同型半胱氨酸申報(bào)書.doc

受理編號(hào)： 天津市科研院所技術(shù)開(kāi)發(fā)工作扶持經(jīng)費(fèi)項(xiàng) 目 申 報(bào) 書項(xiàng)目名稱： _柱前衍生化熒光HPLC全自動(dòng)檢測(cè)同型半胱氨酸試劑盒申報(bào)單位：_天津市半導(dǎo)體技術(shù)研究所_ _ 單位代碼：_401200345 _ 經(jīng)費(fèi)總額:_90萬(wàn)元_ 申請(qǐng)金額_45萬(wàn)元_ 單位負(fù)責(zé)人: _王皎瑜_ _聯(lián)系人電話:信箱_ _ 主管部門（蓋章）：_天津市科委直屬企事業(yè)管理處 _ 申請(qǐng)日期： _2011年7月_ _ 天津市科學(xué)技術(shù)委員會(huì)二八年制2一、 項(xiàng)目基本情況表項(xiàng)目負(fù)責(zé)人姓名性別身份證號(hào)碼職稱聯(lián)系方式王皎瑜級(jí)工程目技術(shù)領(lǐng)域電子信息生物技術(shù)光機(jī)電一體化新能源材料其他:（請(qǐng)注明）項(xiàng)目創(chuàng)新形式 原始創(chuàng)新 集成創(chuàng)新 引進(jìn)消化吸收再創(chuàng)新 其他:（請(qǐng)注明）項(xiàng)目前期已投入資金 20萬(wàn)元計(jì)劃新增投入資金 90萬(wàn)元項(xiàng)目申請(qǐng)專項(xiàng)資金 45萬(wàn)元項(xiàng)目階段（起止時(shí)間）2011年 7月2012年6月項(xiàng)目主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)（請(qǐng)分條簡(jiǎn)要敘述，多個(gè)創(chuàng)新點(diǎn)可續(xù)表）1.本項(xiàng)目建立的HPLC法簡(jiǎn)易、快速、準(zhǔn)確，自動(dòng)化程度高，無(wú)須增加特種設(shè)備，使用帶有自動(dòng)進(jìn)樣器的普通二元梯度高效液相色譜儀，檢測(cè)器為熒光檢測(cè)器。2.與其它方法比較，本法受其它因素干擾較小，在所有檢測(cè)方法中是血樣用量最少的，甚至可用耳指微量血樣測(cè)定。3.本項(xiàng)目建立的柱前衍生化方法，是不受環(huán)境光照影響，無(wú)需避光操作。4本方法與常規(guī)心血管多項(xiàng)指標(biāo)有很高的符合率，比雅培的免疫學(xué)方法靈敏度高。5配套試劑的生產(chǎn)工藝、原料全面實(shí)現(xiàn)國(guó)產(chǎn)化，替代進(jìn)口，大幅度降低檢測(cè)成本。項(xiàng)目完成后成果體現(xiàn) 發(fā)明專利 新工藝 其他（請(qǐng)注明） 新產(chǎn)品（新材料） 新技術(shù)項(xiàng)目成果轉(zhuǎn)化效果(指項(xiàng)目完成一年后)年產(chǎn)值（萬(wàn)元）300年繳稅（萬(wàn)元）30年凈利潤(rùn)（萬(wàn)元）60預(yù)計(jì)產(chǎn)品市場(chǎng)前景 很好 較好 一般 較差 不好預(yù)測(cè)二、項(xiàng)目可行性分析（簡(jiǎn)述）項(xiàng)目基本情況（150字）建立柱前衍生化HPLC方法，測(cè)定人體血液中的同型半胱氨酸含量，應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的心腦血管疾病尤其是動(dòng)脈粥樣硬化的診斷。本項(xiàng)目建立的HPLC法無(wú)須增加特種設(shè)備，使用帶有自動(dòng)進(jìn)樣器的普通高效液相色譜儀，檢測(cè)器為熒光檢測(cè)器。以其簡(jiǎn)易、快速、準(zhǔn)確，自動(dòng)化程度高的優(yōu)勢(shì)逐步形成取代傳統(tǒng)檢驗(yàn)項(xiàng)目的趨勢(shì)。本研究旨在針對(duì)HPLC檢測(cè)儀，建立其專用配套試劑盒的國(guó)產(chǎn)化生產(chǎn)工藝，形成自主品牌的配套試劑盒，降低臨床檢驗(yàn)成本。所研制的試劑盒產(chǎn)品由色譜柱、樣本處理液、衍生化試液、平衡緩沖液、梯度洗脫液、標(biāo)準(zhǔn)品和指控品等部分組成。項(xiàng)目實(shí)施必要性（150字）近年來(lái)，關(guān)于心血管疾病危險(xiǎn)度的指標(biāo)研究取得很大進(jìn)展，同型半胱氨酸過(guò)高已經(jīng)被公認(rèn)為心腦血管疾病的重要指征。在各種檢測(cè)方法中，HPLC法靈敏度、特異性、準(zhǔn)確性、重復(fù)性都很好，一旦實(shí)現(xiàn)儀器自動(dòng)化和試劑國(guó)產(chǎn)化，將在很大程度上替代進(jìn)口產(chǎn)品。我們開(kāi)發(fā)本項(xiàng)目的目的就是要建立其HPLC配套試劑盒的國(guó)產(chǎn)化生產(chǎn)工藝，形成自主品牌，提高我國(guó)同型半胱氨酸檢測(cè)的精準(zhǔn)化和自動(dòng)化的水平。本項(xiàng)目的完成，可以降低臨床檢驗(yàn)成本，減輕病人的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，并大大推動(dòng)新方法學(xué)在基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)的廣泛普及，其意義非常之重大。技術(shù)可行性（300字）HPLC工作原理經(jīng)典，其配套試劑較為簡(jiǎn)單，而在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域里應(yīng)用的僅為其簡(jiǎn)化版的設(shè)備，其特殊的要求在于：1、樣品的預(yù)處理；2、有效測(cè)定組分的分離度好；3、出峰時(shí)間要求短。自2000年，我單位介入臨床檢驗(yàn)領(lǐng)域，開(kāi)發(fā)研制了化學(xué)發(fā)光儀和生化分析儀配套試劑，鍛煉了一批在該領(lǐng)域研制開(kāi)發(fā)的人才隊(duì)伍，建立了廣泛的科研協(xié)作網(wǎng)，本所具備了完成該項(xiàng)目的基礎(chǔ)科研條件。另外本項(xiàng)目的基礎(chǔ)研究已經(jīng)取得實(shí)質(zhì)性突破，確定了柱填料材料及幾種試液的配方，剩余工作是生產(chǎn)工藝條件的建立、產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)的形成以及擴(kuò)大規(guī)模的臨床對(duì)照驗(yàn)證工作，因此，從基礎(chǔ)科研條件、人員能力、已經(jīng)取得的基礎(chǔ)研究成果，均具備了實(shí)現(xiàn)本項(xiàng)目最終目標(biāo)的可行性。實(shí)施條件及實(shí)施計(jì)劃（150字）我單位是天津市科委系統(tǒng)專業(yè)分析測(cè)試承擔(dān)單位，既往同類產(chǎn)品成功的研發(fā)，形成了獨(dú)特的研究路線，從原始創(chuàng)析、工藝優(yōu)化、標(biāo)準(zhǔn)確定、臨床驗(yàn)證、行政許可、直到成品上市各個(gè)環(huán)節(jié)均已形成獨(dú)立體系。該項(xiàng)目實(shí)施計(jì)劃按三個(gè)階段進(jìn)行：在建立最優(yōu)化工藝條件基礎(chǔ)上研究制定該產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)并完成登記備案；完成臨床驗(yàn)證；獲取產(chǎn)品行政許可。市場(chǎng)前景（100字）由于我國(guó)心腦血管疾病人群龐大，其市場(chǎng)的基數(shù)大，因此產(chǎn)品的市場(chǎng)容量非常可觀，另外本項(xiàng)目的創(chuàng)新點(diǎn)，使得本產(chǎn)品在眾多同類試劑盒中獨(dú)樹(shù)一幟，因此本項(xiàng)目的現(xiàn)行市場(chǎng)以及后續(xù)可擴(kuò)張的空間都十分廣闊，產(chǎn)品市場(chǎng)前景非常好。效益與風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)（100字）該項(xiàng)目填補(bǔ)國(guó)內(nèi)同類試劑生產(chǎn)的空白，縮短國(guó)內(nèi)試劑生產(chǎn)技術(shù)水平與國(guó)際先進(jìn)水平之間的差距，可替代進(jìn)口產(chǎn)品。本項(xiàng)目完成后一年內(nèi)產(chǎn)值達(dá)到300萬(wàn)元，年繳稅30萬(wàn)元，年純利60萬(wàn)元。該方法在國(guó)際上被認(rèn)為是所有檢測(cè)方法中最接近同型半胱氨酸真實(shí)水平的金標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)無(wú)需引進(jìn)新設(shè)備也符合中國(guó)國(guó)情，因此短期內(nèi)不會(huì)被淘汰而無(wú)市場(chǎng)風(fēng)險(xiǎn)。天津市科研院所技術(shù)開(kāi)發(fā)工作扶持經(jīng)費(fèi)項(xiàng)目預(yù)算書項(xiàng)目名稱：柱前衍生化熒光HPLC全自動(dòng)檢測(cè)同型半胱氨酸試劑盒_申報(bào)單位：（公章）_天津市半導(dǎo)體技術(shù)研究所 _單位負(fù)責(zé)人（打印、簽名）：_王皎瑜_ _項(xiàng)目負(fù)責(zé)人（打印、簽名）：_王皎瑜_財(cái)務(wù)負(fù)責(zé)人（打印、簽名）：_劉欣 _聯(lián)系電話：_23324466 _手機(jī)：_電子郵箱：_ _郵編：_300051 _天津市科學(xué)技術(shù)委員會(huì)制天津市科研院所技術(shù)開(kāi)發(fā)工作扶持經(jīng)費(fèi)項(xiàng)目預(yù)算表單位：萬(wàn)元（保留兩位小數(shù)）預(yù)算科目預(yù)算數(shù)申請(qǐng)數(shù)備注1234項(xiàng)目經(jīng)費(fèi)來(lái)源預(yù)算合計(jì)90.0045.00一、單位自籌45.000.00二、其他渠道0.000.00三、申請(qǐng)專項(xiàng)資金45.0045.00項(xiàng)目經(jīng)費(fèi)支出預(yù)算合計(jì)90.0045.00一、人員費(fèi)20.000.00二、設(shè)備費(fèi)15.0015.00附表1 1、儀器設(shè)備購(gòu)置費(fèi)5.05.00附表1.1 2、儀器設(shè)備更新改造費(fèi)10.010.0附表1.2三、能源材料費(fèi)42.0026.00附表2 1、原材料17.2021.00 2、測(cè)試及化驗(yàn)費(fèi)16.005.00 3、燃料及動(dòng)力費(fèi)2.500.00 4、低值易耗品6.300.00四、資料費(fèi)1.000.00附表3五、外協(xié)加工費(fèi)8.004.00附表4六、會(huì)議差旅費(fèi)2.000.00七、其他費(fèi)用2.000.00附表5注：所有附表按預(yù)算數(shù)編報(bào)28附表1.1天津市科研院所技術(shù)開(kāi)發(fā)工作扶持經(jīng)費(fèi) 設(shè)備購(gòu)置費(fèi)預(yù)算明細(xì)表單位：萬(wàn)元（保留兩位小數(shù)）序號(hào)儀器設(shè)備名稱設(shè)備型號(hào)主要技術(shù)性能指標(biāo)單價(jià)購(gòu)置數(shù)量總價(jià)生產(chǎn)廠家購(gòu)置理由、用途備注1超純水機(jī)基因型2.2012.30重慶摩爾配制流動(dòng)相用超純水制備2半自動(dòng)灌裝機(jī)1-10000mL可調(diào) 磁力泵0.9032.70上海柯寶流動(dòng)相灌裝3456合計(jì)5.00注：進(jìn)口設(shè)備要注明是到岸價(jià)、離岸價(jià)及稅費(fèi)情況附表1.2天津市科研院所技術(shù)開(kāi)發(fā)工作扶持經(jīng)費(fèi)儀器設(shè)備更新改造費(fèi)預(yù)算明細(xì)表維修改造設(shè)備名稱 單位：萬(wàn)元（保留兩位小數(shù)）名 稱單位計(jì)劃數(shù)量單價(jià)金額用途備注維修改造設(shè)備所用材料（列明細(xì)）過(guò)濾設(shè)備改造套41.204.80用于成品液體凈化HPLC自動(dòng)進(jìn)樣器維修改造套12.002.00適合柱前衍生化攪拌罐改造個(gè)40.803.204種溶液產(chǎn)品配制費(fèi)用合計(jì)10.00附表2天津市科研院所技術(shù)開(kāi)發(fā)工作扶持經(jīng)費(fèi)能源材料費(fèi)預(yù)算明細(xì)表 單位：萬(wàn)元（保留兩位小數(shù)）單位計(jì)劃 數(shù)量單價(jià)金額用途備注一、原材料（列明細(xì)）柱填料篩選優(yōu)化種50.126.00確定柱填料4種試液試產(chǎn)種41.204.80確定試液組方標(biāo)準(zhǔn)品；對(duì)照用試劑套套160.406.40標(biāo)準(zhǔn)曲線；結(jié)果對(duì)照二、測(cè)試及化驗(yàn)費(fèi)（列明細(xì)）臨床對(duì)照試驗(yàn)人份16000.0116.00臨床符合性對(duì)照三、燃料及動(dòng)力費(fèi)（列明細(xì)）電1.80水0.70四、低值易耗品（列明細(xì)）HPLC管件1.80儀器易損件軟包裝材料0.60HPLC樣品瓶2.80樣本測(cè)試槍頭、試管等1.10日常實(shí)驗(yàn)消耗合計(jì)42.00附表3天津市科研院所技術(shù)開(kāi)發(fā)工作扶持經(jīng)費(fèi)資料費(fèi)預(yù)算明細(xì)表單位：萬(wàn)元（保留兩位小數(shù)）序號(hào)資料名稱金額文字說(shuō)明1標(biāo)準(zhǔn)查詢復(fù)印0.402專利查詢復(fù)印0.403國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)檢索0.80456合計(jì)1.00附表4天津市科研院所技術(shù)開(kāi)發(fā)工作扶持經(jīng)費(fèi)外協(xié)加工費(fèi)預(yù)算明細(xì)表 單位：萬(wàn)元（保留兩位小數(shù)）材料名稱單位加工數(shù)量加工單價(jià)金額用途備注包裝桶模具、加工套12.502.50流動(dòng)相包裝物樣品瓶模具費(fèi)、加工費(fèi)套12.902.90自動(dòng)上樣樣品瓶密封件模具、加工套30.601.80色譜柱配套密封件包裝箱模具、加工套10.800.80產(chǎn)品外包裝箱合計(jì)8.00附表5天津市科研院所技術(shù)開(kāi)發(fā)工作扶持經(jīng)費(fèi)其他費(fèi)用預(yù)算明細(xì)表單位：萬(wàn)元（保留兩位小數(shù)）序號(hào)支出內(nèi)容金額與項(xiàng)目目標(biāo)的相關(guān)性文字說(shuō)明臨床對(duì)照試驗(yàn)方案?jìng)惱砦瘑T會(huì)審批費(fèi)2.00臨床試驗(yàn)得以實(shí)施的必要程序：方案1.00萬(wàn)元，倫理委員會(huì)審批費(fèi)1.00萬(wàn)元。合計(jì)2.00天津市科研院所技術(shù)開(kāi)發(fā)工作扶持經(jīng)費(fèi)項(xiàng)目可行性報(bào)告一、 項(xiàng)目摘要建立柱前衍生化HPLC方法，測(cè)定人體血液中的同型半胱氨酸含量，應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的心腦血管疾病尤其是動(dòng)脈粥樣硬化的診斷。本項(xiàng)目建立的HPLC法無(wú)須增加特種設(shè)備，使用帶有自動(dòng)進(jìn)樣器的普通高效液相色譜儀，檢測(cè)器為熒光檢測(cè)器。以其簡(jiǎn)易、快速、準(zhǔn)確，自動(dòng)化程度高的優(yōu)勢(shì)逐步形成取代傳統(tǒng)檢驗(yàn)項(xiàng)目的趨勢(shì)。本研究旨在針對(duì)HPLC檢測(cè)儀，建立其專用配套試劑盒的國(guó)產(chǎn)化生產(chǎn)工藝，形成自主品牌的配套試劑盒，降低臨床檢驗(yàn)成本。所研制的試劑盒產(chǎn)品由色譜柱、樣本處理液、衍生化試液、平衡緩沖液、梯度洗脫液、標(biāo)準(zhǔn)品和指控品等部分組成。二、 項(xiàng)目的目的和意義近年來(lái)，關(guān)于心血管疾病危險(xiǎn)度的指標(biāo)研究取得很大進(jìn)展，一個(gè)新的獨(dú)立的心血管疾病危險(xiǎn)指標(biāo)同型半胱氨酸（homocysteine，HCY）受到重視和關(guān)注。同型半胱氨酸，是氨基酸半胱氨酸的異種，在旁鏈部份硫醇基（-SH）前包含一個(gè)額外的亞甲基（-CH2-）。同型半胱氨酸的額外亞甲基使硫醇基更接近羧基，令它能起動(dòng)化學(xué)反應(yīng)形成一個(gè)五元環(huán)，稱為同型半胱氨酸硫內(nèi)酯。當(dāng)氨基酸正常地與它的毗鄰形成一個(gè)肽鍵就會(huì)產(chǎn)生這種反應(yīng)。所以同型半胱氨酸是不適合與蛋白質(zhì)混合，這是因含有同型半胱氨酸的蛋白質(zhì)會(huì)自行分解。同型半胱氨酸為一種含硫氨基酸，是蛋氨酸代謝過(guò)程中的重要中間產(chǎn)物，其結(jié)構(gòu)式為HSCH2（NH2）COOH。血漿中存在氧化型和還原型兩種形式的HCY，氧化型含二硫鍵，包括同型胱氨酸和胱氨酸；還原型含巰基，包括同型半胱氨酸及半胱氨酸。正常機(jī)體存在少量同型半胱氨酸，還原型僅占2%。目前，同型半胱氨酸過(guò)高已經(jīng)得到國(guó)際公認(rèn)是心腦血管疾病的重要指標(biāo)，這是基于對(duì)同型半胱氨酸的致病機(jī)理方面已經(jīng)有了較為深入的研究。雖然過(guò)量膽固醇沉積是造成動(dòng)脈壁損傷的直接原因，但是臨床上膽固醇的水平并不能作為動(dòng)脈粥樣硬化疾病的指標(biāo)，這是因?yàn)槟懝檀荚趧?dòng)脈壁的堆積與多種脂蛋白，尤其是低密度脂蛋白和高密度脂蛋白有著密切的聯(lián)系。根據(jù)研究，如果當(dāng)體內(nèi)同型半胱氨酸代謝紊亂，濃度升高，就會(huì)形成同型半胱氨酸巰基內(nèi)酯，可與低密度脂蛋白形成復(fù)合體，隨后被巨噬細(xì)胞吞噬，形成堆積動(dòng)脈粥樣硬化斑塊上的泡沫細(xì)胞。而且，同型半胱氨酸還可自發(fā)氧化，形成超氧化物和過(guò)氧化氫，這些產(chǎn)物會(huì)導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞的損傷和低密度脂蛋白的氧化，并可造成血管平滑肌持續(xù)性的收縮，引起缺氧，從而加速動(dòng)脈粥樣硬化。不僅如此，同型半胱氨酸自發(fā)形成的巰基內(nèi)酯化合物，可以和反式視黃酸共同引起血小板的凝集，與此同時(shí)，同型半胱氨酸巰基內(nèi)酯還可引起血栓素（TXB2）以及6-酮-前列腺素（PGF1R）的形成。這樣就會(huì)促進(jìn)血凝塊的形成，從而引起臨應(yīng)酬上常見(jiàn)的梗塞性疾病。當(dāng)然，同型半胱氨酸還可通過(guò)誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞中新的mRNA的形成，使動(dòng)脈壁平滑肌細(xì)胞增殖，并造成動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞的脫落，加速粥樣硬化的過(guò)程。目前，在評(píng)價(jià)和預(yù)測(cè)動(dòng)脈粥樣硬化程度時(shí)，血清同型半胱氨酸水平測(cè)定敏感性及可信度均高于其他血脂檢查項(xiàng)目。最早檢測(cè)血清中同型半胱氨酸的方法是氨基酸分析法，但目前常用方法包括以下幾種：1、同位素法：通過(guò)14C標(biāo)記的腺苷與HCY縮合后，經(jīng)色譜分離，液體閃爍計(jì)數(shù)放射強(qiáng)度來(lái)測(cè)HCY濃度。該方法靈敏度高，特異性強(qiáng)，但操作繁瑣且有放射性污染，未能推廣使用。2、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）法：可同時(shí)測(cè)定半胱氨酸、蛋氨酸、胱硫醚和甲基甘氨酸等多種物質(zhì)。雖然靈敏度、特異性好，但儀器價(jià)格昂貴而不能推廣。3、高效液相色譜法（HPLC）是目前比較成熟且推廣使用的方法， HPLC根據(jù)衍生方式（柱前或柱后衍生）、檢測(cè)方法（熒光、電化學(xué)）可分為多種方法。HPLC法靈敏度、特異性、準(zhǔn)確性、重復(fù)性都很好，缺點(diǎn)是手工操作繁瑣，方法和質(zhì)控需要標(biāo)準(zhǔn)化。而一旦實(shí)現(xiàn)儀器自動(dòng)化，這兩項(xiàng)缺陷便可迎刃而解。4、免疫學(xué)法：該法應(yīng)用特異性的抗S-腺苷同型半胱氨酸單克隆技術(shù)，采用熒光偏振法或免疫法測(cè)定HCY。美國(guó)雅培公司采用全自動(dòng)熒光偏振免疫技術(shù)，用AXSYM儀器檢測(cè)HCY，反應(yīng)原理為：正常人血漿中HCY約1%以還原型存在，70%與白蛋白結(jié)合，30%形成小分子二硫化物。血漿標(biāo)本在含二硫蘇糖醇的預(yù)處理液作用下，HCY、混合的二硫化物及蛋白結(jié)合型等均被還原成游離HCY形式（tHCY）：tHCY在S-腺苷-L-同型半胱氨酸（SAH）水解酶和過(guò)量腺苷存在下，被轉(zhuǎn)換成SAH；預(yù)稀釋的SAH混合物、抗-SAH單克隆抗體及標(biāo)記的熒光S-腺苷-L-半胱氨酸示蹤物一同孵育，儀器自動(dòng)檢測(cè)偏振光的改變，即可測(cè)出標(biāo)本總HCY水平。此方法快捷、操作簡(jiǎn)單、自動(dòng)化程度高，可減少人為誤差，具有良好的準(zhǔn)確度與精密度，適合大多數(shù)臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用。但是除了儀器昂貴，短時(shí)間內(nèi)不易普及外，其檢測(cè)品種單一，且靈敏度較HPLC法差。5、酶轉(zhuǎn)換免疫測(cè)定法：這種方法也需要將同型半胱氨酸先轉(zhuǎn)化為S腺苷同型半胱氨酸，然后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的單克隆抗體，最后加入辣根過(guò)氧化物酶的底物，并在450nm處檢測(cè)。加入蛋氨酸與半胱氨酸對(duì)檢測(cè)結(jié)果均無(wú)影響，無(wú)交叉反應(yīng)。這種方法的檢測(cè)結(jié)果與高效液相的檢測(cè)結(jié)果比較，相關(guān)系數(shù)為0.986;經(jīng)過(guò)Bland-Altman Plot方法比較的差異值小于2s。市面上的國(guó)產(chǎn)試劑多用此法，在所有方法中最不準(zhǔn)確。我們開(kāi)發(fā)本項(xiàng)目的目的就是要建立HPLC配套試劑盒的國(guó)產(chǎn)化生產(chǎn)工藝，形成自主品牌，提高我國(guó)同型半胱氨酸檢測(cè)的精準(zhǔn)化和自動(dòng)化的水平。本項(xiàng)目的完成，可以降低臨床檢驗(yàn)成本，減輕病人的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，并大大推動(dòng)新方法學(xué)在基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)的廣泛普及，其意義非常之重大。三、 項(xiàng)目實(shí)施方案（一） 項(xiàng)目主要研究?jī)?nèi)容1、 HPLC試劑盒（包括色譜柱及相應(yīng)試液）（1）色譜柱的制備采用150mm4.6mm的反相C18柱,準(zhǔn)備5種C18填料，進(jìn)行比較和優(yōu)化。(2)與色譜柱配套使用的試液有四種A、樣品處理液：硼氫化鈉、二甲基亞砜和氫氧化鈉的溶液，含有EDTA、二巰基蘇糖醇、1-辛醇、鹽酸。其配比需優(yōu)化。B、衍生化試液：用巰基熒光劑bromobimane衍生化,方法較為簡(jiǎn)單，該法的衍生化過(guò)程全部在高效液相自動(dòng)加樣器內(nèi)進(jìn)行。C、平衡緩沖液：pH3.6的硝酸銨和甲酸銨緩沖液。D、梯度洗脫液：色譜純乙腈（梯度級(jí)）和平衡緩沖液用線性梯度洗脫，找出洗脫條件后，可配置幾種比例的梯度洗脫液，使本試劑盒對(duì)儀器的要求由二元梯度泵降低為單泵加流動(dòng)相自動(dòng)轉(zhuǎn)換器。2、 質(zhì)量對(duì)照產(chǎn)品（1）同型半胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)品。（2）同型半胱氨酸質(zhì)控品。（2）美國(guó)雅培公司的同型半胱氨酸全自動(dòng)熒光偏振免疫試劑盒。3、檢驗(yàn)血樣（1）來(lái)自醫(yī)院心血管疾病門診患者及體檢對(duì)象。由于同型半胱氨酸在血液中以多種形式存在，所以標(biāo)本的收集和處理就比較重要。所采集的抗凝血液應(yīng)立即分離出血漿。（2） 國(guó)家藥監(jiān)局同型半胱氨酸質(zhì)控血樣。4、測(cè)定方法：本HPLC法采用柱前衍生化熒光檢測(cè)技術(shù)，熒光檢測(cè)器激發(fā)波長(zhǎng)365nm,熒光檢測(cè)波長(zhǎng)475nm。首先將樣品處理液加入標(biāo)本中，室溫下混勻1分鐘后，再加入含有衍生化試液，混勻1分鐘后進(jìn)樣。進(jìn)樣前用平衡緩沖液走基線,然后用乙腈進(jìn)行梯度洗脫。半胱氨酸和同型半胱氨酸的保留時(shí)間大概分別為3.76和4.14分鐘。此方法靈敏度高，最低檢測(cè)限可達(dá)50nmol/L。5、數(shù)據(jù)處理（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線法：以同型半胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性擬合可達(dá)0.99。用CurveExpert軟件計(jì)算樣本濃度。（2）比值法：用峰面積計(jì)算同型半胱氨酸和半胱氨酸的比值，通過(guò)臨床樣本檢測(cè)，確定正常值和異常值范圍。（二） 項(xiàng)目擬采用的關(guān)鍵技術(shù)及其工藝路線工藝路線在已經(jīng)完成的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)基礎(chǔ)上，重點(diǎn)形成和完善各功能組分的生產(chǎn)工藝條件。1、專用柱填柱工藝：在已經(jīng)確定填料類型的基礎(chǔ)上，結(jié)合臨床對(duì)照結(jié)果重點(diǎn)完成：a、確定在生產(chǎn)條件下的填柱工藝；b、填料在生產(chǎn)環(huán)境中的前處理方案；c、裝柱的工藝條件，成品柱的各項(xiàng)指標(biāo)不低于試驗(yàn)室指標(biāo)。2、樣品處理液、衍生化試液、平衡緩沖液、梯度洗脫液的配制工藝：在試驗(yàn)室方案的基礎(chǔ)上，結(jié)合臨床對(duì)照結(jié)果，建立最佳生產(chǎn)工藝條件。3、形成產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)：在生產(chǎn)條件下，重復(fù)并實(shí)現(xiàn)試驗(yàn)室的產(chǎn)品質(zhì)量參數(shù)，形成產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)。具體實(shí)施方案圖示如下：衍生化試液配制工藝： 放大配制后的效果試驗(yàn)；配制工藝條件。流動(dòng)相配制工藝： 放大配制的效果； 配制工藝條件。填柱工藝： 填料的生產(chǎn)比例； 填料的處理?xiàng)l件； 裝柱的工藝參數(shù)。同條件對(duì)照驗(yàn)證邊調(diào)整邊驗(yàn)證單組分臨床對(duì)照驗(yàn)證邊調(diào)整邊驗(yàn)證單組分臨床對(duì)照驗(yàn)證邊調(diào)整邊驗(yàn)證確定樣品處理液、衍生化試液的工藝條件確定平衡緩沖液、梯度洗脫液的工藝條件確定填柱工藝條件完善并形成全套工藝條件形成產(chǎn)品企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)形成成品試劑盒關(guān)鍵技術(shù)1、 色譜填料和色譜條件需要進(jìn)一步篩選優(yōu)化，使其適合同型半胱氨酸的分離度要求。2、 樣品處理和衍生化試劑（包括各種流動(dòng)相）的配比，多條件同時(shí)優(yōu)化時(shí)的矩陣設(shè)計(jì)。3、 根據(jù)實(shí)測(cè)臨床值及與質(zhì)控、美國(guó)雅培產(chǎn)品的符合度，微調(diào)試劑盒各組分的配方，使其最大限度的具有臨床指導(dǎo)意義。4、 在自動(dòng)進(jìn)樣器上進(jìn)行柱前衍生化的樣本自動(dòng)處理，使方法測(cè)定由手工化向自動(dòng)化過(guò)渡。5、 生產(chǎn)規(guī)模由小量實(shí)驗(yàn)室級(jí)別向生產(chǎn)車間中試級(jí)別的放大。（三） 項(xiàng)目主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)1、 本項(xiàng)目建立的HPLC法簡(jiǎn)易、快速、準(zhǔn)確，自動(dòng)化程度高，無(wú)須增加特種設(shè)備，使用帶有自動(dòng)進(jìn)樣器的普通高效液相色譜儀，檢測(cè)器為熒光檢測(cè)器。2、 與其它方法比較，本法受其它因素干擾較小，在所有檢測(cè)方法中是血樣用量最少的，甚至可用耳指微量血樣測(cè)定。3、 本項(xiàng)目建立的柱前衍生化方法，是不受環(huán)境光照影響的，無(wú)需避光操作。4、 本方法與常規(guī)心血管多項(xiàng)指標(biāo)有很高的符合率，比雅培的免疫學(xué)方法靈敏度高。5、 配套試劑的生產(chǎn)工藝、原料全面實(shí)現(xiàn)國(guó)產(chǎn)化，替代進(jìn)口，大幅度降低檢測(cè)成本。四、 項(xiàng)目主要技術(shù)、經(jīng)濟(jì)考核指標(biāo)及項(xiàng)目進(jìn)度安排1、項(xiàng)目主要技術(shù)考核指標(biāo)臨床質(zhì)量參數(shù)：（n=10）對(duì)照組平行偏差 2% 批間誤差 5% 批內(nèi)誤差 3% 方法精密度 2% 依照上述數(shù)據(jù)形成產(chǎn)品技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)。2、項(xiàng)目主要經(jīng)濟(jì)考核指標(biāo)主要經(jīng)濟(jì)考核指標(biāo)是產(chǎn)品投產(chǎn)當(dāng)年實(shí)現(xiàn)值：產(chǎn)品實(shí)現(xiàn)銷售 300萬(wàn)元上繳稅金 30萬(wàn)元實(shí)現(xiàn)利潤(rùn) 60萬(wàn)元3、項(xiàng)目進(jìn)度安排色譜柱篩選 2011年7月至2011年10月4種溶液配制工藝 2011年11月至2012年5月臨床對(duì)照實(shí)驗(yàn) 2012年6月至2013年2月形成產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn) 2013年3月至2013年6月五、 承擔(dān)單位現(xiàn)有基礎(chǔ)條件天津市半導(dǎo)體技術(shù)研究所由于本市理化分析中心設(shè)在該所，多年來(lái)一直從事分析方法研究，分析測(cè)試服務(wù)及新產(chǎn)品剖析研制等工作。該所擁有一批先進(jìn)的大型精密分析儀器，多年來(lái)有多項(xiàng)科研成果獲本市科技進(jìn)步獎(jiǎng)，基礎(chǔ)管理扎實(shí)，人員科研經(jīng)驗(yàn)豐富，有良好的基礎(chǔ)科研條件。自2000年，我單位介入臨床檢驗(yàn)領(lǐng)域，開(kāi)發(fā)研制了化學(xué)發(fā)光儀和生化分析儀配套試劑，并已取得天津市藥監(jiān)局的生產(chǎn)許可，試劑水平居于國(guó)內(nèi)領(lǐng)先，我們利用自身的分析測(cè)試優(yōu)勢(shì)，在取得了免疫檢驗(yàn)試劑開(kāi)發(fā)的寶貴經(jīng)驗(yàn)和市場(chǎng)信息的同時(shí)，鍛煉了一批在該領(lǐng)域研制開(kāi)發(fā)的人才隊(duì)伍，成功地完成了全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)配套試劑的開(kāi)發(fā)研究工作，項(xiàng)目產(chǎn)品已推向市場(chǎng)并獲得了經(jīng)濟(jì)效益。與此同時(shí)我們與包括北京協(xié)和醫(yī)院、湖南湘雅醫(yī)院、天津市第一中心醫(yī)院建立了科研協(xié)作關(guān)系。我們相信在市科委的支持下，通過(guò)我們的努力和該項(xiàng)目的研制一定會(huì)取得可觀的社會(huì)經(jīng)濟(jì)效益。項(xiàng)目負(fù)責(zé)人王皎瑜 男 46歲 分析化學(xué)專業(yè) 高級(jí)工程師 所長(zhǎng)負(fù)責(zé)全所科研與生產(chǎn)，有豐富的專業(yè)技術(shù)，一直從事化學(xué)分析測(cè)試科研工作。曾主持“無(wú)電解鍍銅液研制”、“灤河砂作鑄造型砂研究”、“渤海海上油井注水水源調(diào)查”、“化學(xué)發(fā)光儀配套試劑開(kāi)發(fā)”、“ 全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)配套試劑的開(kāi)發(fā)研究”等多項(xiàng)課題，并主持理化分析中心商檢認(rèn)證、計(jì)量認(rèn)證、司法鑒定認(rèn)證工作。主要成員簡(jiǎn)介郝永傳 男 51歲 電子專業(yè) 高級(jí)工程師 研究室主任一直從事分析測(cè)試方法研究和分析測(cè)試服務(wù)工作，曾主持多項(xiàng)產(chǎn)品剖析開(kāi)發(fā)工作，參與化學(xué)發(fā)光儀配套試劑和生化分析儀配套試劑研制開(kāi)發(fā)工作，全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)配套試劑的開(kāi)發(fā)研究，在專業(yè)分析刊物上發(fā)表多篇論文。趙明輝 男 40歲 生物化學(xué)專業(yè) 副研究員 碩士生導(dǎo)師南開(kāi)大學(xué)生物化學(xué)學(xué)士；中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)分子核醫(yī)學(xué)碩士；香港大學(xué)李嘉誠(chéng)醫(yī)學(xué)院進(jìn)修2年。承擔(dān)過(guò)國(guó)家自然科學(xué)基金、天津市科委技術(shù)平臺(tái)項(xiàng)目、天津市自然科學(xué)基金等科研課題的負(fù)責(zé)人。有多項(xiàng)成果、專利、論文。喬迎君 女 36歲 生物工程專業(yè) 工程師多年來(lái)一直從事酶聯(lián)免疫、放射免疫試劑盒的生產(chǎn)，任生產(chǎn)主管，參與了多種試劑盒的開(kāi)發(fā)研制工作，自參加工作，始終在生產(chǎn)一線從事生產(chǎn)工藝的設(shè)計(jì)和改造以及生產(chǎn)管理工作，尤其見(jiàn)長(zhǎng)于試驗(yàn)室與生產(chǎn)之間的過(guò)渡，目前還承擔(dān)著特殊血液培養(yǎng)基的中試工作。劉慧 女 29歲 生物工程專業(yè) 碩士研究生畢業(yè)于河北工業(yè)大學(xué)，自研究生課題開(kāi)始，始終在生產(chǎn)一線從事生產(chǎn)工藝的設(shè)計(jì)和改造，尤其見(jiàn)長(zhǎng)于試驗(yàn)室與生產(chǎn)之間的過(guò)渡，目前還承擔(dān)著特殊血液培養(yǎng)基的研發(fā)與生產(chǎn)工藝設(shè)計(jì)工作。六、 項(xiàng)目經(jīng)費(fèi)預(yù)算及資金籌措項(xiàng)目總投資：90萬(wàn)元人民幣。其中：人員費(fèi)： 20 萬(wàn)元王皎瑜 高級(jí)工程師 5000元/月 10個(gè)月 郝永傳 高級(jí)工程師 4500元/月 10個(gè)月趙明輝 副研究員 4000元/月 12個(gè)月喬迎君 工程師 3500元/月 12個(gè)月劉慧 碩士研究生 2500元/月 6個(gè)月設(shè)備費(fèi)： 15 萬(wàn)元設(shè)備購(gòu)置費(fèi) 5萬(wàn)元 設(shè)備改造費(fèi) 10 萬(wàn)元能源材料費(fèi)： 42 萬(wàn)元原材料費(fèi)： 17.2 萬(wàn)元測(cè)試及化驗(yàn)費(fèi)： 16 萬(wàn)元燃料及動(dòng)力費(fèi)： 2.5 萬(wàn)元低值易耗品： 6.3 萬(wàn)元資料費(fèi)： 1 萬(wàn)元外協(xié)加工費(fèi)： 8 萬(wàn)元會(huì)議差旅費(fèi)： 2 萬(wàn)元其它費(fèi)用： 2 萬(wàn)元 資金籌措方式及來(lái)源資金籌措及來(lái)源渠道：自籌和撥款相結(jié)合。項(xiàng)目總投資：90萬(wàn)元人民幣。其中自籌：45萬(wàn)元人民幣，申請(qǐng)專項(xiàng)撥款：45萬(wàn)元人民幣。七、 項(xiàng)目預(yù)期的經(jīng)濟(jì)、成果效益分析及項(xiàng)目擴(kuò)大應(yīng)用前景項(xiàng)目成果的經(jīng)濟(jì)效益分析心腦血管疾病是一種嚴(yán)重威脅人類，特別是50歲以上中老年人健康的常見(jiàn)病。全世界每年死于心腦血管疾病的人數(shù)高達(dá)1500萬(wàn)人，居各種死因首位，它已成為人類死亡病因最高的頭號(hào)殺手。心腦血管疾病具有“發(fā)病率高、致殘率高、死亡率高、復(fù)發(fā)率高,并發(fā)癥多” 即“四高一多”的特點(diǎn)，目前，我國(guó)心腦血管疾病患者已經(jīng)超過(guò)2.7億人。 近些年，同型半胱