「采樣方法(手和皮膚黏膜消毒效果監(jiān)測)」.doc

3.17.6 手和皮膚黏膜消毒效果監(jiān)測3.17.6.1 采樣時間:在消毒后立即采樣。3.17.6.2 采樣方法(1) 手的采樣:被檢人五指并攏，用浸有含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液的棉拭子在雙手指屈面從指根到指端往返涂擦 2 次(一只手涂擦面積約 30cm2)，并隨之轉(zhuǎn)動采樣棉拭子，剪去操作者手接觸部位，將棉拭子投入 10ml 含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液試管內(nèi)，立即送檢。(2) 皮膚粘膜采樣:用 5cm5cm 的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板，放在被檢皮膚處，用浸有含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液的棉拭子 1 支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各 5 次，并隨之轉(zhuǎn)動棉拭子，剪去手接觸部位后，將棉拭子投入 10ml 含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液的試管內(nèi)，立即送檢。不規(guī)則的粘膜皮膚處可用棉拭子直接涂擦采樣。3.17.6.3 檢測方法(1) 細(xì)菌總數(shù)檢測:將采樣管在混勻器上振蕩20s或用力振打 80 次，用無菌吸管吸取 1.0ml 待檢樣品接種于滅菌平皿，每一樣本接種2個平皿，內(nèi)加入已溶化的 4548 的營養(yǎng)瓊脂 15ml18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，置 361溫箱培養(yǎng) 48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)。采樣結(jié)果計(jì)算方法： 平板上菌落數(shù) 稀釋倍數(shù) 細(xì)菌總數(shù)(cfu/cm2)采樣面積(cm2)(2) 致病菌檢測:按3.17.15的原則執(zhí)行。3.17.6.4 結(jié)果判定(1) 消毒洗手 、類區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)5cfu/cm2，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單孢菌為消毒合格。類區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)10cfu/cm2，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為消毒合格。類區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)15cfu/cm2，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為消毒合格。母嬰同室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的工作人員手上，不得檢出沙門菌、大腸桿菌、溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌為消毒合格。(2)皮膚黏膜:參照手的衛(wèi)生學(xué)標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。3.17.6.5 注意事項(xiàng)皮膚粘膜采樣處，若表面不足 5cm5cm 可用相應(yīng)面積的規(guī)格板采樣。3.17.7 物品和環(huán)境表面消毒效果的監(jiān)測3.17.7.1 采樣時間:在消毒處理后進(jìn)行采樣。3.17.7.2 采樣方法:用 5cm5cm 的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板，放在被檢物體表面，采樣面積100cm2，連續(xù)采樣 4 個，用浸有含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液的棉拭子 1 支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各 5 次，并隨之轉(zhuǎn)棉拭子，剪去手接觸部位后，將棉拭子投入 10ml含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液試管內(nèi)，立即送檢。門把手等不規(guī)則物體表面用棉拭子直接涂擦采樣。3.17.7.3 檢測方法 (1) 細(xì)菌總數(shù)檢測:檢測方法按 3.17.6.3（1） 執(zhí)行。小型物體表面的結(jié)果計(jì)算，用 cfu/件表示。(2) 致病菌檢測:檢測方法按3.17.15原則執(zhí)行。3.17.7.4 結(jié)果判定、類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)5cfu/cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。類區(qū)域細(xì)菌：總數(shù)10cfu/cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。類區(qū)域細(xì)菌：總數(shù)15cfu/cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。母嬰同室、早產(chǎn)兒室、嬰兒室、 新生兒室及兒科病房的物體表面不得檢出沙門菌。3.17.7.5 注意事項(xiàng)(1) 采樣時間:按 3.17.5.1 執(zhí)行。(2) 樣本量及處理:按 3.17.5.2(1) 執(zhí)行。3.17.8 空氣消毒效果的監(jiān)測3.17.8.1 采樣時間:在消毒處理后、操作前進(jìn)行采樣。3.17.8.2 采樣方法：平板暴露法(1) 布點(diǎn)方法:室內(nèi)面積30m2，設(shè)內(nèi)、中、外對角線3點(diǎn)，內(nèi)、外點(diǎn)布點(diǎn)部位距墻壁1M處；室內(nèi)面積30m2，設(shè) 4 角及中央 5 點(diǎn)，4 角的布點(diǎn)部位距墻壁 1m 處。(2) 采樣方法:將普通營養(yǎng)瓊脂平板(直徑為 9cm)放在室內(nèi)各采樣點(diǎn)處，采樣高度為距地面 1.5m 采樣時將平板蓋打開，扣放于平板旁，暴露 5min，蓋好立即送檢。3.17.8.3 檢測方法:按照2.1.3 要求進(jìn)行。平板暴露法結(jié)果計(jì)算公式：細(xì)菌總數(shù)（cfu/m3）=50000N/（A T）式中A為平板面積（cm2）；T為平板暴露時間（min）；N為平均菌落數(shù)（cfu）。3.17.8.4 結(jié)果判定類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)10cfu/m3(或0.2cfu/平板)，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格；類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)200cfu/m3(或4cfu/平板)，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格；類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)500cfu/m3(或10cfu/平板)，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格。3.17.8.5 注意事項(xiàng)采樣前，關(guān)好門、窗，在無人走動的情況下，靜止10min 進(jìn)行采樣。3.17.9 消毒液的監(jiān)測3.17.9.1 常用消毒液有效成分測定（1）有效氯含量測定：按 2.2.1.2.1 的方法進(jìn)行。（2）有效碘含量的測定：按 2.2.1.2.2 的方法進(jìn)行。 上二種消毒劑的簡易濃度試紙測定法按 4.3.5.2 的方法進(jìn)行；水中余氯測定按 4.3.5.3 的方法進(jìn)行。（3）戊二醛（C5H8O2）含量的測定：按2.2.1.2.8的方法進(jìn)行。（4）過氧化氫(H2O2)濃度的測定：按2.2.1.2.4的方法進(jìn)行。（5）過氧乙酸 (C2H4O3) 濃度的測定：按2.2.1.2.3的方法進(jìn)行。 （6）二氧化氯 (ClO2) 含量的測定：按2.2.1.2.6的方法進(jìn)行。（7）二溴海因含量測定：按2.2.1.2.6的方法進(jìn)行。（8）乙醇含量測定：按2.2.1.2.10的方法進(jìn)行。（9）醋酸氯己定( C22H30Cl2N102C2H4O2) 含量的測定：2.2.1.2.11的方法進(jìn)行。（10）臭氧含量測定：按2.2.1.2.5的方法進(jìn)行。（11）苯扎溴銨含量測定：按2.2.1.2.12的方法進(jìn)行。3.17.9.2 使用中消毒液染菌量測定(1) 檢測方法：1）涂抹法:用無菌吸管吸取消毒液 1.0ml，加入 9.0ml 含有相應(yīng)中和劑的采樣管內(nèi)混勻，用無菌吸管吸取上述溶液 0.2ml，滴于干燥普通瓊脂平板，每份樣品同時做2個平行樣，一平板置 20 培養(yǎng) 7d，觀察霉菌生長情況，另一個平板置35溫箱培養(yǎng) 72h記數(shù)菌落數(shù)，同時按 3.17.15的原則檢測致病菌。消毒液染菌量(cfu/ml)每個平板上的菌落數(shù) 502）傾注法：用無菌吸管吸取消毒液 1.0ml，加入到 9.0ml 含相應(yīng)中和劑的無菌生理鹽水采樣管中混勻，分別取 0.5ml 放入 2 只滅菌平皿內(nèi)，加入已熔化的 4548 的營養(yǎng)瓊脂 15ml18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，一平板置 20培養(yǎng) 7d，觀察霉菌生長情況;另一個平板置361培養(yǎng) 72h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)，同時按 3.17.15的原則檢測致病菌。消毒液染菌量(cfu/ml)每個平板上的菌落數(shù) 20(2) 結(jié)果判斷:消毒液染菌量100cfu/ml，并未檢出致病菌為合格。(3) 注意事項(xiàng):采樣后 1h 內(nèi)檢測。3.17.10 餐具消毒效果監(jiān)測3.17.10.1 采樣時間:在消毒后、使用前進(jìn)行采樣。3.17.10.2 采樣方法:將 2.0cm2.5cm 滅菌濾紙片于無菌洗脫液中浸濕均勻，貼在食具表面，經(jīng) 5min 取下，每10張濾紙合為一份樣本(相當(dāng)于 50cm2采樣面積)，投入含 50ml生理鹽水的 100ml 三角燒瓶中，于 4h 內(nèi)送檢。3.17.10.3 檢測方法(1) 細(xì)菌總數(shù)的檢測:按3.17.6.3.(1) 執(zhí)行。(2) 大腸菌群的檢測:取 1ml 采樣液，加入相應(yīng)的單倍或雙倍乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，置 37溫箱培養(yǎng) 24h，若乳糖膽鹽發(fā)酵管不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，則可報(bào)告大腸菌群陰性。 如果有疑慮則進(jìn)行分離培養(yǎng)。3.11.5.5 紡織品: 細(xì)菌總數(shù)5cfu/cm2，大腸菌群未檢出。3.17.10.5 注意事項(xiàng):餐具若用化學(xué)消毒劑消毒，采樣液中應(yīng)加入相應(yīng)中和劑。3.17.11 衛(wèi)生潔具消毒效果監(jiān)測(1) 采樣時間:在消毒后、使用前進(jìn)行采樣。(2) 采樣方法:便器、尿壺等容器可用沾有含相應(yīng)中和劑的無菌生理鹽水的棉拭子，反復(fù)涂擦容器的內(nèi)表面及內(nèi)口處，剪去手接觸部位后，將棉拭子投入 5ml 無菌生理鹽水試管中，立即送檢。拖把、抹布等物品可用無菌的方法剪取 1cm3cm，直接投入 5ml 含相應(yīng)中和劑的無菌生理鹽水中，立即送檢。(3)檢測方法:將采樣管在混勻器上振蕩20s或用力振打 80 次，取采樣液按 3.17.15的原則檢測致病菌。(4)結(jié)果判定:未檢出致病菌為消毒合格.3.17.12 內(nèi)鏡消毒滅菌效果的監(jiān)測3.17.12.1 采樣時間:在消毒滅菌后、使用前進(jìn)行采樣。3.17.12.2 采樣方法:用沾有含相應(yīng)中和劑的無菌生理鹽水的棉拭子，在被檢內(nèi)鏡上從鏡頭至鏡身反復(fù)涂擦，剪去手接觸部位，將棉拭子投入到 5ml 含相應(yīng)中和劑的生理鹽水采樣管中，立即送檢。3.17.12.3 檢測方法(1)細(xì)菌總數(shù)的檢測:按3.17.6.3.(1)執(zhí)行。(2)致病菌檢測:將采樣管在混勻器上振蕩20s或用力振打 80 次，按3.17.15原則檢測致病菌。3.17.12.4 結(jié)果判定:滅菌后內(nèi)鏡，未檢出任何微生物為合格。消毒后的內(nèi)鏡，細(xì)菌總數(shù)20cfu/件，并未檢出致病菌為合格。3.17.12.5 注意事項(xiàng):采樣面積按3.17.7.2執(zhí)行。3.17.13 醫(yī)用污物消毒效果監(jiān)測3.17.13.1 采樣時間:在消毒后、清運(yùn)前進(jìn)行采樣。3.17.13.2 焚化消毒效果監(jiān)測:可焚化物品的消毒效果監(jiān)測，以污物燃燒充分、徹底為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行直接檢查。3.17.13.3 堿化消毒效果監(jiān)測:以熟石灰為消毒劑的堿化消毒，日常監(jiān)測以pH為指標(biāo)。 消毒后 30min 檢查 pH 值，若pH =12，繼續(xù)作用 24h 為消毒合格。3.17.13.4 氯化消毒效果監(jiān)測:氯化消毒效果的日常監(jiān)測，以余氯量為指標(biāo)，在消毒接觸時間 2h 后測定余氯量，余氯量200mg/L，為消毒合格。3.17.13.5 其它消毒因子消毒效果監(jiān)測。(1)采樣方法:取 1ml 消毒后待檢污物(固體稱取 2g)，置于 5ml 含相應(yīng)中和劑的無菌生理鹽水的采樣管中，立即送檢。(2)檢測方法:將采樣管在混勻器上振蕩20s或用力振打80次，取采樣液按17.15原則檢測致病菌。3.17.13.6 結(jié)果判定:未檢出致病菌為消毒合格。3.17.14 織物消毒效果監(jiān)測3.17.14.1 采樣時間:在消毒烘干后進(jìn)行采樣。3.17.14.2 采樣方法:按3.17.7.2的原則執(zhí)行。3.17.14.3 檢測方法:按 3.17.15的原則檢測致病菌。3.17.14.4 結(jié)果判定:未檢出致病菌為消毒合格。3.17.15 致病菌的檢測3.17.15.1 檢測原則:致病菌的檢測依據(jù)污染情況進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測。3.17.15.2 金黃色葡萄球菌檢測。(1)增菌、分離取采樣液 1ml，接種于 5ml SCDLP 液體培養(yǎng)基中，于361增菌 24h。取 1 白金耳上述增菌液，在血平板上作劃線分離，361培養(yǎng) 24h。(2)觀察菌落特征:在血瓊脂平板上菌落形態(tài)為金黃色、圓形凸起、 表面光滑、周圍有溶血圈。(3)鏡檢:挑取典型菌落作涂片染色鏡檢，鏡下為革蘭陽性、成葡萄狀排列的球菌。(4)生化反應(yīng):取可疑菌落作觸酶、葡萄糖發(fā)酵、血漿凝固酶、甘露醇發(fā)酵、新生霉素敏感試驗(yàn)，均為陽性者即為金黃色葡萄球菌。1）甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)：取上述可疑菌落接種于甘露醇培養(yǎng)基，于361培養(yǎng) 24 h，發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸者為陽性。2）血漿凝固試驗(yàn)：玻片法：潔凈玻片一端滴一滴滅菌生理鹽水，另一端滴一滴血漿，用白金耳挑取菌落分別與生理鹽水和血漿混勻，min 內(nèi)觀察有無固體顆粒狀物，若血漿出現(xiàn)凝塊，生理鹽水均勻混濁為陽性，兩者均混濁為陰性。試管法：吸取 1:4新鮮血 0.5ml，放在滅菌小試管中，再加入等量待檢菌 24h 肉湯培養(yǎng)物，混勻后放入361孵箱中，同時以已知血漿凝固酶陽性和陰性菌肉湯培養(yǎng)物作對照，每 30s.觀察一次，h 內(nèi)出現(xiàn)凝塊者為陽性。3.17.15.3 乙型溶血性鏈球菌檢測(1)增菌、分離:取樣品 1ml，接種于1葡萄糖肉湯，37增菌 24h。取 1 白金耳增菌液在血平板上作劃線分離，361培養(yǎng) 24h。(2)觀察菌落特征:菌落形態(tài)為灰白色、半透明或不透明、針尖狀突起、表面光滑、 邊緣整齊、周圍有溶血圈。(3)鏡檢:挑取典型菌落作涂片染色鏡檢，鏡下為革蘭陽性、呈鏈狀排列的球菌。(4)生化反應(yīng):取可疑菌落作如下生化試驗(yàn)，如觸酶陰性、 鏈激酶試驗(yàn)陽性、對桿菌肽敏感者，即為乙型溶血性鏈球菌。鏈激酶試驗(yàn)：吸取草酸鉀血漿 0.2ml（0.02g 草酸鉀加 5ml 人血漿混勻，經(jīng)離心沉淀，吸取上清），加入 0.8ml 滅菌生理鹽水混勻后再加入待檢菌 24h 肉湯培養(yǎng)物 0.5ml和 0.25% 氯化鈣 0.25ml，混勻，放入361水浴中，每 min 觀察一次（一般 10min內(nèi)可凝固），待血漿凝固后繼續(xù)觀察并記錄溶化的時間，如h 內(nèi)不溶化，移入孵箱觀察 24h 的結(jié)果，如全部溶化為陽性；24h 仍不溶解者為陰性。桿菌