枳實(shí)配方顆粒、相應(yīng)飲片及湯劑HPLC圖譜對比分析.doc

枳實(shí)配方顆粒、相應(yīng)飲片及湯劑HPLC圖譜對比分析作者：張玲,劉振麗,宋志前,王淳,李林福,王躍生【摘要】 目的 考察枳實(shí)配方顆粒質(zhì)量。方法 選用3個(gè)批次枳實(shí)飲片制備配方顆粒與湯劑。采用Zobax Extend C18色譜柱,乙腈-水-磷酸-十二烷基硫酸鈉(128710.2)為流動(dòng)相,檢測波長為275 nm。結(jié)果 枳實(shí)配方顆粒與相應(yīng)飲片和湯劑HPLC圖譜出峰數(shù)量、峰位無差異；配方顆粒與湯劑相應(yīng)峰的相對峰面積無明顯區(qū)別,但與飲片有一定差異。結(jié)論 HPLC圖譜顯示枳實(shí)配方顆粒與湯劑具有高度的相似性。 【關(guān)鍵詞】 枳實(shí)；配方顆粒；高效液相色譜法 Abstract：Objective To inspect the quality of Fructus Aurantii Immaturus formula granule. Methods Choose three batch Fructus Aurantii Immaturus to prepare formula granule and decoction. Zobax Extend C18 column was used with acetonitrile-water-phosphoric acid-sodium lauryl sulphate (128710.2) as the mobile phase, the detection wavelength was 275 nm. Result There were no differences in elution peak quantity and peak position in the HPLC spectrum of Fructus Aurantii Immaturus formula granule with corresponding cut crude drug and decoction. The relative peak area in the corresponding peak of formula granule had no significant difference with decoction, but had certain differences with cut crude drug. Conclusion HPLC spectrum showed that Fructus Aurantii Immaturus formula granule and decoction had high similarity.Key words：Fructus Aurantii Immaturus；formula granule；HPLC枳實(shí)為常用理氣藥,具有破氣消積、化痰散痞的功效1,主要含有揮發(fā)油、黃酮類和生物堿類化學(xué)成分2。枳實(shí)配方顆粒為枳實(shí)飲片經(jīng)水煎提取后,用噴霧干燥等技術(shù)制成的單劑量顆粒劑型,目前允許等同枳實(shí)飲片作為湯劑配方使用。為對枳實(shí)配方顆粒質(zhì)量進(jìn)行綜合考察,本實(shí)驗(yàn)對3個(gè)批次枳實(shí)飲片及由其制備的相應(yīng)配方顆粒和湯劑的HPLC圖譜進(jìn)行了對比分析。1 實(shí)驗(yàn)材料高效液相色譜儀：HP1100,G1322A脫氣機(jī),G1311A四元泵,G1316A恒溫箱,G1315B DAD檢測器,G1313A自動(dòng)進(jìn)樣器,HP化學(xué)工作站。枳實(shí)配方顆粒3批,分別由江西、四川、湖南飲片廠提供。相應(yīng)飲片制備的湯劑在實(shí)驗(yàn)室按臨床常規(guī)用藥方法制備。辛弗林對照品(批號0727-200105,含量測定用)購自中國藥品生物制品檢定所。乙腈為色譜純,水為重蒸水,其它試劑均為分析純。2 方法與結(jié)果2.1 色譜條件 Zobax Extend C18柱(4.6 mm150 mm,5 m),流動(dòng)相：乙腈-水-磷酸-十二烷基硫酸鈉(128710.2)；流速：1.2 mL/min；檢測波長275 nm；柱溫30 。2.2 對照品峰的確認(rèn) 取辛弗林對照品,用甲醇配制成每1 mL 含0.4 mg的對照品溶液,在上述色譜條件下,精密吸取5 L注入液相色譜儀,確定色譜峰峰位。2.3 供試品溶液的制備2.3.1 配方顆粒供試品溶液的制備 取枳實(shí)配方顆粒粉末0.2 g(過4號篩),精密稱定,置錐形瓶中,加入甲醇25 mL,加熱回流1.0 h,放冷,濾過,蒸干,殘?jiān)铀? mL使溶解,通過聚酰胺柱(6090目,3 g,內(nèi)徑1.5 cm,干法裝柱),用水25 mL洗脫,收集洗脫液,轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中,加水至刻度,搖勻,即得。2.3.2 湯劑供試品溶液的制備精密吸取相當(dāng)于1 g枳實(shí)的湯劑,置錐形瓶中,收干。其余操作同“2.3.1”項(xiàng)。2.3.3 飲片供試品溶液的制備取枳實(shí)飲片粉末1.0 g(過4號篩),其余操作同“2.3.1”項(xiàng)。2.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一配方顆粒制備的供試品溶液,連續(xù)進(jìn)樣5次,結(jié)果色譜峰相對保留時(shí)間比值的RSD為0.84%3.08%,相對峰面積比值的RSD為1.50%3.20%。轉(zhuǎn)貼于 2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一配方顆粒制備的供試品溶液,分別于0、2、4、6、8、24 h進(jìn)樣,各共有特征峰相對保留時(shí)間比值的RSD為0.51%3.02%,相對峰面積比值的RSD為0.74%3.12%。2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一配方顆粒粉末(過4號篩)0.2 g,5份,按供試品溶液處理,各共有色譜峰相對保留時(shí)間的RSD為0.47%2.51%,相對峰面積的RSD為0.63%2.28%。2.7 供試品HPLC圖譜的測定 取3個(gè)批次枳實(shí)飲片、相應(yīng)配方顆粒和湯劑,按供試品溶液制備方法操作,精密吸取20 L進(jìn)樣測定,得到各樣品HPLC圖譜。以樣品HPLC圖譜中辛弗林峰為參照峰(=1,s峰),求出各樣品中均存在的色譜峰的相對保留時(shí)間值和相對峰面積值。由于保留時(shí)間受實(shí)驗(yàn)因素的影響,參考文獻(xiàn)1方法,對每個(gè)峰位的值根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)的處理設(shè)定窗口5%,即值取可信限在5%的范圍內(nèi)。按值的大小次序排列,并計(jì)算每個(gè)值項(xiàng)下該峰的相對峰面積值。3個(gè)產(chǎn)地飲片、制備的湯劑及中試生產(chǎn)的配方顆粒HPLC圖譜見圖1。色譜峰相對保留時(shí)間、相對峰面積結(jié)果見表1、表2。表1 3批枳實(shí)飲片、相應(yīng)湯劑及配方顆粒特征峰相對保留時(shí)間比較(略)表2 3批枳實(shí)飲片、相應(yīng)湯劑及配方顆粒特征峰相對峰面積比較（略）3 討論 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,3個(gè)批次的枳實(shí)飲片、相應(yīng)配方顆粒及相應(yīng)湯劑的HPLC圖譜共有的色譜峰峰位、峰數(shù)一致(見表1),配方顆粒及相應(yīng)湯劑相對峰面積值相差不大(見表2)。說明經(jīng)過工藝制備后,在此分析條件下配方顆粒與湯劑具有相同的成分,且各成分間含量比例無明顯變化。 枳實(shí)中的黃酮類成分存在種類差異3,因此,如以黃酮類成分作為考察對象,不同批次飲片及相應(yīng)配方顆粒、湯劑的HPLC圖譜肯定存在很大差異。2005年版中華人民共和國藥典將生物堿類成分辛弗林作為枳實(shí)含量測定項(xiàng)下的指標(biāo)成分2。為保證制定的配方顆粒質(zhì)量評價(jià)方法的可行,本實(shí)驗(yàn)通過聚酰胺柱吸附黃酮類成分,避免不同產(chǎn)地飲片中黃酮類成分種類不同引起的色譜峰差異。實(shí)驗(yàn)中選取了適合生物堿類成分分析的液相色譜流動(dòng)相,對枳實(shí)配方顆粒及相應(yīng)的飲片和湯劑進(jìn)行了對比分析。 供試品溶液制備中曾比較了4種方法：用甲醇回流提取；用水回流提取；用甲醇回流提取后通過聚酰胺柱；用水回流提取后通過聚酰胺柱。液相色譜圖顯示以甲醇回流提取后通過聚酰胺柱出峰最好,故確定供試品以甲醇回流提取后通過聚酰胺柱制備。鑒于生物堿類成分的特點(diǎn),在流動(dòng)相中加入了離子對試劑以實(shí)現(xiàn)其在色譜柱上的保留。曾比較了在流動(dòng)相中加入十二烷基硫酸鈉-磷酸、十二烷基磺酸鈉-磷酸二氫鉀-冰醋酸、二乙胺和三乙胺,結(jié)果以十二烷基硫酸鈉-磷酸較好。曾試用流動(dòng)相梯度洗脫,以使圖譜中前面的成分得以分離,但由于十二烷基硫酸鈉在乙腈中的溶解性不好,結(jié)果顯示,供試品色譜峰重復(fù)性不好,基線不平穩(wěn),故而采用了線性洗脫?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(一部)S.北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2005.172.