高效液相色譜儀校驗規(guī)程.docVIP

標 準 文 件Standard document文件編號Document No.SOP-LOP-790-8/00高效液相色譜儀校驗規(guī)程Calibration SOP for HPLC頁 碼Page1 / 9狀 態(tài)Status正式Formal備 份 號Control No.起 草 人Written by起草日期Written date年 月 日頒發(fā)部門Issued department質量管理部Quality department審 核 人Reviewed by審核日期Reviewed date年 月 日批 準 人Approved by批準日期Approved date年 月 日生效日期Effective date年 月 日分發(fā)部門Distributed department：質量負責人 質量管理部 QA QC1、目的Objective：建立高效液相色譜儀內部校驗規(guī)程，確保校驗工作規(guī)范、順利進行。2、范圍Scope ：本規(guī)程適用于本公司使用的高效液相色譜儀（紫外-可見光檢測器/二極管陣列檢測器）的校驗。3、職責Responsibilities：3.1 培訓職責：本文件起草人或審核人或批準人負責對質量管理部全體人員培訓。3.2 QC：負責制定本規(guī)程，并對本規(guī)程的實施負責。3.3 QA：負責監(jiān)督和檢查本規(guī)程的實施。4、定義Definition：無。5、程序Procedures：5.1 依據(jù)國家計量校驗規(guī)程JJG 705-2002液相色譜儀，安捷倫液相說明書，島津液相說明書。5.2 備件及材料5.2.1水：HPLC級水。5.2.2化學試劑：乙腈（HPLC）、丙酮（分析純）。5.2.3咖啡因標準品。5.2.4咖啡因標樣。0.005 mg/ml, 0.010 mg/ml, 0.025 mg/ml,0.050 mg/ml,0.125 mg/ml和0.250 mg/ml咖啡因水溶液。5.2.5色譜柱： 4.6mm250mm，C18，5m。5.2.6 容量瓶：10ml。5.2.7玻璃注射器。5.2.8 限流阻尼管。5.2.9 分析天平。5.2.10 秒表。5.2.11 熱電偶5.3 校驗項目及技術指標5.3.1泵性能的測試表1校 驗 項 目指 標流量設定值(ml/min)0.51.01.52.02.5流量設定值誤差，|SS |5%2%2%2%2%流量穩(wěn)定性誤差，SR 3%2%2%2%2%5.3.2柱溫箱溫度穩(wěn)定性測試*表2校 驗 項 目指 標溫度設定值 ()2025303540溫度設定值誤差|T|2控溫穩(wěn)定性誤差TC 1備注：如藥典專論規(guī)定的特定柱溫，不在以上溫度范圍之內，則對分析該品種的儀器增加該溫度點校驗，校驗項目和可接受指標相同。5.3.3 檢測器性能測試表3 校 驗 項 目指 標基線噪聲：510-4AU基線漂移：510-3AU/h波長準確度：|2nm線性測試： 相關系數(shù)R 響應因子f的RSD 0.9995.0%5.3.4進樣器性能測試表4校 驗 項 目指 標進樣器精密度測試：定性重復性(Rt)RSD定性 1.0%定量重復性(峰面積) RSD定量 2.0%自動進樣器線性測試*： 相關系數(shù)R響應因子f的RSD0.9995.0%5.3.5梯度組成的測試*表5校 驗 項 目指 標梯度準確度|TSH-MSH|2%梯度準確度的精密度0.5%注：*表示該項目的內部校驗取決于儀器的配置，有該配置則為必檢項目。5.4 校驗方法5.4.1校驗通則5.4.1.1 HPLC的內部校驗由儀器所屬部門經(jīng)培訓的使用者按本規(guī)程進行校驗，其校驗項目依儀器配置和使用范圍而定。5.4.1.2 政府部門每一年對HPLC進行校驗，每六個月內部對HPLC進行一次校驗；儀器配置的關鍵部件大修或更換后，可參考本規(guī)程對該部件相關的項目進行校驗，以對儀器的性能進行確認。5.4.1.3 校驗時，同時檢查、確認儀器的安裝，使用環(huán)境符合要求，儀器處于正常的狀態(tài)下，并檢查、確認儀器的接線牢固，接地良好。5.4.1.4 不同配置的儀器，須按照規(guī)定的校驗項目及指標進行內部校驗，以保證該儀器的所有使用功能均進行了校驗。5.4.2 泵性能的測試SS和SR的測定5.4.2.1 測試條件： 流動相：水；色譜柱：限流阻尼管。5.4.2.2 測試：分別設定流速為0.5ml/min， 1.0ml/min，1.5ml/min，2.0ml/min，2.5ml/min等值進行校驗，這些流速覆蓋了實驗室使用的流速范圍。待流速穩(wěn)定后，在流動相流出口處用容量瓶準確地收集流動相10.0ml，同時用秒表計時，各測量3次，按公式(1)、(2)計算SS和SR，并以下表所列內容記錄測試數(shù)據(jù)和結果。表6 泵性能的測試 泵流量設定值： 流動相體積： 次數(shù)項目123收集時間t(秒)流量實測值Fm(ml/min)泵流量設定值誤差SS泵流量穩(wěn)定性誤差SR5.4.3柱溫箱溫度穩(wěn)定性測試T 和Tc的校驗5.4.3.1測試將測溫儀之熱電偶固定在柱溫箱中央，關好柱箱門。以限流阻尼管替代色譜柱，分別設定柱溫箱溫度為20，25，30，35，40等值進行校驗，這些溫度覆蓋了實驗室使用的柱溫范圍。待測溫儀指示溫度穩(wěn)定后，記錄溫度顯示值，每隔5分鐘測一次，每個溫控點測定1小時，求出平均值，并以下表所列內容記錄測試數(shù)據(jù)和結果。設定值與平均值之差為設定值誤差T，13次測量值中最大值與最小值之差為控溫穩(wěn)定性誤差Tc。表7 柱溫箱溫度穩(wěn)定性測試溫度設定值： 次數(shù)項目12345678910111213平均值溫度實測值設定值誤差T穩(wěn)定性誤差Tc5.4.4 檢測器性能測試5.4.4.1基線漂移和基線噪聲的測試5.4.4.1.1 測試條件 檢測波長：254nm；流動相：水；流速：1.0ml/min；色譜柱：4.6mm250mm，C18，5m。5.4.4.1.2測試按不同的儀器配置，設定檢測器的靈敏度為較靈敏值。待系統(tǒng)平衡后，調整基線在圖譜的中部位置，記錄基線30分鐘。以圖譜顯示的刻度值或靈敏度與積分儀的匹配關系，計算基線噪聲和漂移值。基線噪聲為峰峰噪聲，選擇最大的噪聲作為基線噪聲。計算方法：基線噪聲圖譜單位距離對應的吸光度AU噪聲峰峰間的垂直距離。漂移值為30分鐘內噪聲的最高值和最低值之間垂直距離L對應的吸光度AU。計算方法：漂移值圖譜單位距離對應的吸光度AUL/0.5h。5.4.4.2 波長準確度的測試5.4.4.2.1 DAD/PDA的測試取咖啡因標樣2)進樣，記錄色譜圖和200nm400nm范圍內的紫外吸收圖譜，其205nm處的最大吸收處波長與205nm比較，其273nm處的最大吸收處波長與273nm比較，最小吸收處的波長與245nm比較，三波長處的差值|均應2nm。5.4.4.2.2 UV檢測器的測試a.具備紫外圖譜掃描功能的檢測器：以水流過流通池時作一空白掃描，然后，以手動方式將咖啡因標樣2)注入流通池，掃描200nm300nm范圍內的紫外吸收圖譜。記錄咖啡因最大吸收和最小吸收處的波長，其205nm處的最大吸收波長與205nm比較，其273nm處的最大吸收波長與273nm比較， 最小吸收波長與245nm比較，三波長處的差值|均應2nm。b.不具備紫外圖譜掃描功能的檢測器：以水注入流通池調零，然后，將咖啡因標樣2)注入流通池，通過設定不同波長，記錄205nm、245nm、273nm三個波長上下各5個nm范圍內的吸收度A或流通池參比能量R與樣品能量S的比值，205nm、273nm波長處各取該波長范圍內最大的吸收值或比值對應的波長為測定波長；245nm波長處取該波長范圍內最小的吸收值或比值對應的波長為測定波長。測定波長分別與對應的波長205nm、245nm、273nm比較，三波長處的差值|均應2nm。5.4.4.2.3 線性測試a測試條件流速：1.5ml/min； 流動相：水-乙腈=85：15； 檢測波長：273nm；色譜柱：4.6mm250mm，C18，5m。b測試待系統(tǒng)平衡后， 分別取咖啡因標樣1)、2)、3)、4)、5)、6)，手動進樣器依儀器配置之定量環(huán)的體積進樣，記錄色譜圖。以標樣濃度Ci為橫坐標，以咖啡因峰面積Ai為縱坐標作線性回歸，得其線性方程及相關系數(shù)R。對各標樣濃度的響應因子fi進行數(shù)理統(tǒng)計，按公式（3）計算其RSD。其中fi =Ci/Ai。5.4.5 進樣器性能測試5.4.5.1 定性、定量重復性的測試a.測試條件流速：1.5ml/min；流動相：水-乙腈=85：15；檢測波長：273nm；色譜柱：4.6mm250mm，C18，5m。b.測試取咖啡因標樣5)（濃度為0.125mg/ml），自動進樣器以5l，10l，20l的體積各連續(xù)進樣6次；手動進樣器依儀器配置之定量環(huán)的體積連續(xù)進樣6次，記錄色譜圖，以咖啡因峰的保留時間和峰面積，按公式(3)計算相對標準偏差 RSD，并以下表所列內容記錄測試數(shù)據(jù)和結果。表8 定性、定量重復性的測試進樣體積次數(shù)n123456平均值RSD保留時間(min)峰面積5.4.5.2 線性測試a測試條件流速：1.5ml/min； 流動相：水-乙腈=85：15； 檢測波長：273nm；色譜柱：4.6mm250mm，C18，5m。b測試取咖啡因標樣3)（濃度為0.025mg/ml），分別以5l，10l，15l，20l，25l的體積進樣，記錄色譜圖。以進樣體積V i為橫坐標，以咖啡因峰面積Ai為縱坐標作線性回歸，得其線性方程及相關系數(shù)R。對各進樣體積對應的響應因子fi進行數(shù)理統(tǒng)計，按公式（3）計算其RSD。其中fi =Vi/Ai。 5.4.6 梯度組成測試5.4.6.1 測試條件流速： 2.0ml/min；流動相1：水；流動相2： 0.5% 丙酮的水溶液；檢測波長：265nm；色譜柱：限流阻尼管。5.4.6.2 測試以限流阻尼管替代色譜柱，以流動相1平衡系統(tǒng)，通道A、B匹配（或通道C、D匹配），按下表之梯度程序，平行測試3次，記錄色譜圖。將色譜圖按0%到100%B（或D）重新標定刻度，以測定每個梯級的理論高度（TSH）與實測高度（MSH），見圖1“梯度組成準確度示意圖”，其差值（TSH-MSH）即為準確度，以%B（或D）單位表示。取3次測定中50.0%B、6.0%B和5.0%B（或D）等值的準確度進行數(shù)理統(tǒng)計，計算其準確度的精密度SD。表9 梯度測試程序表時間(分)%通道A(或C)：流動相1%通道 B (或 D) ：流動相21.001000.01.010.01006.000.01006.0110.090.09.0010.090.09.0111.089.012.0011.089.012.0149.051.016.0049.051.016.0150.050.019.0050.050.019.0194.06.023.0094.06.023.0195.05.026.0095.05.026.01100.00.0圖1 梯度組成準確度示意圖5.5 計算公式SS=(Fm-Fs)/Fs100% (1)SR=(Fmax-Fmin)/ F100% (2)其中：Fm=10.060/t為流量實測值(ml/min) t ：收集流動相的時間(秒)Fs ，F(xiàn)max，F(xiàn)min，F(xiàn) ：分別為同一組測量中流量設定值、流量最大值、最小值、平均值(ml/min)RSD=100% (3)SD= (4)5.6 結果及結論每臺HPLC校驗完畢，由QC主管對校驗記錄和結果進行復核，無誤后，依據(jù)該HPLC的配置，發(fā)出校驗報告，并交領導審核。6、參考資料References：