初始污染菌回收率方法驗證.doc

公司代碼文件編號第 4 頁 共 4 頁類 別： 編 號： 部 門： 頁 碼： 初始污染菌回收驗證方案版 次： 新訂 替代: 制 定 人: 年 月 日審批會簽: 批 準(zhǔn) 人： 年 月 日生效日期： 年 月 日1驗證目的初始污染菌是產(chǎn)品屏障系統(tǒng)表面或內(nèi)的活微生物數(shù)量。初始污染菌回收率用于補償無法從產(chǎn)品和/或培養(yǎng)基中完全取出的微生物的數(shù)值。也是對某一特定的技術(shù)從產(chǎn)品上移除和/或培養(yǎng)微生物的能力的測定值。2適用范圍 適用于我公司一次性使用活檢鉗的初始污染菌的檢測3檢驗依據(jù)中國藥典2010版 附錄 微生物限度檢查法ISO11737-1:2006 醫(yī)療器械的滅菌 微生物學(xué)方法 第一部分：產(chǎn)品上微生物總數(shù)的測定GB/T19973-1 2005 醫(yī)療器械的滅菌 微生物學(xué)方法 第一部分：產(chǎn)品上微生物總數(shù)的估計GB15980-1995 一次性使用醫(yī)療用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)4實驗設(shè)備與材料4.1 設(shè)備百級超凈工作臺、無菌檢查膜過濾器、電動吸引器、電熱干燥箱、電熱恒溫培養(yǎng)箱、生化培養(yǎng)箱、壓力蒸汽滅菌器、電子天平、pH計、 冰箱。4.2 培養(yǎng)基及稀釋液營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基、pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液、0.1%蛋白胨溶液。4.3 其他實驗材料微孔濾膜（孔徑0.45um，直徑約50mm）、量筒、剪刀、鑷子、吸管、酒精燈、三角燒瓶、試管、培養(yǎng)皿。5實驗程序5.1 抽樣。從每個清洗批次的產(chǎn)品中隨機抽樣，抽取3件。5.2 洗脫在陰性實驗室里以無菌操作方式將實驗樣品分別浸入裝有已知容量的300ml的0.1%蛋白胨溶液的適當(dāng)容器中，運用手工振動法洗脫產(chǎn)品上的微生物，用于洗脫產(chǎn)品外表面初始污染菌。5.3 接種5.3.1 采用薄膜過濾法，將供試液平均倒入兩個濾杯中進行抽濾，用100ml(每張濾膜每次沖洗量) pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗濾膜，每張濾膜沖洗三次，將濾膜（菌面朝上）分別置于營養(yǎng)瓊脂和玫瑰紅鈉瓊脂平板上培養(yǎng)。將沖洗過的供試品以上述方法再沖洗兩次，共三次。再將剩余供試品加入滅菌好融化的50ml營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中作為瓊脂覆蓋。其余每條供試品逐一操作，方法同上。5.3.2 陰性對照實驗：僅使用同一批次滅菌0.1%蛋白胨溶液、pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液過濾，將濾膜（菌面朝上）分別置于營養(yǎng)瓊脂和玫瑰紅鈉瓊脂平板上培養(yǎng)作為陰性對照。5.4 培養(yǎng)溫度依據(jù)2010版中國藥典中的培養(yǎng)條件要求：細菌3035 3天 ，霉菌、酵母菌2328 5天。（必要時可適當(dāng)延長培養(yǎng)時間至7天）5.5 結(jié)果分析回收率=第一次沖洗得到的微生物數(shù)量/沖洗N次得到的微生物總數(shù)量*100%，回收率應(yīng)大于70%。件數(shù)菌數(shù)第一件第二件第三件第一次沖洗A1B1C1第二次沖洗A2B2C2第三次沖洗A3B3C3瓊脂覆蓋A4B4C4空白對照000總共菌落數(shù)A總B總C總第一次沖洗的回收率A1/A總B1/B總C1/C總根據(jù)上述數(shù)據(jù)，計算出第一次沖洗的回收率的平均數(shù)，以后每一季度監(jiān)測一次，初始污染菌的菌落報告，以得到菌落數(shù)/回收率的數(shù)值報告。6相關(guān)記錄產(chǎn)品名稱生產(chǎn)批號型號規(guī)格抽樣數(shù)量檢驗依據(jù)檢驗方法培養(yǎng)基名稱供應(yīng)商結(jié)論件