「生理實驗家兔呼吸衰竭和肝性腦病實驗報告」.doc

醫(yī)學(xué)形態(tài)與機能實驗技術(shù)實驗報告中山醫(yī)學(xué)院 09393184林永東一：實驗綜述 本次實驗包括2個實驗：家兔急性呼吸衰竭實驗和肝性腦病實驗，通過制作兔的閉合性氣胸及開放性氣胸，復(fù)制呼吸衰竭模型。做氣管內(nèi)插管并連接呼吸傳感設(shè)置，記錄家兔呼吸運動的變化，以及記錄注射不同劑量的氯化銨對家兔的影響，結(jié)合組織制片和顯微照相等技術(shù)，從器官層次到細胞層次了解肺，肝急性衰竭前后結(jié)構(gòu)組織變化的情況。二：目的和原理1：呼吸衰竭是指由于外呼吸功能的嚴重障礙，以致動脈血氧分壓低于正常范圍，伴有或不伴有二氧化碳分壓增高的病理過程。肺通氣障礙或（和）肺換氣功能障礙都可引起呼吸衰竭。本實驗通過復(fù)制呼吸衰竭病理模型，觀察呼吸和血氣的變化并分析其機制，學(xué)習(xí)動脈采血的方法，了解血氣測定方法。2：正常情況下，血氨的來源與清除保持動態(tài)平衡，而氨在肝臟中合成尿素是維持此平衡的關(guān)鍵。通過結(jié)扎大部分肝臟造成急性肝功能不全，然后經(jīng)消化道輸入堿性氯化銨溶液，導(dǎo)致腸道中氨生成增多并吸收入血，引起實驗動物血氨迅速升高，出現(xiàn)震顫、抽搐、昏迷等類似肝性腦病癥狀，證明氨在肝性腦病發(fā)病機制中起主要作用。本次實驗的目的是學(xué)習(xí)復(fù)制急性肝功能不全造成急性肝功能不全模型的方法，了解氨在肝性腦病發(fā)病機制中的作用，通過制作組織切片了解肝組織損傷的形態(tài)學(xué)改變。 三：實驗對象家兔四：手術(shù)器材和藥品兔手術(shù)臺、實驗手術(shù)器械一套、氣管插管（兩側(cè)管套有橡皮管）、連接靜脈插管的輸液裝置、連接三通的動脈插管、注射器（1ml、2ml、10ml、50ml）、軟木塞、濾紙、血氣酸堿分析儀。離心機、分光光度計、水浴鍋、電爐、注射器（5ml）、輸液瓶、膠管、螺旋夾、滴管、吸管、離心管、試管、試管夾、試管架、酒精燈、手術(shù)器械一套、輸尿管塑料插管、顯微鏡、玻片。20烏拉坦、1肝素生理鹽水溶液、生理鹽水、0.1腎上腺素， 2.5%氯化銨，1%普魯卡。五：實驗步驟肺衰竭：1取家兔一只，稱重，從耳緣靜脈注射20烏拉坦溶液5ml/kg。將家兔仰臥固定于兔臺上。2沿頸部正中切開皮膚，分離氣管，插入氣管插管。分離左側(cè)頸總動脈，插入充滿肝素生理鹽水的動脈插管。分離右側(cè)頸外靜脈，插入靜脈插管，連接輸液裝置，并緩慢輸入生理鹽水（45滴/min）。3用注射器抽出動脈插管內(nèi)的死腔液，然后用充有肝素生理鹽水溶液的注射器與動脈插管相連，讓血液自動流入注射器內(nèi)（切勿進入氣泡），取血2ml，迅速套上帶軟木塞的針頭，作血氣分析，同時觀察家兔的呼吸頻率及深度。4打開胸腔，觀察家兔的呼吸頻率和深度。5：用止血鉗夾住氣管，處死動物，打開胸腔，在氣管分叉處結(jié)扎氣管以防止水腫液流出，取出一部分肺組織。注意事項：1、穿刺胸腔時，針頭應(yīng)與胸壁垂直，順肋骨上緣插入以免損傷肋間動脈，注意不要插得太深或太淺（0.5cm左右）進針時不可用力夠猛以免穿破胸膜臟層。肝衰竭：1：取兔一只，稱重后仰臥固定于兔臺上，剪去腹部正中兔毛，在上腹部正中用1%普魯卡因作浸潤性局麻。2：從胸骨劍突起作上腹部正中切口（長約5-6cm），打開腹腔后，即可見到肝臟。用手輕輕向下壓肝臟，切斷肝與橫膈之間的鐮狀韌帶。3：將肝臟各葉向上翻，除與胃連接緊密的肝尾葉外，用粗棉線自根部將其余各部結(jié)扎。4：順著胃幽門部找出十二指腸，在其表面作一荷包縫合。用眼科剪剪一小口，插入一導(dǎo)尿管，結(jié)扎固定，然后關(guān)閉腹腔，然后關(guān)閉腹腔，松綁，放于實驗桌上進行觀察和實驗。5：觀察家兔的一般情況，角膜反射及對刺激的反應(yīng)。6：每隔5min向十二指腸內(nèi)注入2.5%氯化銨混合液5ml。仔細觀察動物的一般情況、角膜反射及對刺激反應(yīng)的變化。注意有無反應(yīng)性增高，直至出現(xiàn)痙攣發(fā)作為止。記錄從給藥開始到痙攣抽搐發(fā)作時間以及用藥總量。7：切下一小塊肝尾葉組織和一小塊之前結(jié)扎的正常肝臟組織，制成組織切片并進行觀察。注意事項：1、 勿將藥液漏入腹腔。2、 用生理鹽水紗布覆蓋傷口，避免體熱及水分丟失。3、 手術(shù)操作要輕，因肝臟軟易破。切斷鐮狀韌帶時要小心勿損傷其后方的下腔靜脈。4、 動物行局麻時，有時會掙扎，要與氨引起的強直性痙攣相區(qū)別。六：實驗結(jié)果肺呼吸衰竭（1） 呼吸曲線描記1.正常呼吸2.閉合性氣胸 呼吸幅度降低3.閉合性氣胸搶救后 4.開放性氣胸 呼吸曲線很快便接近一條直線（2） 病理切片氣胸模型肺組織的組織切片10*10倍肺整體 支氣管腔內(nèi)空氣充滿40*10倍支氣管腔 支氣管腔增大40*10倍 可見肺臟萎縮肝急性衰竭（一）、每隔5min注入5ml的氯化銨混合液，并觀察兔子的一般情況，角膜反射，刺激反應(yīng)等，記錄結(jié)果如下：次數(shù)時間一般情況角膜反射刺激反應(yīng)10min正常存在（+）靈敏（+）25min正常存在（+）靈敏（+）310min正常存在（+）靈敏（+）415min正常存在（+）靈敏（+）520min從21min開始抽搐，22min出現(xiàn)角弓反張（2） 、病理切片1、 肝尾葉10倍 肝小葉中央靜脈 可見部分肝細胞呈空泡樣門管區(qū)有炎癥細胞浸潤40倍 肝尾葉肝細胞 部分肝細胞受損，肝細胞腫脹呈球形 有些可見炎癥細胞肝竇內(nèi)淤血門管區(qū)2、正常的肝組織切片七：實驗討論肺呼吸衰竭 本實驗以兔子為實驗對象，分別制作兔子閉合性氣胸、開放性氣胸導(dǎo)致急性呼吸衰竭以觀察兔子的呼吸曲線變化。從呼吸曲線可以看出，對兔子進行閉合性氣胸后，呼吸幅度降低，頻率減慢，直至接近直線，抽氣搶救成功后，呼吸曲線逐漸恢復(fù)到接近原來狀態(tài)；對兔子進行開放性氣胸，可觀察到呼吸曲線很快便接近一條直線，呼吸衰竭模型制作成功。 肝急性衰竭肝性腦?。╤epatic encephalopathy，he）是由嚴重肝病引起的，以代謝紊亂為基礎(chǔ)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能失調(diào)的綜合征。臨床表現(xiàn)為意識障礙、行為失常和昏迷。可以從開始的情緒或行為改變、衣著不整和大腦反應(yīng)遲鈍，發(fā)展至昏迷及深度昏迷。病因 大部分肝性腦病是由各型肝硬化 （ 病毒性肝炎肝硬化最多見 ） 和門體分流手術(shù)引起，包括如經(jīng)頸靜脈肝內(nèi)門體分流術(shù) （tips） ，如果連輕微肝性腦病也計算在內(nèi)，則肝硬化發(fā)生肝性腦病者可達70%.小部分肝性腦病見于重癥病毒性肝炎、中毒性肝炎和藥物性肝病的急性或暴發(fā)性肝功能衰竭階段。其余見于原發(fā)性肝癌、妊娠期急性脂肪肝、嚴重膽道感染等。引起肝性腦病的誘因可歸納為三方面：增加氨等含氮物質(zhì)及其他毒物的來源，如進過量的蛋白質(zhì)、消化道大出血、氮質(zhì)血癥、口服銨鹽、尿素、蛋氨酸等。便秘也是不利的因素，使有毒物質(zhì)排出減慢。低鉀堿中毒時，nh4+容易變成nh3，導(dǎo)致氨中毒，常由于大量利尿或放腹水引起。加重對肝細胞的損害，使肝功能進一步減退。例如手術(shù)、麻醉、鎮(zhèn)靜劑、某些抗癆藥物、感染和缺氧等。在慢性肝病時，大約半數(shù)病例可發(fā)現(xiàn)肝性腦病的誘因。發(fā)病機制 肝性腦病的發(fā)病機制未完全明確。一般認為產(chǎn)生肝性腦病的病理生理基礎(chǔ)是肝細胞功能衰竭和門腔靜脈之間有手術(shù)造成的或自然形成的側(cè)支分流。主要是來自腸道的許多毒性代謝產(chǎn)物，未被肝解毒和清除，經(jīng)側(cè)支進入體循環(huán)，透過血腦屏障而至腦部，引起大腦功能紊亂。血吸蟲病性肝纖維化雖有側(cè)支循環(huán)，但由于肝功能較好，很少發(fā)生肝性腦病。有關(guān)肝性腦病發(fā)病機制有許多學(xué)說，其中以氨中毒理論的研究最多，最確實有據(jù)。暴發(fā)性肝功能衰竭所致的肝性腦病與門一體性肝性腦病的發(fā)病機制不盡相同。氨中毒學(xué)說氨代謝紊亂引起的氨中毒是肝性腦病，特別是門體分流性腦病的重要發(fā)病機制。與氨中毒有關(guān)的腦病又稱為氮性腦?。╪itrogenousencephalopathy）。（一）氨的形成和代謝 血氨主要來自腸道、腎和骨髓肌生成的氨，但胃腸道是氨進入身體的主要門戶。正常人胃腸道每日可產(chǎn)氨 4g ， 大部分是由尿素經(jīng)腸道細菌的尿素酶分解產(chǎn)生， 小部分是食物中的蛋白質(zhì)被腸道細菌的氨基酸氧化酶分解產(chǎn)生。氨在腸道的吸收主要以非離子型氨 （nh3） 彌散進入腸膜，其吸收率比離子型銨 （nh 4 ） 高得多。游離的 nh 3 有毒性，且能透過血腦屏障； nh 4 呈鹽類形式存在，相對無毒，不能透過血腦屏障。 nh 3 與 nh 4 的互相轉(zhuǎn)化受 ph 梯度改變的影響。當結(jié)腸內(nèi) ph6 時， nh 3 大量彌散入血； ph6 時，則 nh 3 從血液轉(zhuǎn)至腸腔，隨糞排泄。腎產(chǎn)氨是通過谷氨酰胺酶分解谷氨酰胺為氨，亦受腎小管液 ph 的影響。此外，骨髓肌和心肌在運動時也能產(chǎn)氨。機體清除血氨的主要途徑為：尿素合成，絕大部分來自腸道的氨在肝中經(jīng)鳥氨酸代謝環(huán)轉(zhuǎn)變?yōu)槟蛩兀?腦、肝、腎等組織在三磷酸腺昔 （atp） 的供能條件下，利用和消耗氨以合成谷氨酸和谷氨酰胺；腎是排泄氨的主要場所，除排出大量尿素外，在排酸的同時，也以 nh 4 的形式排除大量的氨； 血氨過高時可從肺部少量呼出。（二）肝性腦病時血氨增高的原因 血氨增高主要是由于生成過多和 （ 或 ） 代謝清除過少。 在肝功能衰竭 時，肝將氨合成為尿素的能力減退，門體分流存在時，腸道的氨未經(jīng)肝解毒而直 接進入體循環(huán)，使血氨增高。許多誘發(fā)肝性腦病的因素能影響血氨進入腦組織的量，和（或）改變腦組織對氨的敏感性。 診斷肝性腦病的臨床表現(xiàn)主要診斷依據(jù)為：嚴重肝病 （ 或 ） 廣泛門體側(cè)支循環(huán)；精神紊亂、昏睡或昏迷；肝性腦病的誘因；明顯肝功能損害或血氨增高。撲翼（擊）樣震顫和典型的腦電圖改變有重要參考價值。對肝硬化患者進行數(shù)字連接試驗和心理智能測驗可發(fā)現(xiàn)輕微肝性腦病。鑒別診斷肝性腦病應(yīng)與精神病及可引起昏迷的其他疾病，如腦血管意外、糖尿病、低血糖、尿毒癥、腦部感染和鎮(zhèn)靜藥過量等相鑒別。進一步追問肝病病史，檢查肝脾大小、肝功能、血氨、腦