高中生物《第二章 第二節(jié) 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)》課件 新人教版選修1.ppt

專題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用 課題2 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù) 課題目標(biāo) 研究培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用 進(jìn)行微生物數(shù)量的測(cè)定 研究對(duì)象 土壤中能分解尿素的細(xì)菌 達(dá)到目的 1 從土壤中分離出能夠分解尿素的細(xì)菌 2 統(tǒng)計(jì)每克土壤樣品中究竟含有多少這樣的細(xì)菌 課題背景 尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥 但是尿素并不能直接被農(nóng)作物吸收 只有當(dāng)土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氮之后 才能被植物利用 土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素 是因?yàn)樗鼈兡芎铣呻迕?尿素最初是從人的尿液中發(fā)現(xiàn)的 1828年 德國(guó)化學(xué)家維勒成功地通過(guò)無(wú)機(jī)物的化學(xué)反映合成了尿素 揭開了歷史上人工合成有機(jī)物的新篇章 尿素 課題2土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù) 研究思路 一 篩選菌株 原理 人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件 包括營(yíng)養(yǎng) 溫度 ph等 同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng) 有選擇作用 回答 1 在該配方中 為微生物生長(zhǎng)提供碳源和氮源的是什么物質(zhì) 2 絕大多數(shù)的微生物都能利用葡萄糖 但是 只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素 請(qǐng)分析該培養(yǎng)基是否對(duì)微生物有選擇作用 如果有 是如何進(jìn)行選擇的 葡萄糖 尿素 選擇培養(yǎng)基 在微生物學(xué)中 將允許特定種類的微生物生長(zhǎng) 同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基 統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目 常用方法 稀釋涂布平板法 顯微鏡直接計(jì)數(shù)法 還可以用過(guò)濾膜法 1 稀釋涂布平板法 也叫活菌計(jì)數(shù)法 原理 當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí) 培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落 來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌 通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù) 就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌 為了保證結(jié)果的準(zhǔn)確 一般選擇菌落數(shù)在30 300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù) 若設(shè)置的重復(fù)組中結(jié)果相差太遠(yuǎn) 意味著操作有誤 需重新實(shí)驗(yàn) 計(jì)算公式 每克樣品中的菌落數(shù) 某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù) 涂布平板所用稀釋液體積 稀釋倍數(shù) 設(shè)置重復(fù)組 目的是增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性 將待測(cè)樣品經(jīng)一系列10倍稀釋 然后選擇三個(gè)稀釋度的菌液 分別取0 1ml接種到已制備好的平板上 然后用無(wú)菌涂布器將菌液涂布在整個(gè)平板表面 放在適宜的溫度下培養(yǎng)計(jì)數(shù)菌落數(shù) 為是結(jié)果接近真實(shí)值 可將同一稀釋度菌液加到三個(gè)或三個(gè)以上的平板上 經(jīng)涂布培養(yǎng) 計(jì)算出菌落平均數(shù) 操作 2 顯微鏡直接計(jì)數(shù)法 1 原理 此法利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板 在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物數(shù)量 2 方法 用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù) 計(jì)數(shù)板是特制的載玻片 其上有特定的面積為1mm2 高為0 1mm的計(jì)數(shù)室 一個(gè)計(jì)數(shù)室又被分成25個(gè) 或16個(gè) 中格 每個(gè)中格再被分成16個(gè) 或25個(gè) 小格 每個(gè)計(jì)數(shù)室都由400個(gè)小格組成 3 操作 將稀釋的樣品滴在計(jì)數(shù)板上 蓋上蓋玻片 然后在顯微鏡下計(jì)數(shù)4 5個(gè)中格中的細(xì)菌數(shù) 并求出每個(gè)小格所含的細(xì)菌數(shù) 再按計(jì)數(shù)公式求出每毫升樣品中所含的細(xì)菌數(shù) 4 計(jì)算公式每毫升原液所含細(xì)菌數(shù) 每小格平均細(xì)菌數(shù)x400x10000x稀釋倍數(shù) 5 缺點(diǎn) 不能區(qū)分死菌與活菌 3過(guò)濾膜法 以測(cè)定飲用水中大腸桿菌的數(shù)目為例 將已知體積的水過(guò)濾后 將濾膜放在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)液基上培養(yǎng) 在該培養(yǎng)基上 大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)黑色 可以根據(jù)培養(yǎng)基上黑色菌落的數(shù)目 計(jì)算出水樣中大腸桿菌的數(shù)量 思考題 1 想一想 如何從平板上的菌落數(shù)推測(cè)出每克樣品中的菌落數(shù) 答 統(tǒng)計(jì)某一稀釋度下平板上的菌落數(shù) 最好能統(tǒng)計(jì)3個(gè)平板 計(jì)算出平板菌落數(shù)的平均值 然后按課本旁欄的公式進(jìn)行計(jì)算 a同學(xué)的結(jié)果與其他同學(xué)不同 可能的解釋有兩種 一是由于土樣不同 二是由于培養(yǎng)基污染或操作失誤 三 設(shè)置對(duì)照 究竟是哪個(gè)原因 可以通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)證明 另一種方案 將a同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng) 作為空白對(duì)照 以證明培養(yǎng)基是否受到污染 通過(guò)這個(gè)事例可以看出 實(shí)驗(yàn)結(jié)果要有說(shuō)服力 對(duì)照的設(shè)置是必不可少的 實(shí)驗(yàn)方案有兩種 一種方案 可以由其他同學(xué)用與a同學(xué)一樣的土樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn) 如果結(jié)果與a同學(xué)一致 則證明a無(wú)誤 如果結(jié)果不同 則證明a同學(xué)存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問(wèn)題 四 實(shí)驗(yàn)案例 實(shí)驗(yàn)的具體操作步驟如下 1 土壤取樣從肥沃 濕潤(rùn)的土壤中取樣 先鏟去表層土3cm左右 再取樣 將樣品裝入事先準(zhǔn)備好的信封中 土壤中某樣品細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù) 2 設(shè)置重復(fù)組 目的是增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性 將待測(cè)樣品經(jīng)一系列10倍稀釋 然后選擇三個(gè)稀釋度的菌液 分別取0 1ml接種到已制備好的平板上 然后用無(wú)菌涂布器將菌液涂布在整個(gè)平板表面 放在適宜的溫度下培養(yǎng)計(jì)數(shù)菌落數(shù) 為是結(jié)果接近真實(shí)值 可將同一稀釋度菌液加到三個(gè)或三個(gè)以上的平板上 經(jīng)涂布培養(yǎng) 計(jì)算出菌落平均數(shù) 計(jì)算公式 每克樣品中的菌