實(shí)驗(yàn) 黃連中小檗堿的提取、精制和鑒定.doc

實(shí)驗(yàn)四黃連中小檗堿的提取、精制和鑒定一、概述黃連系毛茛科黃連屬植物黃連（coptis chinensis Eranch.）的干燥根莖。黃連具有清熱燥濕、清心除煩，瀉火解毒的功效。黃連的有效成分主要是生物堿，已分離出的主要生物堿有小檗堿（berberine）、掌葉防己堿（palmatine）、黃連堿（jatrorrhizine）等。小檗堿有很強(qiáng)的抗菌作用，已廣泛地應(yīng)用于臨床。主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)：小檗堿為黃色針狀結(jié)晶，mp為154，游離的小檗堿能緩緩溶于水（1：20）及乙醇中（1：100），易溶于熱水及熱醇，難溶于乙醚，石油醚、苯、三氯甲烷等有機(jī)溶劑，其鹽在水中溶解度很小，尤其是鹽酸鹽。鹽酸鹽為l：500，枸櫞酸鹽1：125，酸性硫酸鹽1：100，硫酸鹽l：30，但在熱水中都比較容易溶解。小檗堿常以季銨堿形式存在，堿性強(qiáng)（pka11.53），能溶于水中，其水溶液有三種互變形式。 季銨式（紅棕色） 醇式（黃色） 醛式（黃色）小檗堿（黃連素）二、實(shí)驗(yàn)部分（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握小檗堿的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和理化性質(zhì)，以及一般的提取精制方法。2、掌握旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀的使用。3、熟悉鹽酸小檗堿的色譜鑒定和定性鑒定方法。（二）實(shí)驗(yàn)原理1、提取原理：小檗堿為異喹啉類小檗堿，結(jié)構(gòu)中的氮原子以季銨鹽形式存在，顯一定程度的親水性，因此游離小檗堿能溶與水(1:20)及乙醇(1:100)，熱水或熱乙醇中易溶，不溶于乙醚、氯仿、苯等有機(jī)溶劑。鹽酸小檗堿在沸水中溶解，在冷水中析出。2、分離原理：小檗堿與酸所成的鹽在水中的溶解度不盡相同，如硫酸小檗堿為(1:30)，酸性硫酸小檗堿為(1:100)，枸櫞酸小檗堿為(1:125)，而鹽酸小檗堿為(1:500)。本實(shí)驗(yàn)就是據(jù)游離小檗堿在水和乙醇中的溶解度較大，而其鹽酸鹽難溶于水的性質(zhì)進(jìn)行提取和精制的。（三）實(shí)驗(yàn)藥材、儀器與試劑1、藥材：黃連50g（每組）。2、儀器：回流裝置、水浴鍋、冰箱、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、燒杯（250ml）、抽濾裝置、濾紙、層析缸、濾紙、試管、電爐。3、試劑：75%乙醇、95%乙醇、蒸餾水、10%鹽酸、氯化鈉、乙醇、氯仿-甲醇-1/10鹽酸（1:1:1）、10%硫酸、漂白粉、10%氫氧化鈉、丙酮。（四）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1、小檗堿的提取取黃連粗粉50g，加入400ml75%的乙醇回流1.5h， 四層紗布過濾，藥渣用95%乙醇300ml回流1h， 四層紗布過濾，并用少量蒸餾水洗滌藥渣，合并兩次濾液和洗液，放于冰箱中。2、小檗堿的濃縮用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將小檗堿提取液濃縮至糖漿狀（小于50ml，無醇味）。3、鹽酸小檗堿的制備將濃縮液倒入100ml沸水中（換成250ml燒杯）煮沸至溶解（10min），趁熱抽濾，在濾液中加10%鹽酸，調(diào)制pH=2，加入氯化鈉10g，放入冰箱析晶。4、鹽酸小檗堿的精制（1）抽濾，得到鹽酸小檗堿粗品。（2）取粗品放入100ml沸水中，攪拌溶解，繼續(xù)加熱10min，趁熱抽濾，濾液放置過夜。（濾取結(jié)晶，先用少量1%鹽酸洗一次，再用少量蒸餾水洗數(shù)次，抽干，干燥后得到小檗堿精品。）5、鑒定（1）化學(xué)檢識(shí)取鹽酸小檗堿少許，加10%的H2SO42ml，溶解后加漂白粉少許，即顯櫻紅色。取鹽酸小檗堿約50mg，加蒸餾水5ml，水浴加熱，溶解后加10%氫氧化納試液2滴，顯橙色。溶液放冷過濾，取澄清濾液，加丙酮4滴，即發(fā)生渾濁。放置后，生成黃色的丙酮小檗堿沉淀。（2）紙層析鑒定樣品：1%醇溶液。（每組0.1g溶于10ml乙醇）標(biāo)準(zhǔn)品：1%鹽酸小檗堿醇溶液展開劑：氯仿甲醇1/10MHCL(1:1:1下行)顯色：自然光下觀察（五）實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)1、提取時(shí)兩次乙醇濃度不等，提醒學(xué)生不要加錯(cuò)。2、漂白粉加少許即可，否則影響結(jié)果3、紙條要保持