)胞,需要先用洗滌劑溶解細(xì)胞壁。二、非選擇題4.(2011海南高考)許多植物含有天然香料,如薄荷葉中含有薄荷油。現(xiàn)用薄荷葉提取薄荷油?;卮饐?wèn)題:(1)薄荷油是揮發(fā)性物質(zhì),提取薄荷油時(shí)應(yīng)選用 (選填“鮮”“干”)薄荷葉作原料,其原因是 。(2)用萃取法提取薄荷油時(shí),采用的溶劑是 ,原理是 。(3)用水蒸氣蒸餾法提取薄荷油時(shí),在油水混合物中加入氯化鈉的作用是 。常用于分離油層和水層的器皿是 。分離出的油層中加入無(wú)水硫酸鈉的作用是 ,除去固體硫酸鈉的常用方法是 ?!窘馕觥?1) 薄荷油易揮發(fā),干燥過(guò)程中會(huì)使薄荷油揮發(fā)掉,因此選擇鮮薄荷葉作為原料。(2)薄荷油易溶于有機(jī)溶劑,因此萃取時(shí)所選用的溶劑必須是有機(jī)溶劑,如酒精或石油醚、乙醚、戊烷等。(3)增加鹽的濃度,可使分層更明顯;分離油層和水層的器皿一般選用分液漏斗;無(wú)水硫酸鈉是干燥劑,可以用來(lái)吸收油層中的水分;除去固體硫酸鈉最簡(jiǎn)單的方法是過(guò)濾。答案:(1)鮮 薄荷油易揮發(fā),干燥過(guò)程中會(huì)使薄荷油揮發(fā)掉(2)酒精或石油醚、乙醚、戊烷等 薄荷油易溶于有機(jī)溶劑(3)增加鹽的濃度,使分層更明顯 分液漏斗 吸收油層中的水分 過(guò)濾5.(2011江蘇高考)請(qǐng)回答基因工程方面的有關(guān)問(wèn)題:(1)利用pcr技術(shù)擴(kuò)增目的基因,其原理與細(xì)胞內(nèi)dna復(fù)制類似(如圖所示)。圖中引物為單鏈dna片段,它是子鏈合成延伸的基礎(chǔ)。從理論上推測(cè),第四輪循環(huán)產(chǎn)物中含有引物a的dna片段所占的比例為 。在第 輪循環(huán)產(chǎn)物中開(kāi)始出現(xiàn)兩條脫氧核苷酸鏈等長(zhǎng)的dna片段。(2)設(shè)計(jì)引物是pcr技術(shù)關(guān)鍵步驟之一。某同學(xué)設(shè)計(jì)的兩組引物(只標(biāo)注了部分堿基序列)都不合理(如圖),請(qǐng)分別說(shuō)明理由。第1組: ;第2組: 。(3)pcr反應(yīng)體系中含有熱穩(wěn)定dna聚合酶,下面的表達(dá)式不能正確反映dna聚合酶的功能,這是因?yàn)?。(4)用限制酶ecorv、mbo單獨(dú)或聯(lián)合切割同一種質(zhì)粒,得到的dna片段長(zhǎng)度如下圖(1 kb即1 000個(gè)堿基對(duì)),請(qǐng)畫出質(zhì)粒上ecorv、mbo的切割位點(diǎn)?!窘馕觥?1)從理論上推測(cè),第四輪循環(huán)產(chǎn)物中含有引物a的dna片段所占的比例為15/16。在第三輪循環(huán)產(chǎn)物中開(kāi)始出現(xiàn)兩條脫氧核苷酸鏈等長(zhǎng)的dna片段。(2)某同學(xué)設(shè)計(jì)的兩組引物(只標(biāo)注了部分堿基序列)都不合理,原因引物和引物局部發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)而失效。引物自身折疊后會(huì)出現(xiàn)局部堿基互補(bǔ)配對(duì)而失效。(3) dna聚合酶只能將單個(gè)脫氧核苷酸連續(xù)結(jié)合到雙鏈dna片段的引物鏈上。答案:(1)15/16 三(2)引物和引物局部發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)而失效引物自身折疊后會(huì)出現(xiàn)局部堿基互補(bǔ)配對(duì)而失效(3) dna聚合酶只能將單個(gè)脫氧核苷酸連續(xù)結(jié)合到雙鏈dna片段的引物鏈上(4)見(jiàn)圖6. (2011山東高考)研究發(fā)現(xiàn)柚皮精油和乳酸菌素(小分子蛋白質(zhì))均有抑菌作用,兩者的提取及應(yīng)用如圖所示。(1)柚皮易焦糊,宜采用 法提取柚皮精油,該過(guò)程得到的糊狀液體可通過(guò) 除去其中的固體雜質(zhì)。(2)篩選乳酸菌a時(shí)可選用平板劃線法或 接種。對(duì)新配制的培養(yǎng)基滅菌時(shí)所用的設(shè)備是 。實(shí)驗(yàn)前需對(duì)超凈工作臺(tái)進(jìn)行 處理。(3)培養(yǎng)基中的尿素可為乳酸菌a生長(zhǎng)提供 。電泳法純化乳酸菌素時(shí),若分離帶電荷相同的蛋白質(zhì),則其分子量越大,電泳速度 。(4)抑菌實(shí)驗(yàn)時(shí),在長(zhǎng)滿致病菌的平板上,會(huì)出現(xiàn)以抑菌物質(zhì)為中心的透明圈??赏ㄟ^(guò)測(cè)定透明圈的 來(lái)比較柚皮精油和乳酸菌素的抑菌效果?!窘馕觥?1)柚皮易焦糊,宜采用壓榨法提取柚皮精油,不宜用蒸餾法,壓榨所得糊狀液體可通過(guò)過(guò)濾除去其中的固體雜質(zhì)。(2)接種方法常用的為平板劃線法和稀釋涂布平板法,對(duì)培養(yǎng)基滅菌時(shí)所用的設(shè)備是高壓蒸汽滅菌鍋。實(shí)驗(yàn)前需對(duì)超凈工作臺(tái)進(jìn)行紫外線消毒處理。(3)培養(yǎng)基中的尿素可為乳酸菌a生長(zhǎng)提供碳源和氮源。電泳法純化乳酸菌素時(shí),若分離帶電荷相同的蛋白質(zhì),則其分子量越大,電泳速度越慢。(4)抑菌實(shí)驗(yàn)時(shí),在長(zhǎng)滿致病菌的平板上,會(huì)出現(xiàn)以抑菌物質(zhì)為中心的透明圈??赏ㄟ^(guò)測(cè)定透明圈的大小來(lái)比較柚皮精油和乳酸菌素的抑菌效果答案:(1)壓榨 過(guò)濾 (2)稀釋涂布平板法 高壓蒸汽滅菌鍋 紫外線消毒(3)碳源和氮源 越慢 (4)大小7.(2011天津高考)絮凝性細(xì)菌分泌的具有絮凝活性的高分子化合物,能與石油污水中的懸浮顆粒和有機(jī)物等形成絮狀沉淀,起到凈化污水的作用。為進(jìn)一步提高對(duì)石油污水的凈化效果,將絮凝性細(xì)菌和石油降解菌融合,構(gòu)建目的菌株,其流程圖如下。據(jù)圖回答:(1)溶菌酶的作用是 。(2)peg的作用是 。(3)經(jīng)處理后,在再生培養(yǎng)基上,未融合的a、b難以生長(zhǎng),圖中ab融合菌能生長(zhǎng)和繁殖的原因是 。(4)目的菌株的篩選:篩選既能分泌具有絮凝活性的化合物,又能在含有 的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的ab融合菌,選擇效果最好的作為目的菌株。(5)為探究目的菌株不同發(fā)酵時(shí)間發(fā)酵液的絮凝效果,將目的菌株進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng),定時(shí)取發(fā)酵液,加入石油污水中;同時(shí)設(shè)置 為對(duì)照組。經(jīng)攪拌、靜置各3分鐘后,分別測(cè)定上層水樣的石油濃度和cod值(cod值越高表示有機(jī)物污染程度越高),計(jì)算石油去除率和cod去除率,結(jié)果如圖。(6)目的菌的種群增長(zhǎng)曲線呈 型。在4044小時(shí),發(fā)酵液對(duì)石油污水的凈化效果最好,其原因是 ?!窘馕觥勘绢}借助流程圖考查細(xì)胞工程相關(guān)知識(shí),借助坐標(biāo)曲線展示實(shí)驗(yàn)結(jié)果;考查對(duì)照實(shí)驗(yàn)的設(shè)置、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析及結(jié)論的得出。(1)本題針對(duì)的細(xì)胞是細(xì)菌,細(xì)菌是有細(xì)胞壁的,所以分析流程圖可知,所用溶菌酶的作用是分解去除細(xì)菌細(xì)胞壁。(2)細(xì)胞壁去除后,兩種細(xì)菌的原生質(zhì)體需要誘導(dǎo)融合,所以peg的作用就是誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合。(3)在再生培養(yǎng)基上ab融合菌具有兩菌的活性部位,從而可以互補(bǔ),能夠在再生培養(yǎng)基上生長(zhǎng)和繁殖。(4)目的菌株篩選的原則就是目的菌可以在培養(yǎng)基上生長(zhǎng),而其他的菌株不適應(yīng)該培養(yǎng)基的條件而不能存活,所以篩選的培養(yǎng)基中要有石油。(5)分析實(shí)驗(yàn)的目的可知,本實(shí)驗(yàn)要設(shè)置的對(duì)照實(shí)驗(yàn)應(yīng)該為不加發(fā)酵液的石油污水。(6)分析目的菌株篩選的坐標(biāo)圖可知:隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng),目的菌株相對(duì)數(shù)量的變化呈s型;在4044小時(shí),石油去除率約為43、cod去除率約為64,均表示發(fā)酵液對(duì)石油污水凈化效果最好,這主要是目的菌株在此期間分泌的具有絮凝活性的高分子化合物的含量高。答案:(1)分解細(xì)胞壁 (2)誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合 (3)兩親本失活部位不同,融合后活性部位互補(bǔ) (4)石油 (5)不加發(fā)酵液的石油污水(6)s 此期間,目的菌及其產(chǎn)生的絮凝活性高分子化合物的含量高8. (2011新課標(biāo)全國(guó)卷)有些細(xì)菌可分解原油,從而消除由原油泄漏造成的土壤污染,某同學(xué)欲從污染的土壤中篩選出能高效降解原油的菌株。回答問(wèn)題:(1)在篩選過(guò)程中,應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以 為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上,從功能上講,該培養(yǎng)基屬于 培養(yǎng)基。(2)純化菌種時(shí),為了得到單菌落,常采用的接種方法有兩種,即 和 。(3)為了篩選出高效菌株,可比較單菌落周圍分解圈的大小,分解圈大說(shuō)明該菌株的降解能力 。(4)通常情況下,在微生物培養(yǎng)過(guò)程中,實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法有灼燒滅菌、 和 。無(wú)菌技術(shù)要
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