高中生物 專題五 課題2 多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增dna片段課件 新人教版.ppt

課題2 多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增dna片段 生物體內(nèi)的dna復(fù)制 細(xì)胞核 1 dna復(fù)制的場(chǎng)所是 2 參與dna復(fù)制的組成成分與反應(yīng)條件 打開(kāi)dna雙鏈 提供dna復(fù)制的模板 續(xù)表 4種脫氧核苷酸 催化合成dna子鏈 使dna聚合酶能夠從引物的3 端開(kāi)始連接脫氧核苷酸 pcr擴(kuò)增技術(shù) 1 概念 dna pcr技術(shù)是 的簡(jiǎn)稱 是一種在 進(jìn)行的迅速擴(kuò)增dna的技術(shù) 它能夠以極少量的 為模板在短時(shí)間內(nèi)復(fù)制出上百萬(wàn)份 2 pcr反應(yīng)過(guò)程 1 變性 2 復(fù)性 3 延伸 3 結(jié)果 兩個(gè)引物 dna聚合酶只能特異性地復(fù)制在 之間的dna序列 使這段固定長(zhǎng)度的序列呈指數(shù)擴(kuò)增 多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 體外 dna含量測(cè)定1 原理 利用dna在 的紫外線波段的吸 收峰曲線來(lái)測(cè)定相應(yīng)含量 260nm 2 計(jì)算公式 dna含量 g ml 50 260nm讀 數(shù) 稀釋倍數(shù) dna的體內(nèi)復(fù)制與pcr擴(kuò)增的區(qū)別與聯(lián)系 pcr技術(shù)的原理及過(guò)程 1 pcr原理 pcr技術(shù)利用了dna的熱變性原理 在80 100 的范圍內(nèi) dna的雙螺旋結(jié)構(gòu)解體 雙鏈分開(kāi) 當(dāng)溫度緩慢降低時(shí) 兩條彼此分離的dna鏈又會(huì)重新結(jié)合成雙鏈 2 pcr的反應(yīng)過(guò)程 1 變性 當(dāng)溫度上升到90 以上時(shí) 雙鏈dna解旋為單 鏈 2 復(fù)性 溫度下降為50 左右時(shí) 兩種引物通過(guò)堿基互 補(bǔ)配對(duì)與兩條單鏈dna結(jié)合 3 延伸 當(dāng)溫度上升至72 左右時(shí) 四種脫氧核苷酸在 dna聚合酶的作用下 合成新的dna鏈 3 pcr反應(yīng)的條件 1 穩(wěn)定的緩沖液環(huán)境 2 dna模板 3 分別與模板dna兩條模板鏈相結(jié)合的引物 4 a t c g四種脫氧核苷酸 5 耐熱的dna聚合酶 一般用taqdna聚合酶 6 能嚴(yán)格控制溫度變化的溫控設(shè)施 pcr擴(kuò)增技術(shù)與dna體內(nèi)復(fù)制的區(qū)別 例1 下列屬于pcr擴(kuò)增區(qū)別于dna體內(nèi)復(fù)制的是 需要解旋酶 需要引物 常溫常壓下進(jìn)行 以四 種脫氧核苷酸為原料 需要耐高溫的taqdna聚合酶 邊 解旋邊復(fù)制 可以短時(shí)間得到大量拷貝 需要模板 a c b d 名師點(diǎn)撥 體內(nèi)復(fù)制與pcr擴(kuò)增既有區(qū)別又有聯(lián)系 pcr體外擴(kuò)增概念很明確 在體外 加熱解旋 因此需要耐高溫的taqdna聚合酶 它能以極少量的dna為模板 在幾小時(shí)內(nèi)復(fù)制出上百萬(wàn)份的dna 答案 c 配對(duì)練習(xí)1 真核生物細(xì)胞質(zhì)中也有dna 例如葉綠體 線粒體等 關(guān)于細(xì)胞質(zhì)dna復(fù)制不正確的是 a 需要解旋酶b 需要dna聚合酶c 兩條鏈同時(shí)復(fù)制只有一個(gè)起點(diǎn)d 不是半保留復(fù)制解析 真核生物細(xì)胞質(zhì)中dna復(fù)制需要解旋酶 dna聚合酶 兩條鏈同時(shí)復(fù)制只有一個(gè)起點(diǎn) 是半保留復(fù)制 答案 d pcr擴(kuò)增的條件 例2 pcr擴(kuò)增包括三個(gè)環(huán)節(jié) 變性 復(fù)性 退火 延伸 這三步的溫度依次是 a 94 55 72 b 72 55 94 c 55 94 72 d 80 60 72 名師點(diǎn)撥 pcr擴(kuò)增的原理就是利用dna耐高溫的特性 使dna在94 左右雙鏈解螺旋 然后在低溫 37 55 的情況下 兩條人工合成的寡核苷酸引物與互補(bǔ)的單鏈dna模板結(jié)合 形成部分雙鏈 在taqdna聚合酶的最適溫度 72 下 以引物3 端為合成的起點(diǎn) 以單核苷酸為原料 沿模板從子鏈的5 3 方向延伸 合成dna新鏈 答案 a 配對(duì)練習(xí)2 在下面哪個(gè)溫度范圍內(nèi) dna雙螺旋結(jié)構(gòu) 解