腫瘤靶向治療基因檢測ppt課件.ppt

腫瘤治療相關(guān)基因檢測 2 腫瘤個體化治療發(fā)展趨勢 循環(huán)腫瘤細(xì)胞 臨床上治療腫瘤的方法 患者對藥物是否敏感 毒性是否可耐受 患者治療后轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)風(fēng)險有多高 個體化治療 醫(yī)學(xué)概念 應(yīng)用它不僅降低并發(fā)癥的發(fā)生 還降低醫(yī)療費(fèi)用 腫瘤標(biāo)準(zhǔn)化治療 期患者 手術(shù) 化療 期患者 放 化療 手術(shù)局部晚期患者 手術(shù) 化療 放療 靶向 腫瘤個體化治療標(biāo)本 基因檢測 遺傳特性 選擇化療 靶向藥物 病理分型 分子分型 已發(fā)現(xiàn)并確認(rèn)至少9種EML4 ALK融合基因的突變體 v1 v2 v3a v3b v4 v5a v5b v6 v7檢測方法 RT PCR FISH PCR 測序等 EML4和ALK兩個基因分別位于人類2號染色體的p21和p23帶 克唑替尼的靶標(biāo) EML4 ALK融合基因 靶向EGFR的抗腫瘤藥物 類別一 小分子酪氨酸激酶抑制劑 EGFR TKI 作用機(jī)制 抑制EGFR胞內(nèi)區(qū)酪氨酸激酶活性 阻斷EGFR信號通路 藥物代表 吉非替尼 阿斯利康 厄羅替尼 羅氏 類別二 單克隆抗體 mAb 作用機(jī)制 與EGFR胞外區(qū)結(jié)合 阻斷配體與EGFR的結(jié)合 藥物代表 西妥昔 默克 貝伐單抗 羅氏 基因EGFR熱點(diǎn)突變位點(diǎn) EGFR主要突變在 外顯子18 19 20 21耐藥突變 T790M 靶向藥物西妥昔單抗靶標(biāo) K ras基因檢測 NCCN明確指出西妥昔單抗 愛必妥 用藥之前須檢測K ras基因突變檢測 K ras突變型患者并不能從抗EGFR治療 愛必妥 中獲益 反而徒增不良反應(yīng)危險和治療費(fèi)用 中國人群中K ras基因突變率15 15 的病人不應(yīng)該使用愛必妥 WorldJGastroenterol 2011November21 17 43 4779 4786 基因KRAS熱點(diǎn)突變位點(diǎn) 10 KRAS主要突變在 外顯子2 密碼子12 13 3 密碼子61 個體化檢測平臺 基因突變檢測 ARMS技術(shù) 測序等 ARMS技術(shù) 普通PCR 等位基因特異性擴(kuò)增法 AlleleSpecificAmplification ASA 建立于1989年 是PCR技術(shù)應(yīng)用的發(fā)展 也稱擴(kuò)增阻滯突變系統(tǒng) AmplificationRefractoryMutationSystem ARMS 等位基因特異性PCR AlleleSpecificPCR ASPCR 等 方法 2條正向引物 針對正常DNA 突變DNA 1條反向引物2個平行的PCR反應(yīng)普通PCR儀 應(yīng)用 對微量突變進(jìn)行檢測 TaqMan ARMS技術(shù) TaqMan ARMS探針技術(shù)基于實(shí)時PCR平臺 結(jié)合了ARMS突變富集和Taqman MGB特異性熒光檢測兩種技術(shù) Taqman MGB 針對SNP位點(diǎn)特異性擴(kuò)增的探針 可區(qū)分一個堿基的突變 一個PCR體系中 1對引物 1條探針每個位點(diǎn)需要做至少兩管PCR擴(kuò)增 SNP位點(diǎn)檢測應(yīng)用 EGFR基因突變檢測方法靈敏度的比較 測序技術(shù)發(fā)展歷程 SangerSequencing 1977 IonSemiconductorSequencing 2011 Next GenSequencing 2005以后 IonTorrent半導(dǎo)體測序原理 IonTorrent半導(dǎo)體測序平臺及芯片 PI芯片 sequenceexomesandwholetranscriptomes 5Gb 目前成熟的腫瘤分子靶向藥物敏感性基因檢測 基因表達(dá)量 mRNA 檢測 指導(dǎo)個體化化療 可使標(biāo)準(zhǔn)化療方案得到個體化應(yīng)用 mRNA檢測主要技術(shù)特色 采用熒光定量PCR技術(shù) 采用內(nèi)參比RNA作為質(zhì)控對照 應(yīng)用beta actin作為內(nèi)對照 定量檢測檢測目的基因mRNA表達(dá)水平 適用于各種腫瘤組織檢測 包括石蠟標(biāo)本 穿刺標(biāo)本 冰凍活檢標(biāo)本等 國內(nèi)采用校準(zhǔn)RNA CalibratorRNA 方法進(jìn)行基因表達(dá)定量 23 基礎(chǔ) 5000例樣本人種 中國患者樣本標(biāo)準(zhǔn) 正態(tài)分布定位 精確到1 統(tǒng)計(jì) p 0 05 Q PCR檢測基因表達(dá)數(shù)據(jù)庫 NCCN2012年版臨床治療指南明確指出 患者接受吉西他濱化療前進(jìn)行RRM1mRNA檢測可提高治療有效率和患者生存率 RRM1表達(dá)與吉西他濱療效相關(guān)的臨床數(shù)據(jù) ERCC1表達(dá)與鉑類藥物療效相關(guān)的臨床數(shù)據(jù) ERCC1低表達(dá)患者 能從鉑類輔助化療中獲益 BRCA1 2表達(dá)與鉑類藥物療效相關(guān)的臨床數(shù)據(jù) BRCA1過度表達(dá)鉑類耐藥的預(yù)測因子抗微管類藥物的敏感因子 28 低TSmRNA水平的腫瘤患者接受氟類化療的效果較好 中位生存期較長 TS低表達(dá)的患者對培美曲賽的療效好 TS高表達(dá)影響氟類和培美曲塞藥效 ShirotaYetal JClinOncol 2001 19 4298 304 TUBB3高表達(dá)對紫杉醇和長春堿類不敏感 TUBB3陽性表達(dá)是抗微管類藥物敏感預(yù)測因子 30 STMN1表達(dá)檢測意義 預(yù)后 表達(dá)水平越高 患者的生存率越低 腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移的風(fēng)險越高 療效 低表達(dá)接受長春瑞濱 順鉑治療的效果較好 中位生存期較長 STMN1高表達(dá)接受長春瑞濱 順鉑的療效較差 ElizabethAetal CancerRes 2002 62 6864 6869 乳腺癌患者預(yù)后指標(biāo)及曲妥珠單抗治療的靶點(diǎn) 胃癌曲妥珠單抗靶向治療的靶點(diǎn) HER2基因檢測 FDA2013年關(guān)于胃癌HER2檢測流程建議 ASCO CAP2013指南關(guān)于乳腺癌HER2檢測推薦 IHC檢測HER2蛋白表達(dá)水平FISH檢測HER2基因擴(kuò)增 靶向藥物敏感性解決方案 化療藥物敏感性解決方案 循環(huán)腫瘤細(xì)胞 CTC 檢測 1869年AustMedJ Ashworth最早在轉(zhuǎn)移性癌癥患者血液中觀察到 2005年NEnglJMed Cristofanilli證實(shí)治療前CTC數(shù)目是轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者無進(jìn)展生存期和總生存期的獨(dú)立預(yù)測因子 循環(huán)腫瘤細(xì)胞指從實(shí)體瘤中脫離出來并進(jìn)入外周血液循環(huán)的腫瘤細(xì)胞 循環(huán)腫瘤細(xì)胞 循環(huán)腫瘤細(xì)胞 CTC 檢測 全球唯一一個獲得FDA和SFDA認(rèn)證的循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測系統(tǒng) CirculatingTumorCell 強(qiáng)生CellSearch系統(tǒng)國內(nèi)注冊情況 如何鑒別出CTC CTC Anti EpCAM磁珠 Anti CK PE NucleusDAPI CK EpCAM 在CellSearch 檢測中 CTC被設(shè)定為 EpCam 上皮來源細(xì)胞表面抗原 CK 8 18和 或19 腫瘤細(xì)胞表面抗原 DAPI 細(xì)胞核染料 CD45 白細(xì)胞表面抗原 CTC數(shù)量與無進(jìn)展生存期和總生存期的關(guān)系 化療后CTC數(shù)量少于閾值的患者無進(jìn)展生存期和總生存期明顯高于CTC數(shù)量大于閾值的患者 化療前后CTC數(shù)量都少于閾值的患者無進(jìn)展生存期和總生存期明顯高于只有一次測出CTC數(shù)量少于閾值的患者 乳腺癌閾值5 結(jié)直腸癌閾值3 前列腺癌閾值5 為什么要選擇使用CTC系統(tǒng) 唯一的標(biāo)準(zhǔn)化 自動化循環(huán)腫瘤細(xì)胞計(jì)數(shù)系統(tǒng)具可重復(fù)性和高敏感度系統(tǒng)最低檢測限度 7 5ml外周血中的1個腫瘤細(xì)胞臨床意義預(yù)測無進(jìn)展生存期和總生存期轉(zhuǎn)移性癌癥的監(jiān)護(hù)療效監(jiān)控復(fù)查 早于影像學(xué)發(fā)現(xiàn)疾病進(jìn)展情況 CTC檢測樣本 使用CellSave儲存管采集靜脈血液標(biāo)本10ml輕輕顛倒8次 防止凝塊樣本室溫條件 15 30攝氏度 下96小時之內(nèi)接受處理接受阿霉素治療的患者給藥之后 至少需要等待7天術(shù)后15天以后 樣本溶血及結(jié)塊不能用于CTC檢測 送檢樣本要求 腫瘤個體化用藥是發(fā)展趨勢腫瘤個體化用藥分子靶標(biāo)及靶向藥物開發(fā)的關(guān)聯(lián)研究越來越多部分基因檢測近年已逐步在臨床推廣比較完整的個體化診療解決方案逐步誕生 結(jié)語 腫瘤個體化治療發(fā)展趨勢 為什么要做分子檢測 腫瘤分子分型時代要到來 在美國華盛頓大學(xué) LukasWartman醫(yī)生患上了成人急性淋巴細(xì)胞白血病 Lukas的病情很快惡化